Обозначение ретикулоцитов в анализе крови

Для обозначения ретикулоцитов в анализе крови используется аббревиатура RET.

Но эти кровяные клетки исследуют в редких случаях, только если этого потребует врач. Тем, у кого этот показатель проставлен в результатах анализа, конечно, хочется выяснить, что он обозначает.

Какими клетками являются ретикулоциты?

Ретикулоцитами можно назвать клетки, из которых позже образуются эритроциты (красные кровяные тельца).

Но полноценными клетками они не являются, так как в них, как и в зрелых эритроцитах, отсутствует ядро.

Производство молодых эритроцитов происходит внутри красного костного мозга и полостей плоских костей.

Фото:

В ретикулоцитах, в отличие от зрелых эритроцитов, содержится очень мало гемоглобина, отчего они практически не играют никакой роли в жизнедеятельности организма.

Если организм функционирует нормально, костный мозг выбрасывает в кровеносные сосуды исключительно зрелые эритроциты.

Но при попадании в кровь малого числа ретикулоцитов не отмечается никаких патологических изменений.

Такое случается в периоды, когда костный мозг активизирует выработку эритроцитов и ретикулоцитов. Этот процесс носит название эритропоэза.

Когда молодые эритроциты оказываются вне костного мозга, они двигаются по сосудам в течение двух дней, а затем пополняются гемоглобином и преобразуются в зрелые красные кровяные тельца.

Молодые эритроциты созревают благодаря воздействию особого гормона – эритропоэтина, который производят и выводят в кровь почки.

Выброс эритропоэтина происходит в умеренных дозах, но при кислородном голодании почки могут выделить значительное количество этого гормона.

Фото:

В ситуации гибели эритроцитов в крови, чему могут послужить разные причины, костный мозг переходит к активной работе, производя на свет все больше новых молодых красных кровяных телец.

Костному мозгу необходимо вернуть организму прежнее число эритроцитов, ведь без них в ткани и органы не будет поступать кислород.

Чтобы оценить, как осуществляется этот процесс, и высчитывается число ретикулоцитов в крови.

По тому, насколько активно костный мозг транспортирует в кровь молодые эритроциты, судят о функциональности почек и костного мозга, а также о масштабах гибели зрелых эритроцитов.

Но подсчет ретикулоцитов не ведется при проведении обычного общего анализа. Для этого приходится назначать дополнительное исследование.

Принятое короткое обозначение молодых эритроцитов – RET, иногда RTC. Чаще всего количество молодых красных кровяных телец подсчитывают в процентном соотношении ко всем эритроцитам (RET).

Но если требуется, то производится точный подсчет их количества (RTC), что обозначается как «… х10⁹/Л».

Сколько ретикулоцитов должно быть в крови?

Норма количества молодых эритроцитов находится в зависимости от возрастных особенностей человека.

В крови детей, которые недавно появились на свет, в норме присутствует не менее 0,15 % ретикулоцитов, но их количество не должно составлять свыше 1,5 процентов.

Этого максимального значения молодые эритроциты достигают тогда, когда малышу исполняется две недели. В это время показатель RET составляет чуть больше двух процентов.

В крови деток, которым уже месяц или два, наблюдается меньший уровень молодых эритроцитов. Норма показателя RET в этого время – 1 %.

У детей дошкольного возраста значение RET должно составлять не более 0,7 процентов. С 6-7 лет этот показатель увеличивается, и составляет 1,3 процента.

С момента полового созревания (примерно в 12-13 лет) показатели RET у мальчиков и девочек начинают отличаться.

Поскольку настает время менструации и в организме юных девушек происходит гормональный сбой, клетки-предшественники эритроцитов производятся костным мозгом в значительном количестве.

Это естественное последствие потери крови во время менструации. У представительниц женского пола норма показателя RET составляет порядка 2,05 %, но не менее 0,12 %.

У мужской половины человечества количественное значение ретикулоцитов несколько ниже – максимум 1,7 %.

