Альфа амилазы: Анализы в KDL. Альфа-амилаза

alexxlab 09.02.1970 No Comments

Содержание

Анализы в KDL. Альфа-амилаза

Альфа-амилаза – фермент, помогающий организму усваивать сложные углеводы. Синтезируется в разных тканях и органах, главным образом в слюнных и поджелудочной железах. Слюнная фракция фермента участвует в начальном этапе пищеварения, а панкреатическая выводится в двенадцатиперстную кишку, где происходит основной этап расщепления углеводов, избыток фермента выделяется из организма с мочой. В небольшом количестве амилаза постоянно присутствует в моче и крови, однако отклонения от нормы свидетельствуют о нарушениях со стороны поджелудочной или слюнных желез.

Повышение амилазы в организме может быть вызвано заболеваниями поджелудочной железы, нарушениями оттока желчи, патологией слюнных желез. Наиболее опасным из таких состояний является острый панкреатит, при котором происходит массовое повреждение клеток поджелудочной железы. При этом амилаза в крови может повышаться в 6-10 раз в сравнении с нормой; одновременно повышается липаза — другой фермент поджелудочной железы.

Поэтому тест на амилазу обычно назначают вместе с анализом на липазу.

Если концентрация амилазы в крови растет, а в моче остается в норме, причиной может быть макроамилаземия – состояние, при котором амилаза связывается с крупными белками или углеводами, и перестает проходить через почечный барьер.

В каких случаях обычно назначают исследование?

  • При наличии симптомов панкреатита – острая, опоясывающая боль, рвота, потеря аппетита, повышение температуры;
  • При подозрении на нарушение оттока желчи;
  • Для оценки работы слюнных желез;
  • При лечении опухолей поджелудочной железы;
  • После удаления желчных камней для оценки состояния желчного протока.

Что именно определяется в процессе анализа?

Происходит измерение концентрации общей амилазы в сыворотке крови или моче колориметрическим методом.

Что означают результаты теста?

При остром панкреатите происходит резкий скачок амилазы в крови с одновременным ростом липазы; обычно в сочетании с сильной опоясывающей болью, рвотой, потерей аппетита.

При хронической форме заболевания симптомы выражены слабо, амилаза повышается умеренно, затем, по мере прогрессирования болезни и разрушения клеток поджелудочной железы ее значения могут снижаться.

Другими причинами повышения амилазы в крови могут быть нарушения работы слюнных желез, затруднения оттока желчи вплоть до закупорки желчного протока камнем или растущей опухолью, травмы поджелудочной железы, макроамилаземия, декомпенсированный сахарный диабет, непроходимость кишечника. Также рост уровня амилазы возможен при беременности и приеме некоторых лекарств — фуросемид, ибупрофен, наркотические обезболивающие, каптоприл, кортикостероиды, оральные контрацептивы.

Уровень амилазы ниже нормы наблюдается при муковисцидозе, недостаточности поджелудочной железы или ее удалении, тяжелых формах гепатита, повышенном холестерине, а также в младенческом возрасте.

Сроки выполнения теста.

Обычно результат анализа можно получить через 1-2 дня после сдачи крови.

Как подготовиться к анализу?

Следует придерживаться общих правил подготовки к взятию крови из вены. Можно сдавать кровь натощак или не ранее, чем через 3 часа после еды.

Альфа-амилаза общая биохимический анализ крови на фосфор сдать платно в Воронеже

Описание

Альфа-амилаза – это фермент, основную часть которого вырабатывает поджелудочная железа и слюнные железы. Амилаза играет важную роль в углеводном обмене веществ, регулирует работу пищеварительной системы, а также отвечает за расщепление и усвоение крахмала и сложных углеводов. Повышенная концентрация этого фермента типична для широкого круга заболеваний, имеющих схожую с панкреатитом клиническую картину. Амилаза в самых больших концентрациях находится в поджелудочной железе и слюнных железах. Амилаза удаляется из плазмы почками и экскретируется с мочой. Рост активности амилазы имеет самое большое значение при диагностике болезней поджелудочной железы.

Диагностические возможности тестов на альфа-амилазу

Анализ крови на альфа-амилазу включает в себя определение суммарной активности панкреатической и слюнной амилаз. Из-за ограниченного количества специфических клинических проявлений, сопровождающих болезни поджелудочной железы, именно общий анализ амилазы имеет важнейшее значение в их диагностике и мониторинге, особенно это касается острых панкреатитов.

Помимо панкреатитов гиперамилаземия наблюдается при ряде других заболеваний:

  • сахарный диабет любого типа;
  • травматические поражения брюшной полости;
  • перфоративная язва желудка;
  • рак поджелудочной железы;
  • кишечная непроходимость;
  • острый аппендицит;
  • тромбоз брыжеечных сосудов;
  • почечная недостаточность;
  • перитонит;
  • паротит;
  • злоупотребление алкоголем;
  • камни в желчном пузыре и протоках.

