Кровь методом ифа: расшифровка, назначение, необходимость определения антител. – Иммуноферментный анализ — Википедия

Содержание

Анализ крови по методу ИФА

В настоящее время есть много типов анализов крови, по которым врач может определить состояние здоровья пациента. Почему именно приоритетное место в них занимает анализ ИФА, читайте в данной статье.

Содержание статьи

ИФА анализ крови

ИФА (иммуноферментный анализ) производится в лабораторных условиях для того, чтобы выявить степень защиты организма, а именно его функций. В ходе такой процедуры специалист может определить свойства и количество клеток, а также наличие антител в организме. Такое тестирование может быть проведено для диагностирования аутоиммунных, гематологических или инфекционных заболеваний.

Так что это такое ИФА? В ходе такого обследования можно выявить антитела в крови. Может проводиться также для выявления уровня гормонов или для иных иммунологических комплексов.

Чтобы провести такое исследование крови ИФА, должны быть определенные показания для этого. Их обычно выявляет врач, который и проводит лечение.

Кровь может браться на анализ в таких случаях:

Для диагностирования инфекций, которые могут передаваться половым путем (сифилис, хламидиоз и прочие).
Для диагностирования наличия вирусных инфекций (гепатит, герпес и прочие).
Для выявления количества и качества гормонов в теле.
Для диагностирования онкологического заболевания.
Для определения уровня иммунодефицита.
Для диагностирования организма на наличие тех или иных заболеваний при пересадке органов.
Для оценки эффективности проводимой терапии.

В основе данного принципа анализа лежит то, что при помощи его можно выявить в организме иммуноглобулины (белковые антитела). Такие тела вырабатываются организмом, а именно иммунной системой, когда в тело попадает инфекция. Такие вещества, которые вырабатывает организм, способны связываться с возбудителями инфекции и нейтрализовать их в процессе этого.

Классификация антител, которые борются с инфекцией в организме

Иммуноглобулины имеют особую характеристику. Это специфичность, чем и отличаются от других антител. Благодаря такой своей способности они могут связываться с другими антигенами, образовывая комплексное антитело. Именно при анализе ИФА и можно выявить такие тела в крови. В настоящее время специалисты различают иммуноглобулины пяти типов.

Обычно же их делят на три класса:

Такие антитела могут накапливаться в организме человека при попадании в него инфекции. При этом появляются они в разное время после инфицирования.

Самые первые, которые появляются в крови после инфицирования, это антитела класса М. Они образуются на пятый день после заражения. Находятся в теле они 20-24 дня, а потом исчезают. Такие антитела могут указывать на то, что инфекция в организме острая или уже перешла в хроническую стадию. Это дает врачу информацию о том, что надо незамедлительно начинать процесс лечения.

Через 20-25 дней после появления заражения появляются тела G. Внутри человека они могут находиться на протяжении двух лет. Если при сдаче тестов два раза подряд будут выявлены эти антитела в крови (между анализами промежуток составляет 2-3 недели), то это говорит врачу, что инфекция в организме протекает повторно. То есть, человек еще раз заразился подобной инфекцией.

Тела класса А можно обнаружить в организме через 2-3 недели после инфицирования или обострения болезни. Тут следует отметить, что только 20% этих тел могут находиться в крови. Все остальные же в это время будут располагаться на слизистых. Полностью исчезают такие антитела через 3-7 недель после того, как они уничтожат тела инфекции. Если их при проведении анализа не будет обнаружено в теле, то это говорит о том, что инфекции нет в организме. Если на протяжении определенного срока в организме еще будут обнаружены данные антитела, то это может сказать о том, что заболевание стало уже хроническое.

Чтобы провести тестирование ИФА, берется кровь у пациента. Есть также возможность проводить данные исследования и при взятии другого материала, например, околоплодных вод или спинномозгового вещества. Кровь обычно берется для тестирования из вены.

Специалисты советуют данные тесты сдавать на голодный желудок. После употребления еды должно пройти 10-12 часов. Также, если клиент употребляет какие-либо лекарственные препараты при сдаче анализа ИФА, то он должен сообщить об этом своему лечащему врачу. Это может повлиять на точность тестирования. На достоверность тестирования влияет спиртное или наркотики. Их не следует употреблять на протяжении 3-5 дней перед сдачей анализов.

После проведения исследования сданного материала врач ставит диагноз. Он может быть положительным (+) или отрицательным (-). Такие оценки ставятся по каждому классу иммуноглобулинов.

Преимущества ИФА анализа крови

Специалисты отмечают, что данный тип тестирования крови сегодня наиболее распространенный и популярный. Он имеет массу плюсов перед другими видами тестирования.

Вот некоторые из них:

Возможность провести диагностирование крови на ранних стадиях заболевания.
Точность исследования.
Возможность отслеживания тенденции проявления инфекции.
Возможность проводить массовые исследования, так как уровень унификации тут высокий.
Для возможности получения максимально правильного и точного результата потребуется мало времени.
Удобство проведения анализа.
Автоматизация некоторых процессов в лаборатории.
Небольшая стоимость тестирования.

Также у этого способа диагностирования есть и свои недостатки. К таким можно отнести то, что результат тестирования иногда может быть ложным. Это не зависит от того, положительный он или отрицательный. Происходит такая ошибка по техническим причинам или сбоям, которые может давать оборудование. Также неточность результатов может зависеть и от состояния здоровья пациента, например, наличие у него хронического заболевания или прием определенных лекарственных препаратов.

Также стоит отметить, что на качество тестирования влияет и специализация доктора. Поэтому рекомендуется все анализы сдавать и проводить только в присутствии квалифицированного врача и в лабораторных условиях. Зная эти моменты, вам будет проще принять правильное решение при необходимости сдачи крови на анализ ИФА.