Подсчет процентного соотношения молодых эритроцитов ведется несколькими методами. Определить их количество можно посредством использования гематологического анализатора или микроскопа.

Если норма их содержания в крови нарушена, то говорят о патологиях костного мозга, печени, а также об анемии.

Повышение или понижение RET

Зачастую норма содержания ретикулоцитов в крови нарушается из-за появления гемолитической анемии. В этом случае количество молодых эритроцитов может увеличиться до 6 % и выше.

Такое случается в результате острого приступа, возникшего из-за выраженного гемолиза эритроцитов. Повлечь за собой превышение нормы содержания RET может большая потеря крови.

Обычно это выявляет анализ, проведенный через трое или четверо суток после обильной кровопотери.

Норма содержания молодых эритроцитов в жидкой соединительной ткани организма может отклониться в большую сторону, если человек болен малярией или полицитемией.

Видео:

Также это бывает последствием проведения лечебной терапии по устранению железодефицитной анемии.

То же самое часто наблюдается примерно через полторы недели после антианемического лечения от болезни Аддисона-Бирмера.

У людей, чей показатель RET отклонился от нормы, подозревают скрытое кровотечение. Такое случается у тех, кто страдают от острой кишечной инфекции (тифа) или мучаются с язвой желудка.

По мнению ученых, повышенный показатель RET свидетельствует об идеальном процессе регенерации лишь в том случае, если молодые эритроциты присутствуют в большом количестве не только в кровеносных сосудах, но и в костном мозге.

При отсутствии в костном мозге молодых красных кровяных телец, но их избытке в жидкой соединительной ткани организма говорят об усилении их гибели. В таком случае наблюдается ложный ретикулоцитоз.

Им сопровождаются такие недуги, как воспалительные процессы, образование злокачественных метастаз или раздражение некоторых зон костного мозга.

Когда норма содержания ретикулоцитов нарушена так, что они присутствуют в жидкой соединительной ткани в недостаточном количестве или вовсе отсутствуют, подозревают анемию, вызванную дефицитом витамина B12 и некоторых микроэлементов.

Кроме гипопластической, мегалобластной или сидеробластной анемии, низкий уровень RET служит доказательством аутоиммунного заболевания, талассемии или образования метастаз в кости.

Видео:

Норма содержания молодых эритроцитов нарушается из-за проведения лучевой терапии или возникновения лучевой болезни. Иногда падение уровня RET вызывает прием цитостатиков.

Причиной недостаточного количества молодых красных кровяных телец может быть патология почек и чрезмерное употребление спиртного.

Теперь можно сделать вывод, что ретикулоцитами являются клетки, которые вскоре преобразуются в эритроциты.

Если норма их содержания в жидкой соединительной ткани нарушена, то диагностируют проблемы с работой почек и костного мозга, анемию и рак.

Вы здесь:

Что такое ретикулоциты? Норма и обозначение в анализе крови.

Человеческая кровь имеет сложный состав: она состоит из жидкой плазмы, или межклеточного вещества форменных элементов крови часть из которых являются клетками а часть были ими на ранних стадиях своего развития, но позже утратили ядро и перестали быть клетками в научном смысле этого слова.

Это касается эритроцитов, то есть красных кровяных телец, у которых вместо ядра гемоглобин.

Эритроциты образуются в красном костном мозге, где их предшественниками являются клетки, все еще имеющие ядро.

Постепенно ядро разрушаются, и образуются эритроциты. Ретикулоциты такие клетки у которых ядро уже разрушено, но его остатки все еще сохраняются.

Ретикулоциты — то это?

Ретикулоциты предшественники эритроцитов, которые имеют поставьте-ка квадрат нуклеиновых кислот формирующие своеобразную сеточку внутри клетки, от которой они и получили свое название.

Слово «ретикулум» с латыни означает «сетка».

Около 1% всех эритроцитов в циркулирующей крови являются, являются недозрелыми, замершего на стадии ретикулоцитов.

