Перекрестный метод определения группы крови: руководство, таблица

Определение групп крови перекрестным способом – выявление в сыворотке изогемагглютининов α и β стандартными эритроцитами. Основа исследования — взаимодействие естественных агглютининов сыворотки α и β и соответствующих антигенов стандартных эритроцитов AB0.

Стандартные эритроциты являются 5 – 10 % взвесью свежих эритроцитов. Условия хранения – в изотоническом солевом растворе консерванта при + 4 °C. Допускается использование смеси эритроцитов от 2 – 3 лиц одной группы. При использовании перекрестного метода определения группы крови требуется хорошее освещение и температура воздуха в помещении 15 – 25 °C.

Порядок действий

1. Отобрать 3 – 5 мл исследуемой крови в пробирку без стабилизатора.
2. Отстоять сыворотку 1,5 – 2 часа.
3. Однократно отмыть стандартные эритроциты в 0,9 % растворе NaCl.
4. Промаркировать лунки планшета: 0(I), A(II), B(III).
5. Разместить по две капли (приблизительно 0,1 мл) сыворотки в лунки.
6. Добавить в лунки по 0,03 мл стандартных эритроцитов групп 0, A, B.
7. Чистыми палочками перемешать сыворотку и эритроциты.
8. Покачивать планшет на протяжении 5 минут.
9. Проверить наличие агглютинации в каждой лунке.

стандартные эритроциты ID-DiaCell 0-А-В отбор фенотипированных эритроцитов внесение стандартных эритроцитов в лунку планшет с внесенными образцами

Результаты исследования

Групповая принадлежность	Стандартные эритроциты
	0(I)	A(II)	B(III)
0(I)	—	+	+
A(II)	—	—	+
B(III)	—	+	—
AB(IV)	—	—	—

«+» — наличие, «-» — отсутствие агглютинации.

1. Агглютинация со стандартными эритроцитами A(II) и B(III) свидетельствует о наличии в сыворотке агглютининов α и β. Исследуемая кровь – 0(I).
2. Реакция в лунке с эритроцитами B(III) говорит о наличии агглютинина β. Группа A(II).
3. Агглютинация с эритроцитами A(II) – свидетельство наличия агглютинина α. Результат исследования крови – B(III).
4. Отрицательный результат во всех трех лунках указывает на отсутствие обоих агглютининов. Кровь — AB(IV).

перемешивание образцов крови и реагента в лунках покачивание планшета проверка наличия агглютинации

Определение групп крови AB0 перекрестным способом в обязательном порядке дополняет обнаружение антигенов A и B в реакции прямой агглютинации с использованием цоликлонов.

Стандартные эритроциты — Изосерологические исследования крови — Семинары по переливанию крови — Medkurs.ru

Стандартные эритроциты для перекрестного определения групп крови могут быть консервированными или приготовляться по мере надобности из крови «микродоноров». Стандартные эритроциты готовятся из крови резус-отрицательных доноров групп 0 (I), А (II) и В (III).

На этикетках обязательно должны быть указаны: титр, номер серии, дата годности, количество эритроцитов и наименование учреждения-изготовителя.

Консервированные эритроциты хранятся в холодильнике при t +4 — +6°. Колебания температуры переносятся стандартными эритроцитами плохо, в связи с чем срок годности консервированных эритроцитов сокращается и они могут гемолизироваться. Поэтому при транспортировке их необходимо принять все меры для исключения резких колебаний температуры, взбалтывания и тряски.

Перед использованием стандартных эритроцитов необходимо дать им отстояться в вертикальном положении, осторожно вскрыть ампулу и удалить пипеткой надосадочную жидкость. Для работы используется только осадок эритроцитов, без консерванта, который снижает их агглютинационную активность.

Вскрытые ампулы лучше использовать в течение рабочего дня, не оставляя на следующие сутки. Остатки эритроцитов в начатой ампуле закупориваются пластилином. В таком состоянии они могут храниться 2 — 3 дня.

Для определения резус-принадлежности (для контроля сывороток антирезус) необходимо иметь стандартные резус-положительные и резус-отрицательные эритроциты группы 0 (I). Поскольку в консервированной крови резус-фактор очень быстро теряет активность, стандартные эритроциты для этой цели берут у микродоноров малыми дозами.

Все учреждения, где определяется резус-фактор, обязаны иметь микродоноров. Кровь для приготовления стандартных эритроцитов берется из пальца или вены не чаще трех раз в неделю в количестве не более 4 мл. Доноры, у которых берется кровь для приготовления стандартных эритроцитов, должны находиться на учете непосредственно в лаборатории.