Анализ ИФА

Название исследования	Клинический материал	Результат	Срок испол.	Цена
Гепатит А
anti-HAV IgG	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	320,00р.
anti-HAV IgM	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	320,00р.
Гепатит В
HBsAg	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	200,00р.
anti-HBs	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	340,00р.
anti-HBs	кровь (сыворотка)	кол.	2 р.д.	520,00р.
anti-HBc IgM	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	560,00р.
HBeAg	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	440,00р.
anti-HBe	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	390,00р.
HBsAg (количественный метод)	кровь (сыворотка)	кол.	2 р.д.	1 370,00р.
anti-HBc (суммарное)	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	340,00р.
Гепатит С
anti-HCV IgM	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	360,00р.
anti-HCV (суммарное)	кровь (сыворотка)	кач.	1 р.д.	340,00р.
Гепатит D
anti-HDV	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	320,00р.
anti-HDV IgM	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	320,00р.
Гепатит Е
anti-HEV IgG	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	420,00р.
anti-HEV IgМ	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	530,00р.
Сифилис
Syphilis RPR (RW)	кровь (сыворотка)	кач.	1 р.д.	220,00р.
Syphilis TPHA (РПГА)	кровь (сыворотка)	кач.	1 р.д.	290,00р.
Syphilis TPHA (РПГА)	кровь (сыворотка)	п.кол.	1 р.д.	340,00р.
anti-Treponema pallidum (суммарные)	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	570,00р.

ВИЧ
anti-HIV 1/2	кровь (сыворотка)	кач.	1 р.д.	420,00р.
Вирус простого герпеса
anti-HSV 1 типа IgG	кровь (сыворотка)	кол.	2 р.д.	410,00р.
anti-HSV 2 типа IgG	кровь (сыворотка)	кол.	2 р.д.	410,00р.
anti-HSV 1,2 типа IgG	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	470,00р.
anti-HSV 1,2 типа IgM	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	470,00р.
Цитомегаловирус
anti-CMV IgG	кровь (сыворотка)	кол.	2 р.д.	500,00р.
anti-CMV IgM	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	410,00р.
CMV IgG (авидность)	кровь (сыворотка)	кач.	3 р.д.	790,00р.
Вирус краснухи
anti-Rubella IgG	кровь (сыворотка)	кол.	2 р.д.	440,00р.
anti-Rubella IgM	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	410,00р.
Rubella IgG (авидность)	кровь (сыворотка)	кол.	3 р.д.	800,00р.
Вирус кори
anti-Measles virus IgG	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	520,00р.
anti-Measles virus IgM	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	520,00р.
Вирус паротита
anti-Mumps IgG	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	550,00р.
anti-Mumps IgM	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	550,00р.
Вирус Эпштейна- Барр
anti-EBV-VCA IgG	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	530,00р.
anti-EBV-VCA IgM	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	530,00р.
anti-EBV-EBNA IgG	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	530,00р.
anti-EBV-EA IgG	кровь (сыворотка)	кол.	2 р.д.	530,00р.

Хеликобактер
anti-Helicobacter pylori IgA	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	530,00р.
anti-Helicobacter pylori IgG	кровь (сыворотка)	кол.	2 р.д.	530,00р.
Хламидии
anti-Chlamydia trachomatis IgG	кровь (сыворотка)	п.кол.	2 р.д.	440,00р.
anti-Chlamydia trachomatis IgA	кровь (сыворотка)	п.кол.	2 р.д.	440,00р.
anti-Chlamydia pneumonia IgG	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	440,00р.
anti-Chlamydia pneumonia IgA	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	440,00р.
anti-Chlamydia trachomatis IgМ	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	440,00р.
anti-Chlamydia pneumonia IgМ	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	440,00р.
Микоплазмы
anti-Mycoplasma hominis IgG	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	310,00р.
anti-Mycoplasma hominis IgM	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	310,00р.
anti-Mycoplasma hominis IgА	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	310,00р.
anti-Mycoplasma pneumonia IgG	кровь (сыворотка)	кол.	2 р.д.	310,00р.
anti-Mycoplasma pneumonia IgA	кровь (сыворотка)	кол.	2 р.д.	310,00р.
anti-Mycoplasma pneumonia IgM	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	310,00р.
Токсоплазмы
anti-Toxo gondii IgG	кровь (сыворотка)	кол.	2 р.д.	480,00р.
anti-Toxo gondii IgM	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	480,00р.
Toxo gondii IgG (авидность)	кровь (сыворотка)	кач.	3 р.д.	810,00р.
Лямблии
anti-Giardia Lamblia(cуммарные)	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	320,00р.
anti-Giardia Lamblia IgM	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	320,00р.

Гельминты
антитела к описторхам	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	280,00р.
антитела к эхинококку	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	280,00р.
антитела к токсокарам	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	280,00р.
антитела к трихинеллам	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	280,00р.
антитела к аскаридам IgG	кровь (сыворотка)	кач.	2-4 р.д.	610,00р.
Уреаплазмы
anti-Ureaplasma urealyticum IgG	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	310,00р.
anti-Ureaplasma urealyticum IgА	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	310,00р.
anti-Ureaplasma urealyticum IgМ	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	310,00р.
Вирус герпеса VI типа
anti-HHV IgG	кровь (сыворотка)	кач.	4 р.д.	610,00р.
Парвовирус В19
anti-В19 IgG	кровь (сыворотка)	п.кол.	2-4 р.д.	820,00р.
anti-В19 IgM	кровь (сыворотка)	кач.	2-4 р.д.	890,00р.
Вирус ветряной оспы (VZV)
anti-VZV IgG	кровь (сыворотка)	п.кол.	2 р.д.	610,00р.
anti-VZV IgM	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	610,00р.
Диагностика кандидоза и аспергиллеза
Антитела к Candida IgG	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	520,00р.
Антитела к Aspergilius IgG	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	520,00р.
Вирус клещевого энцефалита
Антитела к вирусу клещевого энцефалита IgG	кровь (сыворотка)	кол.	1-4 р.д.	630,00р.
Антитела к вирусу клещевого энцефалита IgМ	кровь (сыворотка)	п.кол.	1-4 р.д.	700,00р.
Вирус Денге
Антитела к вирусу Денге, IgG	кровь (сыворотка)	кол	4 р.д.	2210,00р.
Антитела к вирусу Денге, IgМ	кровь (сыворотка)	п.кол.	4 р.д.	2210,00р.