При этом в течение одного-трех дней они проявляют способность дозревать в кровеносных сосудах.

Не дозревший ретикулоцит способен переносить кислород как и эритроциты, но эффективность будет значительно ниже из-за того, что в нем меньше гемоглобина. При массовой кровопотери количество ретикулоцитов в крови возрастает, потому что организм вынужден использовать недозрелые клетки для замены погибших эритроцитов.

Норма

У взрослых людей нормы ретикулоцитов могут отличаться в зависимости от пола. Так, у мужчин их количество составляет 0,24-1,7%, а у женщин – 0,12-2,05%.

Различие весьма существенное. Оно может быть ещё выше у женщин во время беременности, когда количество ретикулоцитов поднимается ещё сильнее. Но патологией это считать не нужно: со временем, после родов, число данных клеток вернётся к прежнему значению, каким оно было до беременности.

Обозначение

Ретикулоциты могут обозначаться в карточках анализа двумя способами, но в обоих случаях это сокращённое название самих клеток: RET или RTC. 

Мнение эксперта

Ковалева Елена Анатольевна

Врач-Лаборант. Опыт работы в клинико-диагностической службе 14 лет.

Задать вопрос эксперту

На английском языке они обозначаются как Retic count, reticulocyte index, или corrected reticulocyte, реже встречается reticulocyte count. Такое написание можно встретить в клиниках Европы и Израиля.

Выражается их число в процентах от общего количества всех эритроцитов в крови.

У ребёнка

У ребёнка количество ретикулоцитов меняется с возрастом. Рассмотрим нормальные показатели для разных категорий малышей в виде таблицы.

Возрастная категория	Норма
Новорожденные	0,15 – 1,5%
2 нед.	0,45 – 2,1%
1 — 2 мес.	0,25 – 0,9%
6 мес.	0,2 – 1%
2-6 лет	0,2 – 0,7%
6-12 лет	0,2 – 1,3%

У подростков старше 12-ти лет нормы такие же, как и у взрослых.

Причины повышения количества ретикулоцитов

1. Рост числа ретикулоцитов в человеческой крови бывает как отрицательным, так и положительным явлением.
2. В частности, высокие концентрации ретикулоцитов наблюдаются у пациентов во время лечения или профилактики такой хвори как фолиеводефицитная или железодефицитная анемия. Вскоре после начала лечения (примерно через неделю) костный мозг резко увеличивает количество производимых клеток-предшественников эритроцитов, которые потом созревают и становятся полноценными красными кровяными тельцами. Среди прочих предшественников растёт число и ретикулоцитов.
3. Не является опасным для человеческой жизни повышение концентрации данных клеток в результате кровотечения, ведь организм в таком случае просто восстанавливает свои потери. Главное, когда Вы получаете результаты анализа, сообщите о кровопотере врачу, чтобы он не поставил ложный диагноз.
4. А вот если не было ни лечения от анемии, ни кровопотерь, то повышения числа ретикулоцитов – тревожный симптом, свидетельствующий о гибели эритроцитов. Такое случается, например, при малярии или отравлениях гемолитическими ядами.
5. Ещё одна болезнь, при которой число ретикулоцитов резко растёт – рак костного мозга.

Причины снижения количества ретикулоцитов

1. Понижение количества ритекулоцитов может говорить о болезнях почек, а так же заболеваниях костного мозга.
2. Иногда происходит истощение костного мозга из-за длительной напряжённой работы, например, во время той же самой малярии. Истощённый костный мозг уже не в состоянии производить новые эритроциты, и число не дозревших ретикулоцитов так же падает до нуля.
3. Почечные недуги провоцируют только незначительно понижение концентрации ретикулоцитов.
4. Низкое содержание ретикулоцитов у хронических алкоголиков, ведь этанол угнетает работу костного мозга и повреждает почки.
5. Так же понижение ретикулоцитов может быть и следствием рака костного мозга (в некоторых случаях эта болезнь вызывает активизацию кроветворения, в других – полностью угнетает его).