Низкий уровень альфа-амилазы в крови характерен для следующих состояний:

  • послеоперационный период после удаления поджелудочной железы;
  • повышенный уровень холестерина;
  • токсикоз во время беременности;
  • острые и хронические гепатиты, а также другие патологии печени;
  • гепатоз;
  • кистозный фиброз;
  • нарушения в работе поджелудочной железы;
  • осложнения при остром панкреатите;
  • тиреотоксикоз.

Перечисленные заболевания – это только часть наиболее типичных случаев, сопровождающихся повышением или снижением уровня альфа-амилазы. Отклонения от нормы по концентрации в крови этого фермента должны трактоваться только лечащим врачом с учетом анамнеза, результатов других анализов и обследований, поскольку активность альфа-амилазы имеет свою специфику.

Наивысшая концентрация амилаза проявляется в течение нескольких часов после повреждения клеток и сохраняется на таком уровне до пяти дней, что наиболее характерно для острого панкреатита. Но нередко даже при таком состоянии концентрация фермента может быть в норме или лишь незначительно ее превышать, кроме того эти данные не дают возможности определить степень поражения железы. Поэтому при расшифровке результатов большое значение имеет общая клиническая картина.

Несмотря на информативность для диагностики широко спектра заболеваний, основными показаниями к назначению исследования на эти ферменты являются: заболевания поджелудочной и слюнных желез, муковисцидоз и синдром острого живота.

О приеме любых медикаментозных средств, перед тем как сдать кровь нужно предупредить врача, а при возможности их прием лучше отменить, поскольку на уровень этих ферментов влияет широкий спектр препаратов: анаболические стероиды, эстрогены, фуросемид, ибупрофен, пероральные контрацептивы, тетрациклин и др.

«Детский доктор» – сеть современных клиник в Воронеже с собственной лабораторией, где мы среди прочего проводим тестирование на уровень альфа-амилазы. Мы работаем как с детьми, так и со взрослыми и гарантируем высокое качество тестирования, диагностики и лечения.

Альфа амилаза в крови и моче

Альфа амилаза в крови и моче | Медицинская клиника «МЕДЭКСПЕРТ»

Альфа-амилаза (диастаза) – фермент, который участвует в расщеплении полисахаридов (крахмал и гликоген) до дисахаридов (мальтоза) и моносахаридов (глюкоза). Он вырабатывает в поджелудочной и слюнных железах.

Норма альфа амилазы в крови:

  • дети до 1 года: 5-65 Ед/л;
  • 1 – 70 лет: 25-125 Ед/л;
  • старше 70 лет: 20-160 Ед/л.

Норма альфа амилазы в моче – 10-124 Ед/л (или 1-17 Ед/ч).

У здорового человека в крови и моче содержится незначительное количество этого фермента. При этом выделяют 2 фракции (изоферменты):

  • панкреатическая альфа-амилаза (P-тип) – вырабатывается в поджелудочной железе;
  • слюнная альфа-амилаза (S-тип) – вырабатывается в слюнных железах.

В норме доля панкреатической диастазы в крови составляет 40%, а слюнной – 60%.

Услуги медэксперт

Записаться на прием

ИМЕЮТСЯ ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ. НЕОБХОДИМА КОНСУЛЬТАЦИЯ СПЕЦИАЛИСТА

Оформление заявки

×

Вызвать врача на дом

×

Результаты анализов

×

Оставить отзыв

×

Адрес: г. Казань, ул. Муштари, д.12а

Режим работы: 08:00 — 20:00, суббота: 08:00 — 15:00, воскресенье — выходной

Адрес: г. Казань, ул. Сиб. Хакима, д. 52

Режим работы: 08:00 — 20:00, суббота: 8.00 — 15.00, воскресенье — выходной

Адрес: г. Казань, ул. Сиб. Хакима, д. 50

Режим работы: 08:00 — 20:00, суббота: 8.00 — 15.00, воскресенье — выходной

Сдать анализ на альфа-амилазу (диастазу)

Метод определения Энзиматический колориметрический (рекомендованный IFCC).

Исследуемый материал Сыворотка крови

Доступен выезд на дом

Онлайн-регистрация

Синонимы: Диастаза; Сывороточная амилаза; Альфа-амилаза; Амилаза сыворотки.  

Alpha-amylase; α-Amylase; Amy; AML; Diastase; 1,4-α-D-glucanohydralase; Serum amylase; Blood amylase. 