Коклюш
Антитела к Bordetella pertussis IgG	кровь (сыворотка)	кол.	2 р.д.	610,00р.
Антитела к Bordetella pertussis IgМ	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	610,00р.
Антитела к Bordetella pertussis IgА	кровь (сыворотка)	кач.	2 р.д.	610,00р.
Вирус Западного Нила
anti-WNV IgM	кровь (сыворотка)	п.кол.	4 р.д.	2210,00р.
anti-WNV IgG	кровь (сыворотка)	п.кол.	4 р.д.	2210,00р.
Боррелии
anti-Borrelia, IgM	кровь (сыворотка)	п.кол.	1-4 р.д.	770,00р.
anti-Borrelia, IgG	кровь (сыворотка)	кол.	1-4 р.д.	770,00р.
Легионеллы
Ag Legionella pneumophila серогруппы 1	моча	кач.	2-5 р.д	610,00р.

иммуноферментный анализ, при беременности, подготовка, расшифровка, как сдавать

Для того, чтобы определить уровень содержания таких биологически активных веществ, как гормоны в крови, иммунологические комплексы, требуется провести специальное лабораторное исследование. При подозрении на наличие гематологического, инфекционного или поражающего аутоиммунную систему заболевания специалисты назначают анализ крови на ИФА. По ходу статьи мы с вами рассмотрим, что такое иммуноферментный анализ крови, как к нему подготовиться, что он показывает и как его расшифровать самому.

Общие представления

Что же это за исследование – анализ крови на ИФА? Аббревиатура расшифровывается как иммуноферментный анализ крови, в ходе которого определяется количественное и качественное содержание различных биологически активных веществ, а также антител и антигенов в биологическом материале.

Механизм проведения ИФА

Что используется при иммуноферментном анализе крови:

кровь из вены;
спинномозговая жидкость;
слизь уретры, цервикального канала;
околоплодная жидкость;
содержимое стекловидного тела.

Иммуноферментный анализ назначают с целью диагностирования заболеваний, которые передаются половым путем, инфекционных и онкологических процессов, аллергических реакций, расстройств в работе эндокринной и репродуктивной системах, аутоиммунных и иммунодефицитных заболеваний, а также для оценивания риска развития некоторых болезней сердечно – сосудистой системы, почек.

Обследование крови на ИФА при беременности назначают с целью раннего выявления уродства плода, нарушений развития на начальных стадиях и контроля их динамики. Кроме того, анализ ИФА позволяет контролировать уровень содержания антител, способных спровоцировать развитие у ребенка тяжелых неврологических расстройств, тем самым предотвращая развитие осложнений не только во время беременности, но и в процессе родов.

Современная диагностика крови дает возможность заблаговременно отреагировать на выявленные проблемы и в значительной мере укрепить здоровье, как самой мамы, так и ее малыша.

Преимущества проведения анализа

Преимущества ИФА крови относятся:

высокая (до 90%) степень чувствительности;
возможность раннего установления диагноза, с одновременным определением стадии заболевания;
невысокая стоимость реагентов, а, следовательно, доступность;
минимальное количество материала для исследования;
минимальные сроки получения результата анализа крови;
возможность длительного хранения реагентов;
способность контролировать динамику развития патологического процесса.

Тест-системы

Минусы иммуноферментного анализа:

нельзя конкретизировать возбудителя заболевания, в лаборатории получают только иммунный ответ на него
возможность получения ложного результата (в очень редких случаях, преимущественно в период вынашивания беременности).

Подготовка

Принцип данного вида исследования крови базируется на образовании в организме человека специфических антител при попадании в него антигенов, то есть чужеродных агентов, вызывающих развитие того или иного заболевания. В результате их взаимодействия образуются комплексы «антиген — антитело», которые и подвергаются исследованию при осуществлении иммуноферментного анализа.

В связи с этим, чтобы не повлиять на данные комплексы и, соответственно, на достоверность полученных результатов, анализ крови и другого биологического материала на ИФА требует определенной подготовки.

Кровь сдают натощак, также за 14 дней до предполагаемого обследования специфическое лечение приостанавливается и употребление антибактериальных, противовирусных лекарственных препаратов прекращается.

Кровь на ИФА сдается из вены. Непосредственно перед забором крови следует ограничить физические нагрузки, а также исключить курение и употребление алкогольных напитков.

Методика проведения ИФА

Существует несколько методик и способы проведения иммуноферментного анализа: прямой и непрямой способ, конкурентный и метод блокирования.

В основе проведения обследования крови (любого другого биологического материала) на ИФА лежит алгоритм, заключающийся в осуществлении двух реакций – иммунной и ферментативной.

В ходе первой патологические агенты связываются с защитными элементами клеток биологического материала, взятого для исследования. Образуется иммунный комплекс «антиген — антитело». Выглядит это следующим образом. Антигены присутствуют на поверхности абсолютно всех клеток.