Что делать и к кому обращаться?

Обращаться сначала к терапевту, который направит к нужному врачу дальше. Скорее всего, придётся проходить обследование на рак костного мозга и другие формы рака (поскольку иногда костный мозг становится объектом прорастания или метастазирования).

Отравления гемолитическими ядами, а тем более, малярия встречаются редко, и скорее всего, причина колебаний не в них.

Если причиной угнетения кроветворения стал алкоголизм, здесь нужна помощь нарколога, ибо без избавления от алкогольной зависимости нормализовать работу костного мозга

не получится.

Ну а после кровопотери, скорее всего, дополнительное лечение и не потребуется: назначат гематоген, сырые яблоки и красное вино.

Заключение

Таким образом, повышение концентрации ретикулоцитов в крови может быть признаком как физиологических процессов (беременности, восстановления после болезни), так и серьёзного заболевания (рак).

То же касается и понижения их числа, которое может наблюдаться при сильном истощении, алкоголизме и прочих болезнях.

Не паникуйте, если количество ретикулоцитов не соответствует норме: в период сразу после обнаружения нарушения нужно как можно скорее установить причину, ведь если это рак, то на ранних стадиях его можно вылечить.

загрузка…

Автор статьи

Врач-Лаборант. Опыт работы в клинико-диагностической службе 14 лет.

Написано статей

366

Отличная статья 0

Ретикулоциты — это… Что такое Ретикулоциты?

Эритроциты имеют розовую окраску с просветлением в центре^[1] Ретикулоциты имеют розовую окраску с синеватым оттенком^[1] Мазок крови больного гемолитической анемией при суправитальной окраске (англ.), выявляющей зернисто-нитчатую субстанцию (ретикулум) в молодых эритроцитах. Клетки с тёмно-синими вкраплениями или нитями в цитоплазме — ретикулоциты

Ретикулоци́ты (от лат. reticulum — сеточка и греч. κύτος — вместилище, клетка) — клетки — предшественники эритроцитов в процессе кроветворения, составляющие около 1 % от всех циркулирующих в крови эритроцитов.^[2] Так же, как и последние, не имеют ядра, но содержат остатки рибонуклеиновых кислот, митохондрий и других органелл, лишаясь которых трансформируются в зрелый эритроцит.^[3]

В отличие от эритроцитов, ретикулоциты имеют короткий срок жизни. Они формируются и созревают в красном костном мозге за 1—2 дня, после чего покидают его и ещё 1—3 дня дозревают в кроветоке.

[3]

Функции ретикулоцитов

Функция ретикулоцитов в целом аналогична функции эритроцитов, они также являются переносчиками кислорода, но их эффективность несколько ниже, чем у зрелых эритроцитов.

Клинико-диагностическое значение

Повышение количества ретикулоцитов в периферической крови свидетельствует о наличии кровопотери, или другой причины активации эритропоеза, при которой большее чем обычно количество незрелых клеток вынужденно покинуть костный мозг.

См. также

Примечания

1. ↑ ^{1 2} Андерсон Ш., Поулсен К. Часть I. Описание гемопоэтических клеток и форменных элементов крови // Атлас гематологии = Atlas of Hematology / Под ред. В. П. Сапрыкина. — М.: Логосфера, 2007. — С. 9—10. — 608 с. — 2000 экз. — ISBN 5-98657-009-X
2. ↑ Афанасьев Б. В., Волкова О. Я., Ганапиев А. А., Зарицкий А. Ю. и др. Глава 4. Анемии // Гематология: руководство для врачей / Под ред. Н. Н. Мамаева, С. И. Рябова. — СПб.: СпецЛит, 2008. — С. 24. — 543 с. — 1000 экз. — ISBN 978-5-299-00361-1
3. ↑ ^{1 2} Балашова В. А. Глава 3. Морфология и функции клеток костного мозга и крови // Гематология: новейший справочник / Под ред. К. М. Абдулкадырова. — М.—СПб.: Эксмо—Сова, 2004. — С. 53. — 928 с. — 3000 экз. — ISBN 5-699-05074-4

Общий анализ крови с ретикулоцитами

Навигация по статье:

Что такое Общий анализ крови с ретикулоцитами?