Каждые полтора-два месяца микродоноры осматриваются врачом-терапевтом, у них проверяется уровень гемоглобина и содержание эритроцитов. Взятие крови допускается при содержании гемоглобина не ниже 60% у женщин и 65% у мужчин. Взятая кровь регистрируется в специальном журнале.

Один раз за полтора-два месяца выводится общее количество взятой крови и выдается денежная компенсация в двойном размере по отношению к компенсации, установленной для обычных доноров (Инструкция МЗ СССР № 10-68/14-87 от 12/III 1965 г.). Выходной день предоставляется за суммарное взятие не менее 100 мл крови.

Стандартные микродонорские эритроциты для перекрестного определения групп крови приготовляются на изотоническом растворе лимоннокислого натрия (0,5 мл цитрата +3 — 5 мл крови). В пробирку с кровью доверху доливается физиологический раствор хлористого натрия, и содержимое перемешивается. Затем эритроцитам дают отстояться. Осадок их используется в качестве стандарта при определении групп крови.

В тех случаях, когда стандартные эритроциты предназначаются для контроля сывороток антирезус, кровь микродонора берется без консерванта. После образования сгустка приготовляется 10 — 20%-ная взвесь свободных эритроцитов (со дна пробирки) в собственной сыворотке, которая и применяется для работы.

Для увеличения выхода стандартных эритроцитов можно брать кровь на лимоннокислом натрии, как было сказано выше. После этого эритроциты следует дважды отмыть в специально подобранной гемагглютинирующей сыворотке группы АВ (IV) и приготовить на ней 10 — 20%-ную взвесь, необходимую для исследования.

Стандартные микродонорские эритроциты хранятся в холодильнике при температуре +4 — +6° в течение 1 — 2 дней в пробирках, закрытых ватным тампоном.

«Семинары по переливанию крови»,
Л.В.Иванов, И.П.Данилов, Б.А.Шуваева

Далее по теме:

---

Перекрестный метод (метод стандартных эритроцитов).

Второй этап определения группы крови проводится в лаборатории из доставленной про­бирки перекрестным методом, т.е. одновременно при помощи стандартных сывороток и стан­дартных эритроцитов. Резус-принадлежность эритроцитов определяется в соответствии с требованиями действующей «Инструкции по определению резус-принадлежности крови». Полученные лабораторный анализ с указанием групповой и резус-принадлежности при совпадении всех паспортных данных, номера медицинской карты, результатов определения группы крови после свер­ки с первоначальными данными вклеивается в медицинскую карту.

При определении группы крови в лаборатории перекрестным методом (одновременно при помощи стандартных сывороток и эритроцитов) разрешается проводить исследование по одной серии сыворотки, если титр используемой сыворотки не ниже, чем 1:64.

Способ наиболее часто используется в серологических лабораториях.

Суть метода состоит в определении наличия шли отсутствия в исследуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток, а также групповых антител а и ß с помощью стандартных эритроцитов. Это дает полную серологическую характеристику крови.

Реакция со стандартными эритроцитами проводится следующим образом.

Необходимое оснащение:

— Оснащение для реакции со стандартными эритроцитами отличается тем, что для реакции агглютинации необходимы стандартные эритроциты трех групп крови: О(I), А(II), В(III).

— Стандартные эритроциты приготавливают из крови доноров с заранее известной группой крови, хранят при 4-8°С. Срок годности 2-3 дня.

Техника проведения реакции:

— Кровь для исследования берут из вены в сухую пробирку, центрифугируют или оставляют в покое на 20-30 минут для разделения на сыворотку и эритроциты.

— На маркированную тарелку пипеткой в шестъ ячеек наносят по одной большой капле сыворотки исследуемой крови из пробирки (0,1мл), а рядом с ними — по одной маленькой капле (0,01мл) стандартных эритроцитов групп О(I), А(II), В(III) (по две серии).

— Дальнейшие мероприятия проводятся аналогично методу с использованием стандартных изогемагглютинирующих сывороток: соответствующе капли смешивают стеклянными палочками, планшет покачивают, наблюдают в течение 5 мин, в капли с агглютинацией добавляют изотонический раствор хлорида натрия, после чего оценивают результат.

Реакция со стандартными сыворотками проводится описанным выше способом параллельно с реакцией со стандартными эритроцитами.

Трактовка результатов

При трактовке результатов оценивают данные, полученные при обеих реакциях (со стандартным изогемагглютинирующими сыворотками и стандартными эритроцитами (Схема3).

Особенностью трактовки результатов реакции со стандартными эритроцитами является то, что эритроциты группы 0(I) являются контрольными (в них нет антигенов, что делает принципиально невозможной специфическую реакцию агглютинации с любой сывороткой).