При попадании в организм чужеродных клеток происходит их захват иммунными клетками (на чьих поверхностях располагаются антитела), которые сопоставляют данные об антигенах с поверхности вновь поступивших клеток с информацией, заложенной в собственной «памяти». В случае несовпадения этих данных включаются защитные функции организма, заключающиеся в образовании иммунного комплекса.

После этого осуществляют ферментативную реакцию, которая визуализирует результаты предшествующей реакции. Ее принцип основывается на превращении вещества из одного в другое. Для каждого вида ИФА образующего в процессе иммунной реакции материала существует определенный фермент, обработку которым используют для определения концентрации чужеродного агента (по интенсивности окрашивания раствора).

Методика проведения ИФА

Расшифровка

Благодаря анализу крови на ИФА, лаборанты определяют содержание в анализе крови иммуноглобулинов A, G и M. Положительный результат при исследовании крови (другого биологического сырья) на ИФА дает возможность не только поставить диагноз, но и стадию заболевания, а также характер его протекания (острое или хроническое).

Данные иммуноглобулины при наличии в организме пациента патологического процесса образуются в различные периоды заболевания:

Иммуноглобулины М, IgM – образуются через пять дней после начала заболевания и сохраняются в крови в течение 1,5 месяца, после чего исчезают. Выявление IgM указывает на наличие в организме острого первичного патологического процесса и необходимости усиленного терапевтического вмешательства.
Иммуноглобулины G, IgG – возникают спустя четыре недели с момента инфицирования, их наличие в организме можно выявить на протяжении нескольких месяцев. Выявление IgG указывает на наличие в анамнезе человека перенесенного заболевания. Повышение уровня их содержания может свидетельствовать также о повторном заражении.
Иммуноглобулины А, IgA – появляются в момент заражения и присутствуют в организме в течение четырех недель. Снижение их содержания говорит о начале выздоровления. Появление в анализах вновь после того, как человек прошел курс лечения и выздоровел, свидетельствует о переходе заболевания в хроническую форму. Одновременное выявление в результатах ИФА IgA и IgG также говорит о наличии в организме хронического процесса.

Следует также отметить, что одновременное присутствие в анализах IgG и IgМ указывает на то, что хронический процесс обострился, и пациенту требуется начать лечение. Если же ни один из иммуноглобулинов в ходе обследования не был выявлен, это означает отсутствие иммунного ответа.

Иммуноферментный анализ крови: расшифровка, методы :: SYL.ru

С развитием таких смежных наук, как генетика, молекулярная биология, химия, а также ростом технического прогресса, современная медицина может похвастаться инновационными методами диагностики самых разных заболеваний человека. Они отличаются высокой точностью результатов и безопасностью проведения. Одним из таких способов выявления проблем со здоровьем является иммуноферментный анализ. Он приобрел широкую популярность в последнее десятилетие и завоевал репутацию высокоэффективного, надежного и безопасного для пациента метода обнаружения заболеваний еще до появления внешних симптомов. Мы доступно объясним, что представляет собой такой вид диагностики, каков принцип его действия, отметим достоинства, сориентируем в стоимости такого анализа.

Реакция организма на патогенную флору

Для того чтобы понять, как, благодаря иммуноферментному анализу, лаборанты диагностируют различные заболевания, необходимо разобраться в физиологическом процессе, который происходит в организме во время заражения инфекциями. Когда патогенный микроорганизм попадает в кровоток, иммунная система человека демонстрирует защитную реакцию в виде выделения определенных веществ – антител. Они связываются с клеткой и анализируют, является ли она частью организма или внедрилась извне. Если иммунная система определила, что клетка чужеродная, то количество антител начинает увеличиваться с целью борьбы с патогенным микроорганизмом.

Антитела бывают разных видов, имеют свои особенности. Одни вещества появляются непосредственно в период инфицирования, другие остаются в течение всей жизни в организме человека и именно благодаря им вырабатывается стойкий иммунитет к конкретному заболеванию. Рзделяют белковые структуры на такие виды: A, D, E, M, G. В медицине антитела называют иммуноглобулинами. Поэтому принято обозначать показатели этих веществ латинскими буквами Ig.

Иммуноферментный анализ (ИФА) основан именно на данных медицинских знаний. С помощью специальных антигенов в лабораторных условиях можно определить наличие или отсутствие тех или иных антител в биологическом материале. По результатам такого анализа врач может поставить диагноз, а также определить не только наличие патологии, но и давность ее происхождения, выявить уровень опасности для пациента. При иммуноферментном анализе чаще других исследуют наличие антител групп M и G.

Что представляет собой ИФА?

На самом деле иммуноферментный анализ не является инновацией современного общества. Его изобрели еще в 80-х годах. Но для проведения таких исследований требовалась громоздкая дорогостоящая аппаратура. Поэтому использовали такой метод только в специально оснащенных научных лабораториях: его применяли для типирования клеток и тканей. А вот широкого распространения в диагностической медицине он тогда не получил, использовать его было технически сложно и крайне затратно. Лишь с развитием техники и изобретением биополимерных материалов ИФА усовершенствовали. После чего метод стал популяризироваться и завоевывать доверие в медицинских кругах.

Как уже было сказано выше, данный метод подразумевает обнаружение в биоматериале — крови, околоплодных водах, стекловидном теле или спинномозговой жидкости — определенных групп иммуноглобулинов.

Различают исследования без нанесения антигена на поверхность и твердофазный иммуноферментный анализ, который предполагает проведение реакции в специальных лунках. Последний метод имеет большую чувствительность и надежность, поэтому именно таким образом проводят анализ в медицинских лабораториях для обнаружения заболеваний человека.