Непосредственные предшественники зрелых эритроцитов.

Ретикулоциты — это молодые эритроциты с остатками РНК, выявляемой при специ­альной (суправитальной) окраске. В отличие от эритроцитов, в которых при световой микроскопии не выявляются внутриклеточные структуры, в ретикулоцитах обнаружива­ются гранулярные и нитевидные образования.

Ретикулоциты образуются в костном моз­ге из нормобластов, где дозревают в течение 1-2 дней, после чего поступают в перифе­рическую кровь. Время созревания ретикулоцитов до зрелых эритроцитов в перифери­ческой крови около 2-х дней. При ускорении эритропоэза доля ретикулоцитов возраста­ет, а при замедлении снижается. В случае усиленного разрушения эритроцитов доля ре­тикулоцитов может превышать 50%. При резко ускоренном эритропоэзе в периферичес­кой крови могут появляться нормобласты (предшественники ретикулоцитов). Ретикуло­циты обнаруживаются у новорожденных в большем количестве, чем у взрослых. Количество ретикулоцитов отражает скорость производства эритроцитов в костном мозге. Их подсчет имеет значение для оценки степени активности эритропоэза. При напряженном эритропоэзе в кровь попадают молодые (костномозговые) ретикулоциты, которые про­должают дозревать, циркулируя в крови в течение более длительного времени (около 3-х суток). Кроме того, резкое снижение количества эритроцитов в периферической кро­ви может привести к искусственному завышению числа ретикулоцитов, так как послед­ние рассчитываются как % от всех эритроцитов. Поэтому для оценки тяжести анемии целесообразно использовать абсолютное количество ретикулоцитов или «ретикулоци-тарный индекс», который вычисляется по следующей формуле:

% ретикулоцитов х гематокрит больного/45х1,85

где: 45 — нормальный гематокрит, а 1,85 — количество суток, необходимых для пос­тупления новых ретикулоцитов в периферическую кровь. Индекс < 2 — свидетельство гипопролиферативного компонента анемии; индекс > 2-3 — свидетельство увеличения образования эритроцитов.

Почему важно делать Общего анализа крови с ретикулоцитами?

1. Подозрение на наличие гемолиза.

2. Оценка эффективности эритропоэза.

3. Мониторинг терапии препаратами железа, фолиевой кислоты, витамина В₁₂, эритропоэтином.

4. Мониторинг регенерации костного мозга после трансплантации.

При каких заболеваниях делается Общий анализ крови с ретикулоцитами?

1. Подозрение на наличие гемолиза.

2. Оценка эффективности эритропоэза.

3. Мониторинг терапии препаратами железа, фолиевой кислоты, витамина В₁₂, эритропоэтином.

4. Мониторинг регенерации костного мозга после трансплантации.

Для проверки/улучшения работоспособности каких органов нужно делать Общего анализа крови с ретикулоцитами?

Красный костный мозг, селезенка.

Как подготовиться к сдаче Общего анализа крови с ретикулоцитами?

Подготовка не требуется.

Материал для сдачи Общего анализа крови с ретикулоцитами

Цельная кровь (с ЭДТА).

Срок выполнения Общего анализа крови с ретикулоцитами

1 рабочий день.

Повышения нормы наблюдаются при следующих заболеваниях Общего анализа крови с ретикулоцитами

1. Кровопотеря или разрушение эритроцитов (увеличение в 3-6 раз).

2. Гемолитическая анемия (до 300%).

3. Лечение В1г-дефицитной анемии (ретикулоцитарный криз на 5-8 день терапии витамином B12). Количество ретикулоцитов при этом может повышаться до 200 %.

4. Эффективная терапия железодефицитных анемий препа­ратами железа (8-12 день лечения).