Результат перекрестного способа считается достоверным только если при оценке результатов реакции со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и со стандартными эритроцитами ответы о группе исследуемой крови совпадают. Если этого не происходит, обе реакции следует переделать.

Схема 3.

Наличие агглютинации при реакции со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками следующих групп				Наличие агглютинации при реакции со стандартными эритроцитами следующих групп			Группа крови
О(I)	А(II)	В(III)	АВ(IV)	О(I)	А(II)	В(III)
—	—	—		—	+	+	0aß(I)
+	—	+		—	—	+	Aß(II)
+	+	—		—	+	—	Ba(III)
+	+	+	—	—	—	—	ABo(IV)

+ -агглютинация, — — нет агглютинации.

Возможные ошибки.

Определение групповой принадлежности с помощью реакции агглютинации может сопровождаться ошибками, которые ведут к неверной трактовке результатов. Все ошибки можно разделить на три группы: низкое качество реагентов, технические ошибки, особенности исследуемой крови.

Низкое качество реагентов

Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки и стандартные эритроциты могут иметь низкие агглютинабельные свойства, что приводит к неверному толкованию результатов реакции. Во избежание подобных ошибок следует следить за сроком годности реагента, условиями хранениями, а также их внешним видом (прозрачность сыворотки, отсутствие пленок, хлопьев, запаха гниения и пр.).

Технические ошибки

Ошибки технического характера связаны с несоблюдением или недостаточно точным выполнением всех правил проведения реакции.

а) Несоблюдение внешних условий:

— Плохая освещенность мешает обнаружить агглютинацию или ее отсутствие.

— Повышение температуры свыше 25°С резко замедляет агглютинацию.

— При низкой температуре (менее 15°С) может произойти неспецифическая агглютинация независимо от состава агглютининов и агглютиногенов, так называемая холодовая панагглютинация (агглютинация отмечается при реакциях с сыворотками всех групп крови). Это явление происходит за счет наличия в сыворотке особого холодового агглютинина, который может давать реакцию агглютинации только при низких температурах.

б) Неправильное проведения самой реакции.

— Нарушение расположения сывороток, соотношения сыворотки и крови, слияние соседних капель и пр. создают возможность неправильной интерпретации полученных результатов.

— Ранняя оценка результатов также может привести к ошибке, особенно при наличии подтипа антигена А (слабого антигена А₂), дающего позднюю агглютинацию.

в) Недобавление физиологического раствора.

— Несоблюдение этого простого правила (в капли, где произошла агглютинация, следует добавить изотонический раствор хлорида натрия) может привести к тому, что за специфическую агглютинацию будет принята ложная (псевдоагтлютинация).

Под термином псевдоагглютинация подразумевают способность эритроцитов склеиваться в монетные столбики или кучки с сохранением мембран, независимо от их агглютинабельных свойств. Границы между форменными элементами хорошо видны под микроскопом, в отличие от истинной агглютинации, при которой происходит разрушение мембран эритроцитов. Добавление 1-2 капель изотонического раствора хлорида натрия позволяет дифференцировать истинную агглютинацию от ложной. Псевдоагглютинация расходится довольно быстро, в то время как истинная агглютинация сохраняется прежней или становится более выраженной.

г) Особенности исследуемой крови.

— Развитие неспецифической панагглютинации может быть связано не только с низкой температурой, но и с качествами самой крови.

Панагглютинацию при бактериальном заражении исследуемой крови в 1927 г. описал Томсен. Этот феномен (феномен Томсена) характеризуется агглютинацией крови с сыворотками всех групп и сывороткой собственной крови. Подобное явление неспецифической агглютинации может наблюдаться и в свежей крови, но оно встречается довольно редко и носит название панагглютинации или аутоагглютинации. Сущность явления заключается в том, что сыворотка при комнатной температуре дает агглютинацию со всеми эритроцитами, даже со своими собственными (аутоагглютинация), а эритроциты в то же время дают агглютинацию со всеми сыворотками, даже с сывороткой группы АВ(IV).

Подобное явление описано при ряде заболеваний: болезнях крови, спленомегалии, циррозе печени, инфекционных заболеваниях и т. д. Описана панагглютинация и у здоровых людей, но крайне редко (0,07%). Явления панагглютинации и аутоагглютинации наблюдаются только при комнатной температуре; при температуре, близкой к температуре человеческого тела, они обычно не выявляются.