Краткая характеристика определяемого вещества альфа-амилаза 

Фермент, участвующий в расщеплении углеводов. Амилаза – гидролитический фермент, разлагает крахмал и гликоген до мальтозы.

Амилаза образуется преимущественно в слюнных железах и поджелудочной железе, поступает затем соответственно в полость рта или просвет двенадцатиперстной кишки и участвует в переваривании углеводов пищи. 

В сыворотке крови выделяют соответственно панкреатический и слюнной изоферменты амилазы. Значительно более низкой амилазной активностью обладают также такие органы как яичники, фаллопиевы трубы, тонкий и толстый кишечник, печень. 

С какой целью определяют уровень альфа-амилазы в крови 

Исследование амилазы в сыворотке крови применяют преимущественно в целях диагностики и контроля лечения острого панкреатита, а также других видов патологии поджелудочной железы.  

Особенность аналита, которая может повлиять на результат теста «Альфа-Амилаза» 

Фермент выводится почками. Следовательно, увеличение сывороточной активности амилазы приводит к повышению активности амилазы в моче. 

Амилаза может образовывать крупные по размеру комплексы с иммуноглобулинами и другими белками плазмы, поэтому не проходит через почечные клубочки, а содержание её в сыворотке возрастает, в моче наблюдается нормальная активность амилазы.

Медицинские анализы — Альфа-Амилаза

Альфа-амилазы – это гидролитические ферменты, разлагающие крахмал до мальтозы. В организме человека альфа-амилазы имеют различное происхождение: панреатическая амилаза производится поджелудочной железой и выходит в кишечный тракт, слюнная амилаза синтезируется в слюнных железах и секретируется в слюну. Присутствующая в крови амилаза выходит через почки и экскретируется в мочу. В основном, измерение альфа-амилазы в сыворотке и в моче используется для диагностики нарушений работы поджелудочной железы и для обнаружения развития осложнений. При острых панкреатитах активность амилазы повышается в течении нескольких часов после начала болей в животе, примерно через 12 часов достигает пика и возвращается к нормальным значениям по прошествии 5и дней. Специфичность альфа-амилазы для болезней поджелудочной железы не очень высока, поскольку повышенные уровни также наблюдаются при различных болезнях, не связанных с поджелудочной железой, например, паротите и почечной недостаточности. Поэтому для подтверждения острого панкреатита необходимо дополнительно проводить измерение активности липазы.

Референтные значение

ВозрастАктивность альфа-амилазы Ед/мл
Новорожденные от 2 до 4 дней5 – 65
Взрослые27 – 131
Взрослые в возрасте от 60 до 90 лет24 — 151

Факторы, вызывающие искажение результата: гемолиз пробы крови.

Факторы, увеличивающие активность

  • Прием алкоголя.
  • Вещества, вызывающие сокращение сфинктера Одди (например, бетанехол, дифеноксилат, наркотические анальгетики), секретин.

Некоторые препараты могут вызывать повышение активности амилазы в сыворотке и, возможно, панкреатит:

Аспарагиназа, Азатиоприн, Каптоприл, Циметидин, Клофибрат, Кортикостероиды, Ципрогептадин, Диданозин, Эстроген, Этакриновая кислота, Фуросемид, Ибупрофен, Индометацин, Мефенаминовая кислота, Метилдофа, Нитрофурантоин, Пероральные контрацептивы, Пентамидин, Фенилбутазон, Сульфонамиды, Сулиндак, Тетрациклины, Тиазидные диуретики, Вальпроевая кислота, Зальцитабин, Загрязнение образца или реакционной смеси слюной.

Факторы, уменьшающие активность

Анаболические стероиды, Липемия, Оксалаты, Цитрат, Фторид, ЭДТА.

Увеличение активности

  • Панкреатит (при остром панкреатите активность повышается более чем в 5 раз)
  • Паротит
  • Обтурационная и странгуляционная непроходимость или инфаркт кишки
  • Эктопическая беременность
  • Заболевания желчных путей всех типов
  • Диабетический кетоацидоз
  • Киста или псевдокиста поджелудочной железы, как осложнения острого панкреатита (при панкреатической псевдокисте активность амилазы не возвращается к норме после острого приступа более длительный срок)
  • Перитонит
  • Макроамилаземия
  • Некоторые опухоли легких и яичников
  • Почечная недостаточность
  • Эндоскопическая ретроградная холангиопанкреатография
  • Абдоминальная травма
  • Повреждение черепа
  • Вирусные инфекции
  • Состояние после операции, алкоголь

Уменьшение активности

  • Недостаточность поджелудочной железы
  • Выраженный муковисцидоз
  • Тяжелое поражение печени
  • Хирургическое удаление поджелудочной железы

Анализ крови на альфа-амилазу сдать в Москве

Альфа-амилаза — фермент, разлагающий крахмал и гликоген до мальтозы. Синтезируется главным образом в поджелудочной и слюнных железах. Данный тест применяют, как правило, для диагностики и контроля лечения панкреатита и других заболеваний поджелудочной железы.