5. Талассемия.

6. Малярия.

7. Другие гематологичес­кие заболевания (полицитемия, метастазы рака в костный мозг).

8. Острое кислородное голодание.

Понижения нормы наблюдаются при следующих заболеваниях Общего анализа крови с ретикулоцитами

1. Апластическая анемия.

2. Гипопластическая анемия.

3. Неле­ченная B₁₂-дефицитная анемия.

4. Аутоиммунные заболевания системы кроветворения.

5. Алкоголизм.

6. Метастазы рака в кости.

7. Микседема.

8. Заболевания почек.

К каким докторам следует обращаться для консультаций по Общему анализу крови с ретикулоцитами?

• Терапевт;
• Хирург;
• Уролог;
• Гематолог.

Ретикулоциты

Унифицированный метод подсчета количества ретикулоцитов после окраски их бриллиантовым крезиловым синим, азуром I или азуром II непосредственно на стекле или в пробирке (1972).

Принцип.

Суправитальная окраска красителями, выявляющими зернисто-нитчатую субстанцию ретикулоцитов.

Реактивы. Можно использовать один из следующих красителей.

1.Насыщенный раствор бриллиантового крезилового синего в абсолютном спирте (для приготовления абсолютного спирта надо выдержать этанол 96 % в нескольких сменах прокаленного порошка медного купороса). На 100 мл абсолютного спирта берут 1,2 г краски.

2.Раствор азура I, предложенный П. Н. Кориковым: азур 1 — 1 г, аммония оксалат — 0,4 г, натрия хлорид- 0.8 г, этиловый спирт 96 % 10 мл, дистиллированная вода — 90 мл. Раствор краски в закрытом флаконе помещают на 2-3 дня в термостат при 37 °С и периодически энергично взбалтывают. Затем охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через бумажный фильтр. Раствор сохраняют в посуде из темного стекла. При появлении осадка краску следует снова профильтровать.

3.Раствор азура II следующего состава: азур II 1 г, натрия цитрат 5 г, натрия хлорид, 0,4 г, дистиллированная вода 45 мл. Раствор оставляют в термостате при 37 °С на 2 сут, периодически помешивая. Для ускорения растворения краску можно прогреть на слабом огне в течение 15- 20 мин, не доводя до кипения. Охлаждают до комнатной температуры и фильтрую). Хранят в посуде из темного стекла.

Специальное оборудование. Микроскоп.

Ход определения.

Окраска на стекле.

Хорошо вымытое и обезжиренное предметное стекло подогревают над пламенем горелки. Стеклянной палочкой наносят на стекло каплю одного из красителей и готовят мазок из краски шлифованным стеклом. Маркируют сторону стекла, на которую нанесен мазок краски, стеклографом. В таком виде стекла можно заготовить впрок и хранить в сухом темном месте. Наносят каплю крови на мазок краски, готовят из нее тонкий мазок и тотчас помещают во влажную камеру на 3—4 мин (можно пользоваться чашкой Петри с уложенными по краям валиками смоченной ваты или фильтровальной бумаги). Затем высушивают мазки на воздухе.

В приготовленных таким образом мазках эритроциты окрашены в желтовато-зеленоватый цвет, зернисто-нитчатая субстанция — в синий цвет.

Окраска в пробирке.

Метод 1: перед употреблением готовят в пробирке рабочий раствор бриллиантового крезилового синего из расчета на каплю 1 % раствора оксалата калия 4 капли раствора краски 1. В краску добавляют 0,04 мл крови (две пипетки до метки 0,02). Смесь тщательно, но осторожно перемешивают и оставляют на 30 мин. Перемешивают и готовят тонкие мазки.

Метод 2: в пробирку помещают 0,05 мл раствора краски 3 и 0,2 мл крови. Смесь тщательно перемешивают и оставляют на 20-30 мин. Перемешивают и готовят тонкие мазки.