Во избежание ошибок необходимо не допускать определение группы крови при температуре ниже 15°С. Если при определении групповой принадлежности агглютинация наблюдается с сыворотками групп 0(I), А(II) и В(III), всегда следует проводить реакцию с сывороткой группы АВ(IV). И только тогда, когда в этой капле не будет агглютинации, можно исключить панагглютинацию и отнести кровь к группе АВ₀(IV). При наличии агглютинации с сывороткой АВ(IV) необходимо подогреть кровь до 37°С и вести реакцию при этой температуре.

Панагглютинация и аутоагглютинация исчезают, если определение групповой принадлежности проводить при 37°С.

При некоторых заболеваниях отмечается снижение агглютинабельности агглютиногенов эритроцитов (хронические инфекционные заболевания, онкологические заболевания, болезни крови и пр.). При этом так же, как и при наличии слабого антигена А₂, следует четко соблюдать условия и время реакции.

Во всех случаях нечеткого или сомнительного результата необходимо повторное определение групп крови при помощи стандартных сывороток других серий, а также перекрестным способом!

Инструкция

По изготовлению консервированных стандартных

Эритроцитов и их применению в

Изосерологических исследованиях

Стандартные эритроциты, содержащие определенные сочетания аллоантигенов, предназначены для выявления антиэритроцитарных антител в сыворотке исследуемой крови, при определении групп крови АВО перекрестным способом, при определении резус-принадлежности крови, а также для проведения контроля специфичности и активности стандартных изогемагглютинирующих сывороток АВО, сывороток антирезус; тест-сывороток и реактивов, предназначенных для определения антигенов различных систем эритроцитов крови человека. Стандартные эритроциты группы О(I) должны содержать в эритроцитах клинически значимые антигены: D, C, Cw, c, E, e, K, k, Fy, Jk, M, N, S, s, Le.

С целью увеличения срока годности стандартных эритроцитов можно производить их консервирование специально изготовленными консервирующими растворами.

I. Требования, предъявляемые к стандартным эритроцитам

Стандартные эритроциты для исследований по системе АВО должны давать четкую, хорошо видимую агглютинацию при взаимодействии со стандартными сыворотками соответствующей специфичности и не давать агглютинации с сыворотками, не содержащими антител против данного антигена эритроцитов.

Стандартные эритроциты группы А(II), предназначенные для выявления агглютинина анти-А, должны иметь титр не ниже 1:64, эритроциты группы В(III), предназначенные для выявления агглютинина анти-В, также должны иметь титр не ниже 1:64.

Титр антигенов А и В устанавливается с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток группы Абета(II) (анти-В) и Вальфа(III) (анти-А) или соответствующих моноклональных антител, удовлетворяющих требованиям действующих инструкций.

Время наступления агглютинации эритроцитов А1 и В со стандартными изогемагглютинирующими реактивами должно составлять не более десяти секунд; эритроцитов подгруппы А3, В2 — не более двух минут.

Стандартные эритроциты группы крови О(I) не должны давать агглютинации со стандартными сыворотками групп крови Оальфа бета(I), Абета(II), Вальфа(III) в течение двадцати минут.

Стандартные резус-положительные эритроциты группы крови О(I), содержащие антиген D, а также антигены С, Cw, c и E, e в различных сочетаниях, предназначенные для выявления антител системы резус, должны давать соответственно со стандартными сыворотками анти-D, анти-C, анти-Cw, анти-c, анти-E и анти-e четкую агглютинацию при определении методом конглютинации с желатином, экспресс-методом в пробирках или на плоскости без подогрева или непрямой пробе Кумбса в зависимости от того, для какого метода исследования предназначена данная стандартная сыворотка антирезус.

Стандартные резус-отрицательные эритроциты О(I) фенотипа ccddee не должны давать агглютинации с реактивами антирезус, содержащими антитела анти-D, анти-С, анти-Е во всех методах исследования, для использования в которых предназначены указанные реактивы антирезус.

Время наблюдения за отрицательной реакцией должно соответствовать времени, установленному для каждой из этих реакций.

II. Приготовление консервированных стандартных эритроцитов

Приготовление стандартных эритроцитов производится в условиях строгого соблюдения асептики и состоит из изготовления консервирующего раствора, получения взвеси эритроцитов в консервирующем растворе, розлива эритроцитов, маркировки продукции и контрольных исследований.

1. Изготовление консервирующего раствора для стандартных эритроцитов.

Консервирующей средой для приготовления стандартных эритроцитов могут служить растворы следующего состава:

Консервант N 1:

сорбит 40,0 г

глюкоза 6,0 г

Na2HPO4x12h30 2,0 г

Kh3PO4 0,9 г

левомицетин 0,06 г

этиловый спирт 96 град. 100 мл

вода бидистиллированная до 1000 мл

рН раствора 6,8-6,9

В случае необходимости доведения рН до требуемой величины добавляется несколько кристаллов аскорбиновой кислоты или Na2HPO4x12h30.