Фермент является составляющей частью панкреатического сока. Он поступает в двенадцатиперстную кишку, где используется организмом для пищеварения.
В норме концентрация амилазы незначительная. Присутствие небольшого количества фермента объясняется естественным обновлением клеток. Значительное количество фермента попадает в кровь при повреждении поджелудочной, а также в случае наличия препятствий для свободного тока сока в виде новообразований либо камней.
Тест назначается в ходе диагностики панкреатита, а также ряда других заболеваний, для которых характерно вовлечение поджелудочной. В таких случаях вместе с ним назначается анализ на количество липазы. Также тест используется для контроля лечения онкологии, затрагивающей железу.
Повышение альфа-амилазы возможно по различными причинами. При хроническом панкреатите показатели могут превышать норму в 6-10 раз. Это воспалительное заболевание, характеризующееся поражением тканей поджелудочной. Оно развивается при нарушении оттока панкреатического сока. Содержащиеся в нем ферменты оказывают повреждающее воздействие на окружающие ткани. При острой форме воспалительный процесс развивается стремительно. Без своевременной медицинской помощи возможен летальный исход.

Амилаза обычно повышается через несколько часов после повреждения клеток. Высокие показатели сохраняются до 5-ти дней. Значительное увеличение показателей при наличии сильной боли с высокой долей вероятности указывает на острый панкреатит. В некоторых случаях при таком заболевании концентрация фермента ненамного превышает норму или остается в ее пределах. Уровень фермента не позволяет судить о том, насколько сильно поражена железа. Если большая часть клеток, синтезирующих фермент, гибнет, его количество остается в пределах нормы. Поэтому при интерпретации результатов анализа крови на альфа-амилазу учитывается анамнез, клиническая картина и другие факторы.
Хроническая форма характеризуется периодическими обострениями. Во время ремиссии существенные жалобы обычно отсутствуют. По мере прогрессирования заболевания функциональные ткани замещаются соединительной, которая не способная синтезировать ферменты и выполнять другие функции. Железа постепенно теряет способность продуцировать вещества, необходимые для нормального процесса пищеварения. Очередное обострение может быть вызвано нарушением рекомендованной врачом диеты. Без своевременной диагностики и адекватного лечения патологические изменения со временем приобретают необратимый характер. Показатели амилазы при хронической форме заболевания сначала повышаются, а по мере прогрессирования патологического процесса могут постепенно приходить в норму. Для грамотной интерпретации результатов теста и назначения лечения необходимо обращаться к врачу.

Помимо панкреатита высокое количество фермента может быть вызвано и другими причинами:

  • декомпенсацией диабета;
  • онкологией поджелудочной или ее травмой;
  • острым аппендицитом;
  • камнями в панкреатическом протоке;
  • острым холециститом;
  • кишечной непроходимостью;
  • макроамилаземией;
  • разрывом аневризмы аорты.

Низкие показатели амилазы наблюдаются при муковисцидозе, снижении функций поджелудочной, после ее удаления. Иногда причиной этого может быть повышенный холестерин. Прием ряда лекарственных препаратов может приводить к повышению активности фермента. У грудных детей в норме активность амилазы низкая. Она постепенно повышается и к году достигает тех же значений, что и у взрослых.

Альфа-амилаза (S-Amyl) – SYNLAB Eesti

Aмилаза – одна из составляющих сока поджелудочной железы, секретируется в клетках ацинуса поджелудочной железы, при попадании в двенадцатиперстную кишку участвует в переваривании крахмала.

Хотя амилаза является чувствительным анализом по отношению к патологии поджелудочной железы, она неспецифична, так как секреция амилазы происходит еще в слюнных железах.

Показания:

  • Диагностика панкреатита и наблюдение за его течением (как острого, так и хронического)
  • Диагностика кисты или псевдокисты поджелудочной железы
  • Диагностика других гастроинтестинальных патологий
  • Диагностика паротита (свинки)

Метод анализа: Фотометрия

Референтное значение:  <100 U/L

Интерпретация результата:

Высокие значения амилазы:

  • Повреждение клеток ацинуса поджелудочной железы (панкреатит) 
  • Обструкция протока поджелудочной железы (опухоль поджелудочной железы, камень в общем желчном протоке)

Вышеперечисленные болезни способствуют попаданию энзима во внутреннюю лимфатическую систему поджелудочной железы и перитонеальную полость. Через сосуды, абсорбирующие лимфу, амилаза попадает в общее кровообращение. Ненормально высокое содержание амилазы возникает в течение 12 часов от начала заболевания. Поскольку ами- лаза выводится из организма через почки очень быстро (клиренс за 2 часа), то содержание амилазы нормализуется в течение 48-72 часов после ликвидации причины обструкции. При персистирующем панкреатите, закрытии протока или псевдокисте (подтекании через проток) значения амилазы остаются высокими в течение длительного времени.