Метод 3: в пробирку помещают 0,3—0,5 мл раствора краски 2 и 5-6 капель крови пипеткой от аппарата Панченкова. Пробирку накрывают резиновой пробкой, смесь тщательно, но осторожно перемешивают и оставляют на  1-2 часа (лучше окрашиваются ретикулоциты при экспозиции 2-3 ч). Перемешивают и готовят тонкие мазки.

Подсчет ретикулоцитов.

В мазках эритроциты окрашены в желтовато-зеленоватый цвет, зернисто-нитчатая субстанция в синий или синевато-фиолетовый цвет.

Приготовленные одним из указанных выше способов мазки микроскопируют с иммерсионным объективом. Необходимо подсчитать не менее 1000 эритроцитов и отметить среди них количество эритроцитов, содержащих зернисто-нитчатую субстанцию. Практически для большей точности пользуются специальным окуляром, в котором можно уменьшить поле зрения до требуемых размеров. При равномерных тонких мазках, в которых эритроциты расположены в один ряд, подбирают такое поле зрения, в котором имеется, например, 50 эритроцитов, и затем просчитывают 20 таких полей зрения.

При отсутствии готового окуляра его можно легко приготовить, для чего отвинчивают окуляр 10Х, вкладывают в него кусок бумаги с вырезанным небольшим квадратиком и завинчивают.

Количество подсчитанных ретикулоцитов выражают на 1000 или на 100 эритроцитов.

Подсчет ретикулоцитов в мазке после окраски их специальными красителями

Подсчет ретикулоцитов в мазке после окраски их специальными красителями является на практике наиболее используемым методом подсчета количества ретикулоцитов. Это связано с тем, что метод простой, достаточно дешевый и не требует специального дорогостоящего оборудования, в связи с чем может применяться в любой клинико-диагностической лаборатории.

см. также статьи Ретикулоциты и Подсчет количества ретикулоцитов при помощи люминесцентной микроскопии

Принцип метода

Выявление зернисто-сетчатой субстанции ретикулоцитов при суправитальной окраске щелочными красками с дальнейшим подсчетом их в мазке крови.

Реактивы

Можно использовать один из следующих красителей:

1. Насыщенный раствор бриллиантового крезилового синего в абсолютном спирте (для приготовления абсолютного спирта надо выдержать 96% этанол в нескольких сменах прокаленного порошка медного купороса). На 100 мл абсолютного спирта берут 1,2 г краски.
2. Раствор азура I: азур I – 1 г, аммония оксалат – 0,4 г, натрия хлорид – 0,8 г, этиловый спирт 96% — 10 мл, дистиллированная вода – 90 мл. Раствор краски в закрытом флаконе помещают на 2 – 3 дня в термостат при 37° C и периодически энергично взбалтывают. Затем охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через бумажный фильтр. Раствор сохраняют в посуде из темного стекла. При появлении осадка краску следует снова профильтровать.
3. Раствор азура II: азур II – 1 г, натрия цитрат – 5 г, натрия хлорид – 0,4 г, дистиллированная вода – 45 мл. Раствор оставляют в термостат при 37° C на 2 суток, периодически помешивая. Для ускорения растворения краску можно прогреть на слабом огне в течение 15 – 20 мин, не доводя до кипения. Охлаждают до комнатной температуры и фильтруют. Хранят в посуде из темного стекла.

Специальное оборудование

Микроскоп.

Ход определения

Окраску ретикулоцитов проводят либо на стекле, либо в пробирке.

Окраска ретикулоцитов на стекле

При окраске ретикулоцитов на стекле хорошо вымытое и обезжиренное предметное стекло подогревают над пламенем горелки. Стеклянной палочкой наносят на стекло каплю одного из перечисленных выше красителей и готовят мазок из краски шлифованным стеклом. Стеклографом маркируют сторону стекла, на которую нанесен мазок краски. В таком виде стекла можно заготовить впрок и хранить в сухом темном месте. Перед проведением анализа готовят влажную камеру. Обычно для этого пользуются чашкой Петри с уложенными по краям валиками смоченной ваты или фильтровальной бумаги. Наносят каплю крови на мазок краски, готовят из нее тонкий мазок и тотчас помещают во влажную камеру на 3 – 10 мин. Затем высушивают мазки на воздухе.