Консервант N 2:

аденин 0,03 г

инозин 0,06 г

лимонная кислота 1,5 г

глюкоза 3,0 г

Na3PO4 0,4 г

NaOH 1н 20 мл

вода дистиллированная до 100 мл

рН раствора 6,3-6,4

Консервирующие растворы (консерванты) представляют собой прозрачную бесцветную жидкость без запаха. Стерилизация консервантов производится путем фильтрования их через соответствующие стерилизующие фильтры. Розлив производят в стерильные флаконы емкостью 250 мл или 500 мл, которые немедленно закрывают резиновыми пробками и завальцовывают металлическими колпачками. Срок годности консервантов — шесть месяцев. В случае помутнения консервирующего раствора или появления желтого окрашивания применение его для работы недопустимо.

Определение группы крови системы ав0 по стандартным отмытым эритроцитам с известной групповой принадлежностью

Из вены больного берут 3-4 мл крови в пробирку и центрифугируют. На тарелку, разделённую на секторы, наносят соответственно надписям по капле сыворотки, к которой добавляют каплю стандартных эритроцитов в 5 раз меньше капли исследуемой сыворотки, перемешивают капли углом предметного стекла, покачивают тарелку в течение 3 мин, затем добавляют по капле изотонического раствора хлорида натрия, продолжают смешивать покачиванием и через 5 мин оценивают результаты. Возможны четыре варианта реакции агглютинации.

1. Агглютинация отсутствует с эритроцитами I(0) группы и определяется с эритроцитами II(А) и III(В) групп — исследуемая кровь I(0) группы.

2. Агглютинация отсутствует с эритроцитами I(0) и II(А) групп и определяется с эритроцитами III(В) группы — исследуемая кровь II(А) группы.

3. Агглютинация отсутствует с эритроцитами I(0) и III(В) групп и определяется с эритроцитами II (А) группы — исследуемая кровь III(В) группы.

4. Агглютинация отсутствует с эритроцитами I(0), II(А), III(В) групп — исследуемая кровь I V(АВ) группы.

Определение Rh-фактора

Исследование крови на резус-принадлежность методом конглютинации проводят с помощью специальных сывороток анти-Rh в лабораторных условиях. Предварительно определяют групповую принадлежность (по системе АВ0).

Оснащение: две различные серии стандартных сывороток анти-Rh, соответствующих групповой принадлежности определяемой крови, или совместимые в групповом отношении стандартные отмытые одногрупповые резус-положительные и резус-отрицательные эритроциты, чашка Петри, водяная баня, пипетки для сывороток, предметные стёкла или стеклянные палочки.

На чашку Петри наносят подряд три большие капли сыворотки анти- Rh одной серии и параллельно — три капли сыворотки другой серии, получая два горизонтальных ряда сывороток. Затем в первый вертикальный ряд сывороток обеих серий вносят по небольшой капле исследуемой крови (соотношение сыворотки и крови 10:1 или 5:1), в средний ряд — по такой же капле стандартных резус-положительных эритроцитов (контроль активности), в третий ряд — резус-отрицательные стандартные эритроциты (контроль специфичности). Отдельной для каждой капли стеклянной палочкой или углом предметного стекла тщательно перемешивают сыворотку и эритроциты, чашки закрывают крышкой и помещают на водяную баню при температуре 46-48 °С. Спустя 10 мин учитывают результат, просматривая чашку в проходящем свете. В капле со стандартными резус-положительными эритроцитами должна быть агглютинация, с резус-отрицательными она отсутствует. Если в каплях обеих серий сывороток с исследуемыми эритроцитами определяется агглютинация — кровь резус-положительная, если она отсутствует — кровь резус-отрицательная.

Следует помнить о том, что добавлять изотонический раствор хлорида натрия в каплю сыворотки, как это принято при определении групповой принадлежности крови по системе АВ0 с помощью стандартных сывороток, категорически запрещено, так как это может нарушить ре- акцию агглютинации.

Ошибки при определении Rh-фактора могут быть обусловлены снижением активности стандартных сывороток анти-Rh, нарушением пропорции сыворотка / кровь, несоблюдением температурного режима при исследовании, уменьшением времени экспозиции (менее 10 мин), добавлением изотонического раствора хлорида натрия, отсутствием контрольных проб на активность и специфичность сыворотки, групповыми несоответствиями стандартных сывороток и исследуемых и стандартных эритроцитов.