Например, при перфорации желудка, когда желудочное содержимое попадает в перитонеальное пространство, амилаза с помощью перитонеальных кровеносных сосудов попадает в кровообращение, в результате чего ее содержание в сыворотке крови повышается. При пенетрации язвы в поджелудочную железу также возникает повышение содержания амилазы в крови.

  • Воспаление слюнной железы, например, паротит (свинка)
  • Эктопическая беременность, диабетический кетоацидоз и некоторые опухоли

Содержание амилазы может быть невысоким по причине малого количества клеток, способ- ных вырабатывать этот энзим, например, при хроническом панкреатите, когда повреждена большая часть клеток поджелудочной железы и при массивном геморрагическом некрозе.  

Альфа-амилаза — обзор | ScienceDirect Topics

4.5.4.2 Амилазы

α-амилазы (EC 3.2.1.1) катализируют эндогидролиз длинных цепей α-1,4-глюкана, таких как крахмал и гликоген. Амилазы обычно очищают путем образования комплекса гликоген-амилаза с последующим осаждением в холодном этаноле или, альтернативно, с помощью аффинной хроматографии в гелевой матрице, связанной с ингибитором протеинамилазы. Последовательно изоамилазы можно разделить с помощью анионообменной хроматографии (Terra and Ferreira, 1994).

Большинство амилаз насекомых имеют молекулярную массу в диапазоне 48–60 кДа, значения pI 3,5–4,0 и значения Km с растворимым крахмалом около 0,1%. Оптимумы pH обычно соответствуют pH, преобладающему в средней кишке, из которой были выделены амилазы. Амилазы насекомых являются кальций-зависимыми ферментами и активируются хлоридом при смещении оптимума pH. Активация также происходит с анионами, отличными от хлорида, такими как бромид и нитрат, и, по-видимому, зависит от размера иона (Terra and Ferreira, 1994).

Самая известная α-амилаза насекомых и единственная, трехмерная структура которой была определена, — это α-амилаза средней кишки личинок Tenebrio molitor . Фермент имеет три домена. Центральный домен (домен A) представляет собой (β / α) 8 -бочку, которая составляет ядро ​​молекулы и включает каталитические аминокислотные остатки (Asp 185, Glu 222 и Asp 287) ( T. molitor нумерация α-амилазы повсюду). Домены B и C почти противоположны друг другу, по обе стороны от домена A.Сайт связывания субстрата расположен в длинной V-образной щели между доменами A и B. Там могут быть размещены шесть сахаридных единиц, при этом сахарная цепь расщепляется между третьим и четвертым связанными остатками глюкозы. Ион кальция находится в домене B и координируется с помощью Asn 98, Arg 146 и Asp 155. Этот ион важен для структурной целостности фермента и, по-видимому, также важен из-за его контакта с His 189. Этот остаток взаимодействует с четвертый сахар субстрата связывается в активном центре, образуя петлю между каталитическим центром и сайтом связывания Ca 2+ . Ион хлорида координируется с помощью Arg 183, Asn 285 и Arg 321 в домене A (Strobl et al ., 1998a). Домен C расположен в C-концевой части фермента, содержит так называемый мотив «греческого ключа» и не имеет четкой функции (рис. 5). Эти структурные особенности являются общими для всех известных α-амилаз (Nielsen and Borchert, 2000), хотя не все α-амилазы имеют сайт связывания хлоридов (Strobl et al ., 1998a). Наиболее разительным различием между α-амилазами млекопитающих и насекомых является наличие дополнительных петель вблизи активного сайта ферментов млекопитающих (Strobl et al ., 1998а).

Рис. 5. Консервативные остатки в первичных структурах основных пищеварительных ферментов насекомых. AMY (амилаза) соответствует Tenebrio molitor нумерации амилазы; CHI (хитиназа), жидкость для линьки Manduca sexta Нумерация хитиназы. TRY (трипсин) и CHY (химотрипсин) соответствуют нумерации бычьего химотрипсина; CAL (катепсин L), нумерация папаина: APN (аминопептидаза N) не имеет согласованной нумерации; CPA (карбоксипептидаза A), нумерация CPA млекопитающих.