Фазы иммуноферментного анализа

В зависимости от предполагаемого заболевания, из набора для иммуноферментного анализа используют необходимый антиген, который во время химической реакции при наличии инфекции свяжется с патогенной флорой. Этот процесс называется проведением иммунной реакции.

Затем для того, чтобы визуально определить результат исследования, проводят ферментативную фазу ИФА. Она предполагает окрашивание материала с помощью специальных реагентов. В данном исследовании применяют такие ферменты, как щелочная фосфатаза, пероксидаза и авидин. В зависимости от получившегося цвета в процессе проведения химических реакций и определяют результат иммуноферментного анализа.

Что такое колориметрия?

Анализ ферментативной фазы диагностики проводится с помощью метода, который имеет название «колориметрия». Дело в том, что не только цвет материала дает информацию об инфекции, но и получившаяся в результате химических реакций плотность окраса. Именно этот показатель определяет концентрацию патогенного микроорганизма. Если по старинке используют ручной метод диагностики, то для определения указанных показателей выстраивают специальный калибровочный график.

В современных лабораториях сегодня редко применяют ручной метод. Для проведения анализа ИФА используют специальный аппарат – колориметр, в котором вручную задаются лишь параметры исследования, а затем всю работу, включая построение графика, прибор проводит автоматически.

Методы ИФА

Различают прямой и непрямой методы иммуноферментного анализа. Первый вид занимает меньше времени, так как имеет лишь 3 стадии выполнения. Сперва к антигенам исследуемого материала, помещенным в специальные лунки, добавляют специфические антитела. Затем удаляют избыточное их количество и проводят ферментативную фазу анализа, получая таким образом результат.

Непрямой метод применяется намного чаще, так как имеет более высокую чувствительность по сравнению с прямым способом диагностики. При его проведении используется двойное исследование. А именно — сначала антиген связывают с немеченым антителом, а затем с меченым. Такой процесс занимает больше времени, но и результат является наиболее точным.

Наборы реагентов

Наборы для иммуноферментного анализа выпускают разные производители, в самых разных комплектациях. В России признанной является компания «Союз медико-биологический». Данный производитель выпускает наборы реагентов для исследования методом ИФА практически всех распространенных в наших широтах инфекций, поддающихся анализу таким способом. Кроме непосредственно самих реагентов в комплекты входят дополнительные материалы, что обеспечивает безопасность, удобство и быстроту выполнения анализа. Кроме того, химические субстанции окрашены в разные цвета, что снижает вероятность ошибки в выборе реагента лаборантом.

Отличаются химико-биологические наборы относительной доступностью, что прямо влияет на распространение и доступность иммуноферментного анализа для населения.

Преимущества метода диагностики

Несомненно, иммуноферментный анализ имеет ряд преимуществ по сравнению с другими диагностическими методиками:

С его помощью можно определить даже незначительное наличие патогенных организмов, что говорит о высокой чувствительности теста.
Возможность обнаружения заболевания на самых ранних стадиях, что значительно повышает шанс на благополучное излечение.
Простота и удобство взятия биологического материала. Такой анализ проводят как в частных лабораториях, так и в государственных. При необходимости материал может взять медсестра у пациента дома.
Для анализа требуется совсем незначительный объем биоматериала.
Быстрое получение результата. Современное медицинское оборудование позволяет выполнить анализ в течение суток.
Возможность обнаружения скрытых бессимптомных форм инфекции.
Доступность исследования.
При необходимости возможно проведение массовых обследований данным методом.
Существует возможность отслеживания протекания заболевания и эффективности назначенного лечения, так как можно проводить анализ методом ИФА многократно абсолютно безопасно для пациента.
Автоматизация этапов проведения анализа, что исключает человеческий фактор и повышает достоверность результатов.
Реагенты для проведения ИФА хранятся достаточно долго – около года.
Проведение анализа возможно при колебаниях температуры окружающей среды.

Иммуноглобулины группы M

Антитела группы М вырабатываются иммунной системой сразу после обнаружения чужеродного антигена. Следовательно, если иммуноферментный анализ завершился обнаружением таких веществ в биоматериале, то это свидетельствует об острой стадии протекания заболевания, первичном инфицировании. Иммуноглобулины группы М могут находиться в организме до месяца в зависимости от вида заражения. Затем их количество уменьшается до полного исчезновения.

Иммуноглобулины группы G

На смену иммуноглобулинам группы М появляются белковые структуры вида G. Эти вещества вырабатывают стойкий, в большинстве случаев пожизненный иммунитет к заболеванию. Определение белковой структуры IgG в исследуемом материале указывает на то, что организм ранее встречался с возбудителем и имеет защитную реакцию от повторного заражения.

Показания к диагностике

Иммуноферментный анализ крови применяют для определения разных инфекционных заболеваний, гормональных состояний, делают аллергопробы. А именно:

определяют уровень гормонов щитовидной железы;
показатели репродуктивной гормональной панели;
онкомаркеры;
обнаруживают возбудителей инфекционных заболеваний, таких как цитомегаловирус, гепатит, токсоплазма, краснуха, корь, туберкулез, хламидия, сифилис, микоплазма, уреплазма, кандида, лямблии и даже ВИЧ;
диагностируют аутоиммунные заболевания. В том числе часто используют для исследования гормонов щитовидной железы иммуноферментный анализ: ТТГ, ТГ, Т3 и Т4.

Кроме диагностических целей, метод иммуноферментного анализа применяют в научно-исследовательской медицинской деятельности.

Как проводится забор материала?