Окраска ретикулоцитов в пробирке

Окраска ретикулоцитов в пробирке отличается при использовании разных красителей.

Метод 1 – окраска ретикулоцитов в пробирке бриллиантовым крезиловым синим.

Перед употреблением готовят в пробирке рабочий раствор бриллиантового крезилового синего из расчета на каплю 1% раствора оксалата калия 4 капли раствора краски бриллиантового крезилового синего. В краску добавляют 0,04 мл крови (две пипетки до метки 0,02). Смесь тщательно, но осторожно перемешивают и оставляют на 30 минут. Затем снова перемешивают и готовят тонкие мазки.

Метод 2 — окраска ретикулоцитов в пробирке азуром II.

В пробирку помещают 0,05 мл раствора краски азур II и 0,2 мл крови. Смесь тщательно перемешивают и оставляют на 20 – 30 минут. Снова перемешивают и готовят тонкие мазки.

Метод 3 — окраска ретикулоцитов в пробирке азуром I.

В пробирку помещают 0,3 – 0,5 мл раствора краски азур I и 5 – 6 капель крови пипеткой от аппарата Панченкова. Пробирку закрывают резиновой пробкой, смесь тщательно, но осторожно перемешивают и оставляют на 1 – 1,5 часа (ретикулоциты окрашиваются лучше при экспозиции 1,5 – 3 часа). Перемешивают и готовят тонкие мазки.

В настоящее время в продаже имеются готовые красители для ретикулоцитов заводского изготовления. Окраска ретикулоцитов с их помощью производится согласно прилагаемой инструкции.

Подсчет ретикулоцитов.

Приготовленные одним из указанных выше способов мазки микроскопируют с иммерсионным объективом. В мазке ретикулоциты и эритроциты окрашены в желтовато-зеленоватый цвет, зернисто-нитчатая субстанция в ретикулоцитах – в синий (при окраске азуром II и бриллиантовым крезиловым синим) или синевато-фиолетовый цвет (при окраске азуром I).

Фотографии ретикулоцитов:

Окраска ретикулоцитов
Ретикулоциты
Ретикулоциты
Ретикулоциты
Reticulocytes

Находят поля зрения, где эритроциты располагаются раздельно. В этих полях зрения необходимо подсчитать не менее 1000 эритроцитов и отметить среди них количество эритроцитов, содержащих зернисто-нитчатую субстанцию. Большая точность получается при подсчете на 2000 – 3000 эритроцитов.

В связи с тем, что в поле зрения располагается большое количество эритроцитов, что затрудняет подсчет, необходимо ограничить (уменьшить) поле зрения. Для этого можно воспользоваться либо специальным окуляром, в котором можно уменьшить поле зрения до требуемых размеров, либо воспользоваться специальным «окошком» (из бумаги вырезают круг диаметром несколько меньше окуляра, в центре круга вырезают небольшой ромбик и вставляют полученное окошко в окуляр).

Количество подсчитанных ретикулоцитов выражают на 100 (в процентах) или на 1000 (в промилле) эритроцитов.

Пример: При подсчете в мазке 1000 эритроцитов выявлено, что 15 эритроцитов из 1000 имеют зернисто-сетчатую субстанцию той или иной степени, то есть являются ретикулоцитами. Следовательно, количество ретикулоцитов в данном случае составляет 1,5% или 15‰.

Клиническое значение определения количества ретикулоцитов.

Литература:

• Справочник «Лабораторные методы исследования в клинике» под редакцией Меньшикова В. В. — Москва, «Медицина», 1987 г
• Любина А. Я., Ильичева Л. П. и соавторы — «Клинические лабораторные исследования» — Москва, «Медицина», 1984 г.