Asp 287 консервативен во всех α-амилазах.Сравнительные исследования показали, что Glu 222 является донором протонов, а Asp 185 нуклеофилом, и что Asp 287 является важным, но не прямым участником катализа. Предполагается, что его роль заключается в повышении p K a донора протонов (Nielsen and Borchert, 2000).

Хлорид-ион является аллостерическим активатором α-амилаз, приводящим к изменению конформации фермента, изменяющему среду донора протона. Это изменение вызывает увеличение p K a донора протонов, таким образом смещая оптимум pH фермента и увеличивая его V max (Levitzki and Steer, 1974).Согласно Strobl и др. . (1998a), увеличение V max является следствием близости хлорид-иона к молекуле воды, которая, как предполагалось, инициирует расщепление цепи субстрата. Нуклеофильность этой молекулы воды может быть усилена отрицательным зарядом иона.

В GenBank зарегистрирована 21 полная последовательность α-амилаз насекомых (по состоянию на май 2003 г. ), за исключением всех последовательностей Drosophila .Последовательности соответствуют 18 видам, обнаруженным в четырех отрядах. Примеры можно найти среди перепончатокрылых (Ohashi et al ., 1999; Da Lage et al ., 2002), жесткокрылых (Strobl et al ., 1997; Titarenko and Chrispeels, 2000), двукрылых (Grossmann et al. al ., 1997; Charlab et al. ., 1999) и Lepidoptera (Da Lage et al ., 2002). Все последовательности имеют каталитическую триаду (Asp 185, Glu 222 и Asp 287), субстрат-связывающие остатки гистидина (His 99, His 189 и His 286) и координирующие остатки Ca 2+ (Asn 98 , Arg 146 и Asp 155) (Рисунок 5).Из остатков, участвующих в связывании хлоридов, Arg 183 и Asn 285 являются консервативными, тогда как положение 321 варьируется. Согласно D’Amico et al . (2000), все известные хлорид-активированные α-амилазы имеют остаток аргинина или лизина в положении 321. Последовательности α-амилазы насекомых имеют аргинин в положении 321, за исключением последовательностей Zabrotes subfasciatus и Anthonomus grandis , которые содержат лизин, и α-амилазы чешуекрылых, содержащие глутамин. Это согласуется с наблюдением, что большинство α-амилаз насекомых активируются хлоридом, за исключением амилаз чешуекрылых (Terra and Ferreira, 1994).Немногочисленные α-амилазы жесткокрылых и перепончатокрылых, не подверженные действию хлорида (Terra and Ferreira, 1994), заслуживают повторного исследования. Возможно, что другой анион заменяет хлорид в качестве активатора, как показано для некоторых амилаз гемиптерановых (Hori, 1972).

Схема действия относится к количеству связей, гидролизуемых за время жизни определенного комплекса фермент-субстрат. Если после первой стадии гидролиза гидролизуется более одной связи, говорят, что картина действия является процессной.Степень множественной атаки — это среднее количество гидролизованных связей после разрыва первой связи. Амилаза Rhynchosciara americana имеет степень множественной атаки между амилазой Bacillus subtilis (1.7) и поджелудочной железой свиньи (6). Амилазы личинок и взрослых особей Sitophilus zeamais , S. granarius и S. oryzae и личинок Bombyx mori имеют паттерны действия, сходные с таковой амилазы поджелудочной железы свиньи (Terra and Ferreira, 1994).Эти исследования необходимо продолжить, включая определение аффинностей, соответствующих каждому субсайту в активном центре. Такие исследования, особенно в сочетании с кристаллографическими данными, могут детально описать молекулярные причины, по которым амилазы по-разному действуют в отношении крахмалов различного происхождения.

Существует множество природных соединений, влияющих на амилазы, включая многие ингибиторы растительных белков (Franco et al ., 2002). Кристаллографические данные показали, что эти белковые ингибиторы всегда занимают активный центр амилазы (Strobl et al ., 1998b; Nahoum et al ., 1999). В случае ингибитора α-амилазы Amaranth сравнение комплекса амилазы T. molitor – ингибитор с смоделированным комплексом между α-амилазой поджелудочной железы свиньи и ингибитором выявило шесть водородных связей, которые могут образовываться только в цепи . Комплекс амилазы T. molitor – ингибитор (Pereira et al ., 1999). Это было первое успешное объяснение того, как белковый ингибитор специфически ингибирует α-амилазы насекомых, но не млекопитающих.Как будет подробно описано для трипсинов (см. Раздел 4.5.5.2.1.), Специфические амилазы индуцируются, когда личинок насекомых скармливают рационом, содержащим ингибитор α-амилазы (Silva et al ., 2001). Механизмы, лежащие в основе этой индукции, неизвестны и в настоящее время изучаются (C.P. Silva, личное сообщение).