Для экспресс-метода определения Rh-фактора используют специальный реагент — сыворотку анти-Rh IV(АВ) группы, разведённую 20-30% раствором альбумина человека или 30-33% раствором декстрана [ср. мол. масса 50 000-70 000], используемого как вещество, способствующее агрегации эритроцитов при комнатной температуре.

Каплю стандартной сыворотки анти-Rh IV(АВ) группы наносят на предметное стекло или чашку Петри и параллельно наносят каплю резус-отрицательной сыворотки I V(АВ) группы, не содержащей антител. К ним добавляют в 2-3 раза меньшего объёма каплю исследуемой крови, перемешивают углом предметного стекла, стеклянной палочкой или путём покачивания в течение 3-4 мин, после чего добавляют по 1 капле изотонического раствора хлорида натрия и по истечении 5 мин учитывают реакцию. При наличии агглютинации эритроцитов с сывороткой анти-Rh и отсутствии её с контрольной сывороткой кровь резус-положительная, при отсутствии агглютинации с обеими сыворотками — резус-отрицательная. В случае появления агглютинации с обеими сыворотками реакцию следует рассматривать как сомнительную. Для экстренного переливания следует использовать только резус-отрицательную кровь, а при её отсутствии возможно в опасной для жизни ситуации переливание резус-положительной крови после проведения пробы на совместимость по Rh-фактору.

Определение группы крови у взрослых и детей: методы :: SYL.ru

«Люди голубой крови», «королевская кровь», «кровный брат» – существует много выражений, которые затрагивают одну из важнейших систем в организме человека. Она отвечает за тканевое питание, дыхание, обмен веществ, всасывание и усваивание питательных веществ. Роль кровеносной системы сложно переоценить. Здесь нет мелочей. Так, групповая принадлежность и резус-фактор играют большую роль в жизни человека. Особенно это важно для женщины. Определение группы, биохимический и другие анализы предваряют любое вмешательство в организм пациента. Лечение практически каждого заболевания начинается с взятия биологического материала для исследования.

Интересные факты о группе крови

В Японии считают, что характер человека полностью зависит от того, какая у него групповая принадлежность крови. У обладателей первой группы преобладают такие качества, как самоуверенность и решительность. Люди со второй группой крови надежны, но замкнуты в себе. Те, кто обладают третьей, чаще всего честолюбивы и умны. У требовательных, уравновешенных людей течет в жилах кровь четвертой группы. По этому принципу многие создают семьи, заводят друзей, работодатели подыскивают себе сотрудников.

На Австралийском континенте живет удивительный человек Джеймс Харрисон. За свои 74 года он успел сдать кровь около 1000 раз! Медики утверждают, что как минимум 2 млн новорожденных детишек сумел спасти этот необычный донор. Он обладает не только самой редкой группой, но и может похвастаться наличием особых антител, которые помогают младенцам с тяжелой анемией успешно бороться с недугом.

Система АВО

В мире существует 4 группы крови, имеющих свои особенности. Первая группа не содержит белков антигенов А и В, поэтому она является универсальной в качестве донорской. Но человеку, имеющую такую группу крови, нельзя переливать никакую другую, кроме первой. Вторая группа носит антигены А. Она совместима с первой и второй. Третья группа крови имеет в своем составе антигены В. И к ней идеально подходит первая или третья. Четвертая группа содержит антигены А и В, и она совместима с кровью любой группы. В настоящее время врачи стараются осуществлять переливание реципиенту той же группы, что и его собственная.

Это общепринятая система, в которой работают все медицинские учреждения мира. Определение группы крови и резус-фактора проводят всем новорожденным детям, людям перед любым оперативным вмешательством, переливанием крови и ее компонентов. Особенно за этими показателями у женщин во время беременности наблюдают акушеры-гинекологи.

Методы определения группы крови

Существует несколько способов определения групповой принадлежности крови человека в лабораторных и даже домашних условиях:

1. По стандартным сывороткам.
2. По стандартным эритроцитам.
3. С применением цоликлонов.
4. По группе крови родителей.

Важно отметить, что определение группы крови и резус-фактора последним способом не является достоверным. Этот метод можно назвать «домашним». Он подходит в качестве развлечения подросшим детишкам, для лучшего понимания того, как же происходит наследование подобных признаков ребенком.