В большинстве случаев для анализа рекомендуется забор венозной крови. После обработки и подготовки материала для исследования проводят иммуноферментный анализ сыворотки крови или плазмы.

Особого внимания требует исследование гормональной панели, так как в данном случае крайне важно учитывать особенности забора материала. Например, диагностика большинства гормонов репродуктивной системы женщины требует взятия венозной крови в определенные дни менструального цикла. На ряд других гормонов действуют внешние факторы: сезонность, время суток, психологическое состояние пациента и многое другое. Не учитывая специфические факторы, можно получить ложный результат, что приведет к обострению заболевания или неправильно назначенному лечению.

В некоторых, чаще осложненных случаях, для анализа могут понадобиться спинномозговая жидкость, стекловидное тело или околоплодные воды беременной женщины. Процедуры по забору этих биологических материалов несут определенный риск, имеют противопоказания и восстановительный период. Поэтому следует проводить только по показаниям врача и под его профессиональным наблюдением такой иммуноферментный анализ. Расшифровка в таком случае требует специальных медицинских знаний и может занять некоторое время.

Подготовка к анализу

Иммуноферментный анализ следует проводить, придерживаясь всех рекомендаций, так как на результаты исследования влияют внешние факторы. Например, важно сдавать венозную кровь натощак утром (до 11 часов). За 2 недели до предполагаемого забора материала нужно прекратить прием каких-либо лекарственных препаратов, особенно гормональных. Несколько дней перед исследованием следует воздержаться от употребления алкоголя и жирной пищи, а также исключить физическую нагрузку, переживания и стрессы.

Расшифровка результатов

Расшифровка результатов иммуноферментного анализа требует специальных знаний об особенностях белковых структур (антител), о которых было рассказано выше (IgG и IgM). В соответствии с этими данными анализируют показатели исследований. В таблице описаны варианты, которые могут быть получены при проведении анализа:

*Иммуноферментный анализ крови: расшифровка*
Иммуноглобулины M	Иммуноглобулины G	Предполагаемая расшифровка
отрицательно	отрицательно	Организм никогда не сталкивался с данной инфекцией. Нет ни возбудителя, ни антител к нему.
отрицательно	положительно	Организм выработал стойкий иммунитет к инфекции.
положительно	отрицательно	Острая форма инфицирования.
положительно	положительно	Вероятнее всего первичное заражение, но требуются дополнительные диагностические исследования.

Анализируя представленную таблицу, можно сделать вывод, что в большинстве случаев для подтверждения диагноза потребуются дополнительные исследования. Не может дать однозначного ответа один лишь иммуноферментный анализ. Норма в данном случае не имеет четких границ: обнаруженные белки группы G указывают лишь на то, что организм ранее подвергался инфицированию определяемым возбудителем. Но этот же результат может говорить и о наличии острой фазы — важно сопоставить множество факторов и показателей для того, чтобы поставить правильный диагноз.

Факторы риска

ИФА является точным на 90%. Все же существуют факторы риска, которые влияют на искажение результата диагностики: неисправность аппаратуры, неправильный забор материала, его хранение и транспортировка, неучет иных внешних факторов.

Не рекомендуется проводить диагностику после переливания крови, гемолиза, хирургических вмешательств, взятия биопсии или пункции биологического материала — это также может повлиять на результаты показателей.

Стоимость анализа

Стоимость диагностического исследования имеет большой диапазон и зависит от вида анализа и определяемого антигена, так как исходя из этих факторов рассчитывается стоимость реагентных наборов и определяется сложность проведения анализа. Но в большинстве случае является доступным многим пациентам иммуноферментный анализ. Цена его составляет от 300 р. до 2000 р.

ИФА – доступный, быстрый и высокоэффективный метод диагностики большого перечня заболеваний. Но расшифровкой результатов и постановкой диагноза имеет право заниматься только квалифицированный медицинский работник.

Анализ крови методом ифа на вирусы

ИФА анализ — что это такое, расшифровка иммуноферментного анализа крови на паразитов, сифилис, ВИЧ, туберкулез. Норма в таблице, результаты

Благодаря развитию современной медицины, врачу при постановке диагноза больше не нужно ориентироваться на косвенные проявления заболеваний или проводить многоступенчатые лабораторные исследования. Достаточно провести один анализ, который подтвердит или опровергнет предполагаемый первоначальный диагноз.

Таким методом является иммуноферментный анализ (ИФА) — это исследование позволяет обнаружить специфические антитела и антигенны свойственные при разнообразных патологиях, что во многом ускоряет установку диагноза.

Что такое ИФА

ИФА анализ — это такое лабораторное исследование (метод), которое помогает определить присутствие или отсутствие определённых антител в организме для борьбы с вирусом и их количество.

Основой исследования является естественная реакция антиген (вредоносный организму объект) – антитело (белок уничтожающий вредоносные объекты), позволяющая выявить присутствие разнообразных вирусов, бактерий.

ИФА представляет собой естественный иммунный ответ организма – взаимодействие антитела с соответствующим антигеном. Так во время ИФА в пробирку с материалом добавляются поочередно антигены или антитела, после чего происходит выявление концентрации получившихся комплексов антиген-антитело.

Если совпадения образовались, то возникают иммунные комплексы, далее происходит ферментная реакция красящего вещества с объединённой молекулой. Именно благодаря изменению цвета в ходе ферментативной индикации происходит идентификация заболевания после исследования уровня определяемого соединения.

Виды иммуноглобулинов

Иммуноглобулины человека дифференцируются на несколько классов, отличающихся друг от друга свойствами, структурой и антигенными особенностями тяжелых цепей (Н-цепи). У всех млекопитающих, в том числе и человека, выделяют пять Н-цепей, которые и определяют принадлежность иммуноглобулинов к соответствующему классу: G, М, A, D, Е.