Альфа-амилаза — обзор | ScienceDirect Topics

3 ингибитора амилазы

α-амилаза (1,4-α-d-глюкан-глюканогидролаза, EC3.2.1.1) — эндоглюканаза, которая катализирует гидролиз эндо α- (1,4) гликозидных связей в крахмале и родственных полисахаридах.Гидролиз крахмала сначала катализируется α-амилазой, присутствующей в слюне человека, а затем панкреатической амилазой в двенадцатиперстной кишке. Человеческая α-амилаза поджелудочной железы (HPA) является важной фармакологической мишенью для лечения диабета 2 типа. Однако стоимость HPA относительно высока для исследовательских целей. Вместо α-амилазы поджелудочной железы свиньи (PPA) используется измерение пищеварения in vitro . PPA состоит из 496 аминокислотных остатков и на 83% идентичен своему человеческому аналогу HPA (Pasero, Mazzéi-Pierron, Abadie, Chicheportiche, & Marchis-Mouren, 1986).PPA представляет собой амилазу эндотипа и катализирует гидролиз внутренних α- (1,4) гликозидных связей в амилозе и амилопектине посредством множественной атаки на невосстанавливающий конец (Robyt & French, 1970). Продуктами гидролиза α-амилазы поджелудочной железы свиней в основном являются мальтоза, мальтотриоза и мальтотетраоза (Yook & Robyt, 2002). PPA имеет два изомера PPA isozyme-I (PPA-I) и PPA-II, которые имеют одинаковую молекулярную массу, но незначительно отличаются по аминокислотному составу и изоэлектрической точке (Pasero et al., 1986).

Встречающиеся в природе ингибиторы α-амилазы включают белковые ингибиторы и вторичные метаболиты. Первые выходят за рамки данной статьи, потому что они имеют тенденцию денатурировать при термической или кислотной (кислотность желудка) обработке и теряют свою активность при достижении тонкой кишки. Здесь мы суммируем самые последние литературные данные по ингибиторам α-амилазы. Перечислены также методы, используемые для измерения их ингибирующей активности, поскольку разные методы могут давать разные значения IC 50 .По сравнению с α-глюкозидазой, меньше сообщений обнаружено в отношении α-амилазы, и большинство исследований посвящено полифенолам.

Изооканин ( 57 ) (рис. 3.8), выделенный из испанских игл, Bidens bipinnata , продемонстрировал умеренную ингибирующую активность в отношении HPA (IC 50 0,447 мг / мл или 156 мкМ), измеренной с помощью йодометрического анализа (Yang и др., 2012). Следует отметить, что изооканин содержит две катехолические единицы, и поэтому ожидается, что он будет хорошим восстановителем, который может снижать содержание йода, вызывая ложноположительные результаты.

Рисунок 3.8. Химические структуры ингибиторов амилазы, соединения 57 — 59 , 5-кофеилхиновая кислота и 4,5-дикаффеоилхиновая кислота.

Из листа воды нанесите ( Syzygium aqueum ) лист, мирицетин-3- O -рамнозид ( 9 ) и европетин-3- O -рамнозид ( 10 ) (рис. 3.2). были изолированы, и ингибирующая активность в отношении ингибирования α-амилазы была измерена с использованием анализа DNSA, чтобы быть 10-кратным (EC 50 из ~ 2.0 мкМ) сильнее, чем акарбоза (EC 50 19 мкМ). Такая высокая активность довольно редко наблюдается в полифенольных соединениях и требует дальнейшего изучения, в частности, механизма ингибирования и селективности, когда эти соединения подвергаются воздействию сложной пищевой матрицы. Мирицетин является сильным поглотителем радикалов, поэтому стабильность 9 и 10 также вызывает беспокойство. Авторы сообщили, что кверцетин имел сравнимую ЕС 50 (17 мкМ) с ЕС акарбозы (19 мкМ). Используя анализ мутности, который мы разработали в нашей лаборатории, мы не смогли обнаружить какую-либо ингибирующую активность кверцетина против панкреатической α-амилазы с использованием акарбозы в качестве эталона (Huang et al., Неопубликованные результаты). Следовательно, необходимо проверить, зависит ли указанное значение EC 50 от метода, чтобы исключить потенциальный артефакт (Manaharan et al., 2012). Cleistocalyx operculatus также принадлежит к семейству миртовых. Ху, Луо, Ли, Джоши и Лу (2012) выделили и очистили 2’4′-дигидрокси-6′-метокси-3’5′-диметилхалкон (DMC) из высушенных цветочных бутонов C.operculatus . Соединение продемонстрировало неконкурентный механизм ингибирования PPA (Hu et al., 2012).