Применение цоликлонов – это простой и современный способ определения группы крови человека и ее резус-фактора. Препарат получают из биологического материала мышей и повсеместно используют в системе АВО. Плюсы цоликлонов в том, что они быстрее агглютинируются, то есть сворачиваются, с кровью и реакция становится более выраженной. Чаще всего лаборанты используют реагенты анти-А и анти-В, однако в некоторых случаях работают и с анти-АВ и анти-О. Определение группы крови с помощью цоликлонов требует меньше времени и подготовки.На специальном планшете делают две надписи соответственно названиям используемых цоликлонов. Под ними наносят небольшую каплю исследуемой крови, рядом — немного реагента. Стеклянной или любой другой чистой палочкой перемешивают обе жидкости, затем в течение двух минут медленно покачивают планшет для лучшего соединения и сворачивания белков. По реакции агглютинации судят о результатах. Полное отсутствие склеивания говорит о том, что исследуемая кровь принадлежит к первой группе. Склеивание с цоликлоном анти-А доказывает, что она относится к второй группе. Если наблюдается реакция с реагентом анти-В, значит, у пациента кровь третьей группы. При агглютинации с обоими цоликлонами ясно, что исследуемый материал содержит антигены А и В. Следовательно, является кровью четвертой группы.

Определение группы крови и резус-фактора с помощью цоликлонов является наиболее удобным и распространенным в настоящее время. Для того чтобы узнать резусную принадлежность, нужно на планшет нанести несколько капель цоликлона анти-D-супер и одну — исследуемой биологической жидкости. Далее нужно их смешать. Наличие реакции свертывания говорит о том, что пациент имеет положительный резус-фактор. Соответственно, отсутствие агглютинации означает то, что резус отрицательный.

Определение группы крови стандартными сыворотками

В этом случае используют стандартные сыворотки четырех известных групп. Каждого реагента берут по две серии, чтобы обеспечить наиболее точный результат. Для облегчения работы сыворотки окрашены каждая в свой цвет: О(I) – бесцветная, А(II) – синяя, В(III) – красная, АВ(IV) – желтая. На специальный планшет наносят сыворотки первых трех групп по две серии каждой. Рядом капают по одной капле исследуемой крови, взятой из пальца. Планшет аккуратно покачивают до полного перемешивания и по реакции агглютинации судят о результатах. Определение группы крови — это всегда скрупулезная манипуляция, которая требует внимательности и сосредоточения.

Стандартные эритроциты для определения группы крови

Определение группы крови стандартными эритроцитами – это еще один высокоточный метод выявления групповой принадлежности. Его проводят с использованием стандартных эритроцитов, полученных из материала донора. Сыворотку центрифугированной крови наносят на планшет в два ряда по три капли в каждом. Возле каждой из них помещают немного эритроцитарной массы в следующем порядке: О(I), А(II), В(III) — по две серии. Так же как и при определении группы другими методами, в этом случае тщательно перемешивают капли крови и реагенты и судят о результатах по свертыванию белка.

Определение групповой принадлежности ребенка по крови родителей

Определение группы крови по родителям – это, пожалуй, единственный «домашний» метод. Согласно закону наследования ребенок берет от отца и матери по одному антигену. В таблице ниже представлены все возможные варианты наследования ребенком группы крови.

	I (ОО)	II(ОА)	III(ОВ)	IV(АВ)
I(ОО)	Только I	Или I, или II	Или I, или III	Или II, или III
II(ОА)	Или I, или II	Или I, или II	Любая с равной долей вероятности	Или II, или III, или IV
III(ОВ)	Или I, или III	Любая с равной долей вероятности	Или I, или III	Или II, или III, или IV
IV(АВ)	Или II, или III	Или II, или III, или IV	Или II, или III, или IV	Или II, или III, или IV

Определение группы крови ребенка по таблице может дать представление о наследовании генов и позволит с пользой провести время. Этот способ не является точным. Но он достаточно информативен. Разумеется, определение группы крови по родителям — это не самый лучший метод, для достоверного результата стоит обратиться в клинику.

Забор крови

Для определения групповой принадлежности берут материал из пальца и из вены. Для анализа используют как цельную кровь, так и сыворотку, которую получают в результате центрифугирования пробирки с биологическим материалом. Детям при рождении определение группы крови и резус-фактора проводят, применяя материал, взятый из пяточки.

Анализ берут в амбулатории или стационаре в условиях полной асептики и с использованием средств антисептики. Манипуляцию может делать только человек с медицинским образованием, а проведением реакции должен заниматься лаборант. Анализ проводят несколько раз разные медработники, чтобы исключить влияние человеческого фактора на результат исследования. Существуют приборы, которые способны точно и достоверно определить группу крови и резус-фактор, но даже после использования техники всегда проводится перепроверка, ведь здесь нельзя ошибаться.