Каждый класс отличается друг от друга биологическими свойствами, и способностями связывать антигены, и скоростью и прочностью связи с молекулой.

Функции каждых иммуноглобулинов (lg) различны:

Кол-во в организме	Функции	Период полураспада (дней)	Значение
G	70%	Формируют пассивный иммунитет у новорожденного; необходимы для иммунного ответа улучшают фагоцитоз,	21-24	обеспечивают длительный гуморальный иммунитет при инфекционных заболеваниях
М	5-10%	нужны для активации фагоцитоза, способны связать 5 молекул антигена,	5	Обеспечивает первичную иммунную реакцию
А	10-15	Нейтрализуют токсины и вирусы нужны для формирования раннего иммунитета Образование местного иммунитета	4-5	Защита слизистых оболочек
Е	0,2%	вызывают аллергию и анафилаксию активируют тканевые базофилы	2	Защита от паразитов
D	0,2%	задействованы в выработке лимфоцитов, необходим как мембранный рецептор для антигенов;	3	Их роль малоизучена

Возникновение иммуноглобулинов происходит по своеобразной «цепочке» — lgM lgG, именно так реагирует организм на появление в организме антигена. Во время лабораторной диагностики проводится оценка концентрации трех основных иммуноглобулинов – G, M, A.

Показания к сдаче анализа на иммуноглобулины

ИФА-анализ с каждым годом становится все более популярным.

Такое исследование ускоряет постановку диагноза, а это очень важно для терапии таких патологий как:

вирусный гепатит;
ВИЧ-инфекция;
цитомегаловирус,
вирус Эпштейна-Барр,
вирус герпеса,
корь
краснуха,
туберкулез,
сальмонеллёз,
дизентерия,
клещевой энцефалит,
бактерии хеликобактер,
боррелиоз,
столбняк,
сифилис,
дифтерия,
лептоспироз,
хламидиоза,
уреаплазмоз,
микоплазмоз,
коклюш.

Так же анализ позволяет определить инфицирование паразитами:

плоскими червями
аскаридами
гистолическими амебами,
печеночными тремадами,
лямблиями,
токсоплазмами,
трихинеллами,
двуусткой,
цестодозами.

ИФА является своеобразным маркером аутоиммунных патологий и злокачественных новообразований.

Подготовка к сдаче анализа

При подготовке к исследованию следует придерживаться таких правил:

за сутки до забора крови нельзя курить и употреблять алкоголь,
не заниматься спортом или другими физическими нагрузками,
стараться не допускать стрессов,

Перед тем как сдать ИФА анализ, нужно избегать стрессов.

прекратить употребление лекарственных средств не позже чем за 10 дней до манипуляции.

Так же врачи рекомендуют придерживаться специальной диеты – исключить жирную и жареную пищу, а если исследование проводится на гепатиты, то необходимо не употреблять любые оранжевые овощи и особенно цитрусовые. Сдавать кровь следует с утра на голодный желудок.

Ложноположительным анализ бывает из-за невыполненных рекомендаций, особенно употребления жирной пищи, что приводит к слишком большой концентрации триглицеридов в плазме, из-за чего проводимость ИФА снижается.

Порядок взятия пробы

В качестве исследуемого материала может использоваться цельная кровь, сыворотка или плазма венозной крови. Забор материала, обычно проводится из локтевой вены, для этого применяется одноразовая игла и вакуумная пробирка, необходимо 5-10 мл крови.

Для точности результата важно придерживаться правильной техники взятия пробы – прокол самого сосуда и окружающих тканей должен быть произведен одной манипуляцией, поэтому используется короткая игла с большим диаметром, благодаря чему не травмируется противоположная стенка вены и не повреждаются эритроциты.

Так же для сохранения целостности эритроцитов, нужно чтобы кровь стекала по стенкам пробирки.

Во время хранения материала следует избегать возможной его ионизации, кроме того материал не должен контактировать с остатками дезинфицирующих средств, поэтому используется только одноразовая пластиковая пробирка, с маркировкой ФИО пациента, датой и временем сдачи материала.

Если необходимо непродолжительное хранение исследуемого материала, то используется холодильная камера с температурой 2-4 о С, если необходимо более продолжительное хранение, то материал замораживается при температуре -20 о С.

Как делают анализ

После подготовки исследуемого материала врач-лаборант приступает к необходимым манипуляциям. Для этого используются ряд специальных наборов антигенов, обдающих свойством спровоцировать ответные реакции организма на раздражитель, это разнообразные инфекции, гормоны, аллергены.

Схема ожидаемой реакции «антиген-антитело» выглядит приблизительно так:

Первичная реакция — определяемый Ig (Ab) и очищенный антиген возбудителя (Ag).
Для обнаружения получившихся иммунных комплексов далее следует новая иммунологическая реакция, где антигеном выступает связанный специфический Ig, а антителом для него выступает коньюгат- Ig (Ab).
Последний этап — ферментативная реакция, вместе с катализатором молекулой коньюгата. Субстратом выступает хромоген (не окрашенный), который в процессе протекания реакции окрашивается, и интенсивность цвета и определяется количественный показатель иммуноглобулина в пробе.

В настоящий момент разработано множество разнообразных вариантов ИФА, четкая классификация их отсутствует. Обычно, методы рассматриваются исходя из разделения её на гетеро- и гомогенные — все фазы анализа происходят с применением твердой фазы или с использованием только раствора.

Современные клинико-диагностические лаборатории обычно используют гетерогенный (твердофазный) ИФА, в нем под твердой фазой подразумевается абсорбция антигенов или антител на твердой поверхности специальных лунок, расположенных на полистироловом микропланшете, метод подразделяется на прямой и непрямой ИФА.