Тилирозид ( 58 ) (рис. 3.8), выделенный из семян шиповника, Rosa canina L., ингибирует PPA с IC 50 280 мМ, и кинетические исследования показывают, что это неконкурентоспособный ингибитор. с K i значениями 84,2 мкМ, определенными количественно с использованием p -нитрофенил-альфа-d-пентаглюкозида в качестве субстрата. В отличие от акарбозы тилирозид не проявляет ингибирующей активности в отношении α-глюкозидазы.Возможно, из-за его слабой ингибирующей активности α-амилазы на животной модели тилирозид в высоких дозах (600 мг / кг) необходим для снижения концентрации глюкозы в плазме после приема пищи у мышей, получавших крахмал в дозе 2 г / кг. Тилирозид может проявлять антигипергликемию за счет ингибирования как натрийзависимого транспортера глюкозы 1, так и транспортера глюкозы 2, опосредованного захватом глюкозы энтероцитами (Goto et al., 2012).

Куркумин и его производные считаются многоцелевыми соединениями, которые обладают очень широким спектром преимуществ для здоровья.В качестве потенциального агента для снижения скорости переваривания крахмала бисдеметоксикуркумин ( 59 ) (рис. 3.8) из корневища Curcuma longa обладает активностью ингибирования HPA и PPA со значениями IC 50 приблизительно 25 мкМ с использованием анализа DNSA. Кинетическое исследование показывает, что это неконкурентоспособный ингибитор HPA с кажущимся K и 3,0 мкМ (Ponnusamy et al. , 2012).

Моно- и двузамещенные кофеилхиновые кислоты являются основными полифенольными соединениями, содержащимися в зеленых кофейных зернах.Из-за присутствия трех вторичных гидроксильных групп в кольце хинной кислоты существует три изомера в положении взаимного превращения монозамещенных кофеилхиновых кислот и три дикаффеоилхиновых кислот, которые все были очищены из зеленых кофейных зерен. Их ингибирующая активность в отношении PPA-I (Narita & Inouye, 2011) измерялась с использованием p -нитрофенил-диглюкозида, который при гидролизе дает p -нитрофенол и мальтозу. Примечательно, что ингибирующая активность в значительной степени зависит от положения кофейных групп в монокафеоилхиновой кислоте.5-Кофеоилхиновая кислота (или обычно известная как хлорогеновая кислота) (рис. 3.8) имеет более высокую ингибирующую активность с IC 50 , равным 80 мкМ, по сравнению с таковой 4-кофеоилхиновой кислоты (120 мкМ) и 3-кофеоилхиновой кислоты (230 мкМ). мкМ). Для трех изомеров дикаффеоилхиновой кислоты ингибирующая активность намного выше и не так чувствительна к положению сложноэфирных групп, поскольку 3,4- и 4,5-дикаффеоилхиновые кислоты (рис. 3.8) имеют одинаковую IC 50. (20 мМ), и 4,5-дикаффеоилхиновая кислота имеет IC 50 30 мкМ (Narita & Inouye, 2011).

Альфа-амилаза слюны — Salimetrics

Альфа-амилаза слюны — Salimetrics

Техническое резюме

Сводка аналитов
Аналит: Альфа-амилаза
Прозвища: α-Амилаза
Соотношение сыворотка-слюна: NA
Оптимальный объем сбора: 25 мкл *

* Добавьте 300 мкл к общему объему всех тестов для работы с жидкостью

Мешающие факторы
α-амилаза зависит от местоположения

α-амилаза имеет суточный ритм

α-амилаза может зависеть от скорости потока

Сводка анализа
Методология: Кинетическая реакция
Чувствительность: 0. 4 Ед / мл
Диапазон анализа: 2-400 Ед / мл
Тип анализа: Количественный
Примеры диапазонов α-амилазы слюны *
Группа Число Среднее значение (Ед / мл) AbsoluteRange (мкг / дл)
Взрослый 75 92.4 3,1–423,1

* Только для справки. Каждая лаборатория должна установить свой собственный диапазон.

Сбор образцов слюны

РАССМОТРЕНИЕ СБОРА АЛЬФА-АМИЛАЗЫ СЛИВЫ

Лучшие результаты начинаются с лучшего сбора слюны. Этот протокол сбора содержит общие рекомендации по максимальному анализу альфа-амилазы слюны.Используйте этот протокол сбора аналитов, чтобы спланировать методологию сбора и схемы отбора проб.

ОДОБРЕННЫЕ МЕТОДЫ ЗАБОРА АЛЬФА-АМИЛАЗЫ С СЛИВАРИЙ

Тестовые образцы слюны

@ Salimetrics

Salimetrics SalivaLab — просто и точно

Код заказа (лаборатория): 5420
Требования для транспортировки: Корабль на сухом льду