Подготовка к сдаче крови на анализ

Группа крови и резус-фактор не меняются в течение всей жизни и не зависят от приема пищи, состояния здоровья, внешних факторов. Поэтому перед сдачей анализа не требуется специфической подготовки. Однако, чтобы снизить риск ухудшения качества исследования, важно сдавать материал натощак, а ужин должен быть легким и обязательно не позже 18.00.

Группа крови на рукаве

В жизни происходят разные ситуации, никто не застрахован от травм или несчастных случаев. Каждому человеку нужно знать свою группу крови, ведь при наступлении чрезвычайных обстоятельств эта информация может спасти жизнь в прямом смысле слова. Не зря в паспорт медработники ставят всем желающим соответствующую печать. Берегите здоровье свое и своих родных людей!

Стандартные эритроциты ID-Diacell для определения антиэритроцитарных антител

Стандартные эритроциты ID-Diacell I+II+III представляют собой три флакона, содержащие по 0,8 % суспензии эритроцитов определенного фенотипа, каждый из которых взят у одного донора. Хранятся во флаконах вместимостью 10 мл при температуре 2 — 8 ºC.

Стандартные эритроциты готовы к использованию и предназначены только для диагностических тестов in vitro. Необходимо уточнять срок годности, информация о котором размещена на этикетке.

Внимание! Любые препараты крови могут являться источниками инфекции и при работе с ними необходимо соблюдать осторожность.

Необходимые реагенты и оборудование

• ID-карты “LISS/Coombs”, ”Coombs/Enzyme test”, “NaCl/Enzyme test”, “Coombs Anti-IgG”, каждая из которых содержит 6 микропробирок, заполненных гелем. Обратите внимание, что если повреждена фольга, есть признаки высыхания или в геле присутствуют пузырьки, то ID-карты  запрещены к использованию;
• ID-пипетка FP-1, FP-2 или FP-3;
• ID-наконечники;
• ID-диспенсер;
• Пробирки для суспензирования эритроцитов;
• ID-рабочий столик;
• ID-центрифуга с фиксированным временем и скоростью вращения на 6, 12 или 24 карты;
• ID-инкубатор 37 ºC.

Для исследования используется свежеприготовленная стабилизированная кровь или сыворотка. Если образцы не подлежат немедленному исследованию, то они хранятся при температуре от 2 до 8 ºC либо при температуре — 20 ºC в случае хранения более 48 часов.

Перед проведением исследования необходимо приготовить 0,8 % взвесь эритроцитов в растворе 2 для аутоконтроля. Используемый раствор должен быть комнатной температуры.

Проведение непрямого антиглобулинового теста

• Маркируется ID-карта “LISS/Coombs”  и удаляется фольга.
• В микропробирки из панели ID-DiaCell I+II+III вносится по 50 мкл стандартных эритроцитов .
• В каждую микропробирку добавляется по 25 мкл исследуемой сыворотки или плазмы.
• Производится инкубация при температуре 37 ºC в течение 15 минут.
• ID-карта центрифугируется в течение 10 минут.
• Читаются результаты.

Проведение холодовой реакции агглютинации в солевой среде

• Охлаждается ID-карта “NaCl/Enzyme” в холодильнике в течение 2 часов при температуре 2 – 8 ºC. Клеточные реагенты и пробы используются в охлажденном виде.
• Маркируется ID-карта и удаляется фольга.
• В микропробирки из панели ID-DiaCell I+II+III вносится по 50 мкл стандартных эритроцитов.
• В отдельную лунку вносится 50 мкл взвеси эритроцитов для аутоконтроля.
• В каждую микропробирку добавляется по 25 мкл исследуемой плазмы или сыворотки.
• Производится инкубация при температуре 2 – 8 ºC в течение 30 минут.
• ID-карта центрифугируется в течение 10 минут.
• Читаются результаты.

Получение положительной реакции означает наличие иммунных антител. Если все стандартные эритроциты панели ID-DiaCell показали положительную реакцию, то необходимо провести аутоконтроль.

При наличии отрицательной реакции специфичность антител устанавливается с помощью таблицы антигеных профилей. Если используемая панель не дает возможности установить специфичность антител, то используется расширенная панель стандартных эритроцитов.

Необходимо учесть, что неверный результат реакции может получиться:

• при приеме определенных лекарств или некоторых паталогических состояниях;
• при загрязнении используемого материала;
• при использовании только одной методики;
• при чрезмерной концентрации эритроцитов;
• при нарушении процедур и использовании непроверенного оборудования.

Использование иных, чем ID-Diluent, ID-DiaCell или ID-DiaPanel, суспензионных растворов и клеточных реагентов может привести к искажению результатов.

На основе материалов сайта Фонда «МеДиКлон» isoseroclon.ru.