При прямом ИФА, вносимый антиген закрепляет в период инкубационного процесса на поверхности пустых лунок, для этого исследуемые пробы материал помещают в чистые лунки на 20-25 минут, это нужно для прикрепления антигена к их поверхности. После этого происходит добавление необходимого антитела. Далее материал остается на определенное время для образования связей.

Антитела всегда добавляют в избытке, поэтому даже при их наличии в пробе остаются не связанные антигены, а если антигенов нет совсем, то связей не будет. Чтобы удалить«лишние» антитела проводится декантация, после чего остаются только те антитела, которые создали связь с антигеном.

После этого следует ферментативная реакции – добавление в лунки раствора с ферментом, после чего происходит окрашивание полученных связей.

При непрямом методе ИФА используемые антитела, заранее соединенные с субстратом ферментативной реакции; в этом случае связь антител с антигеном происходит в период инкубационного процесса, после чего происходит мобилизация связей на поверхности лунок, а вносимый после конъюгат и субстратно-хромогенный реагент окрашивают реакцию.

Таким образом, главным отличием непрямого от прямого метода является не приклеивание материала к поверхности чистых лунок, а связывание с антигеном, иммобилизованным на планшете.

Останавливается протекание реакции с применением специализированных устройств, далее каждая лунка подвергается процессу фотометрирования, за которым следует сравнительная характеристика полученного результата с проведенными ранее контрольными пробами.

Если обнаруживается повышение оптической плотности в пробе, то завышена и концентрация специфических антител в исследуемом результате.

Когда будет готов анализ

Проведение исследования не занимает много времени, от забора крови до получения результата проходит от 1 до 10 дней, в зависимости от диагностических мероприятий.

Результаты теста и их расшифровка

На полученном пациентом бланке-результате диагностики указывается отрицательный либо положительный результат на определенные классы иммуноглобулинов, так же указывается количественный показатель различных классов антител.

Возможны различные интерпретации результатов:

IgM (+) (IgA, IgG не определялись) – процесс выздоровления;
IgM (-) ;IgG (+), IgA (+) – хроническая инфекционная патология;
IgM, IgG, IgA (все с – значением) – отсутствие защитных механизмов к инфекциям;
IgG (+/-) и IgA (+/-), IgM (+) – острый процесс;
IgM (-), IgA(-),IgG(+) – постинфекционный иммунитет;
IgM, IgG, IgA (+) – хроническая патология в стадии обострения.

Так, например, если были обнаружены IgG и IgM, то возможно у пациента одно из таких заболеваний:

вирусный гепатит;
цитомегаловирус;
герпес;
ветряная оспа;
хламидиозом;
стафилококковая или стрептококковая инфекция.

Иммуноферментный анализ часто назначается при гормональных исследованиях, нормы показаны в таблице:

Название гормона	Пол	Норма
1	тиреоглобулин	м/ж	До 70 МЕ/мл
2	тироксин	м/ж	64-146 нмоль/л
3	трийодтиронин	м/ж	1,8-2,8 нмоль/л
4	Свободный тироксин	м/ж	11-25 пмоль/л
5	Свободный трийодритонин	м/ж	4,49-9,3 пмоль/л
6	Тестостерон, дегидротестостерон	Ж	0,5-10 мЕд/л

ИФА анализ — это такое диагностическое исследование, которое позволяет оценить вероятность образования онкологических патологий. Однако интерпретация результатов проводится только лечащим врачом.

Значение результатов теста

ИФА подходит для выявления разнообразных форм половых инфекций, в том числе сифилиса, часто используется и для скрининга беременных.

Благодаря этому исследованию можно узнать, как давно произошло заражение и стадия заболевания на момент исследования:

иммуноглобулины М говорят о длительности заболевания;
IgA — пациент заразился более 30 дней назад;
IgG обнаруживается на «пике» заболеваний, или же в тот момент, когда терапия окончилось недавно.

В процессе исследования лунки на планшете с отрицательным показателем остаются бесцветные, а положительные окрашиваются в ярко-желтый цвет. Если цвет положительных лунок не совпадает с цветом контроля, то результат считается сомнительным и необходимо повторное исследование.

Иммуноферментный анализ — это первая ступень в диагностике ВИЧ. Проводить анализ нельзя сразу же после предполагаемого заражения необходимо дождаться окончания инкубационного периода (от 14 дней до 6 месяцев).

В ходе анализа определяются антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2, происходит поиск АТ класса G, который обычно появляется на более поздних сроках и АТ класса А и М, они могут быть определены на ранних стадиях (во время инкубационного периода).

При получении положительных проб далее следует:

если первый тест дал положительный результат, то кровь вновь перепроверяется другим лаборантом;
повторный положительный результат предполагает пересдачу материала,
при повторении результата, пациенту назначается иммуноблотинг.

Окончательный вывод о наличии ВИЧ-инфекции выдается только после результата иммуноблотинга.

ИФА также применяется в качестве диагностического исследования туберкулеза, но если у пациента даже и были выявлены антитела к данной патологии, то это не всегда подтверждает наличие у него туберкулеза, поэтому ИФА часто применяется качестве уточняющей методики, либо же для диагностики скрытой внелегочной формы.

ИФА анализ — это такое исследование, позволяющее обнаружить у пациента заражения паразитами и простейшими, в ходе диагностики можно определить даже время заражения.

Цитомегаловирус

IgM обнаруживаются через 30-45 дней после заражения, либо во время реактивации инфекции в течение 4-6 месяцев

Исследование крови методом ифа иммуноферментный анализ