Определение осмотической резистентности эритроцитов — Студопедия.Нет

Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ)

Если кровь предохранить от свертывания (гемокоагуляция) и оставить на некоторое время в сосуде, то с течением времени в силу тяжести эритроциты осядут.

СОЭ характерна для каждого вида, пола, возраста животных (очень медленно СОЭ идет у крупного рогатого скота, овец и коз, умеренно быстро у свиней, очень быстро у лошадей) и зависит от состояния организма. При некоторых физиологических состояниях (например, беременность), аллергиях и при целом ряде заболеваний (туберкулез, анемия, гнойное воспаление и др.) СОЭ ускоряется. Поэтому определение СОЭ имеет важное диагностическое значение.

СОЭ зависит от скорости склеивания (агглютинации) эритроцитов. При этом образуются так называемые «монетные столбики». Агглютинация эритроцитов зависит от изменения отрицательного заряда (вследствие чего они отталкиваются друг от друга) на положительный. Электроположительный заряд сообщается эритроцитам за счет адсорбции (поглощения) на их поверхности грубодисперсных белков-глобулинов.

Ход работы Для определения СОЭ применяют прибор Панченкова. Прибор представляет собой штатив, в котором укреплены в вертикальном положении специальные капилляры, Капилляры градуированы в миллиметрах. Метка 0 стоит на расстоянии 100 мм от конца. На капилляре есть еще две метки: К (кровь) — на высоте куля и метка Р (реактив) — на уровне 50 мм.

Капилляр промывают 5% раствором цитрата (лимоннокислый натрий). Затем набирают цитрат до метки Р и выдувают его в чашку Петри. Затем, в этот же капилляр, двукратно набирают кровь животного до метки К. Обе порции крови смешивают с имеющимся в чашке Петри цитратом. Полученную смесь крови с цитратом (в соотношений 4:1) набирают в капилляр до метки О и ставят капилляр в штатив. Через час смотрят какова высота в миллиметрах образовавшегося верхнего столбика плазмы в капилляре. Его величина и является мерой СОЭ.

Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)

Крупный рогатый скот – 0,5-1,5; овцы, козы – 0,5-1; кролики – 1-2; куры – 2-3; собаки – 2-6; свиньи – 2-9; лошади – 40-70 мм/ч. Человек: мужчины – 3-9, женщины 7-12, новорожденные – 0,5, беременные – 45мм/ч.

Воспроизведение гемолиза

Гемолиз –выход гемоглобина из эритроцитов через измененную оболочку в плазму. Гемолиз может происходить как в сосудистом русле, так и вне организма.

Виды гемолиза

1. Вне организма гемолиз может быть вызван гипотоническими растворами – осмотический гемолиз.

Изотонический (физиологический) раствор – раствор хлористого натрия (0,85-0,9% раствор NaСl), имеющий осмотическое давление, одинаковое с осмотическим давлением крови.

Эритроцит + физиологический раствор → эритроцит

Гипертонический раствор – раствор с более высоким осмотическим давлением, чем давление крови.

Эритроцит + гипертонический раствор→сморщивание  

                                                         (плазмолиз) эритроцита

Гипотонический раствор – раствор с более низким осмотическим давлением, чем давление крови.

Эритроцит + гипотонический раствор→эритроцит разбухает, оболочка разрушается, гемоглобин выходит в раствор

2. Механический гемолиз. Наблюдается при резком встряхивании, перемешивании крови.

3. Химический гемолиз. Возникает при действия кислот, щелочей, эфира, хлороформа. спирта, гемолизинов, которые вызывают денатурацию (свертывание) белков, разрушение липидов и нарушение целостной оболочки эритроцита.

4. Физический гемолиз. Низкая температура вызывает разрушение эритроцитов. Высокая — денатурацию белков оболочки эритроцитов.

5. Биологический гемолиз

. Возникает при укусах ядовитых змей, скорпионов, множественных укусах пчел, при малярии, переливании несовместимой крови. В здоровом организме сосудистый гемолиз происходит лишь в печени, селезенке, красном костном мозге. Такой гемолиз не сопровождается появлением гемоглобина в плазме циркулирующей крови, Биологический гемолиз вызывает появление гемоглобина в плазме крови (гемоглобинемия) и выделение его с мочой (гемоглобинурия).

Воспроизведение гемолиза

В штатив ставят три пробирки: в 1-ю наливают 2 мл физ.раствора, во 2-ю — 2 мл физ.раствора и 5 капель нашатырного спирта, в 3-ю — 2 мл дистиллированной воды. Затем каждую пробирку добавляют по 2 капли крови и, слегка встряхивая пробирки, перемешивают их содержимое. При наличии гемолиза раствор в пробирке становится прозрачным с «лаковым» оттенком.

Определение осмотической резистентности эритроцитов

Осмотическая резистентность эритроцитов

— свойство их противостоять разрушительному воздействию неблагоприятных факторов (физических, химических, механических и др.).

Сущность метода определения осмотической резистентностью эритроцитов заключается в определении устойчивости их к действию гипотонических растворов хлористого натрия. Осмотическая резистентность эритроцитов определяется той концентрацией раствора, при которой еще не наступает гемолиз.

Ход работы.

Раствор	№ пробирок
	1	2	3	4	5
1% раствор NaCl, мл	1	3	5	7	9
Дистиллированная вода, мл	9	7	5	3	1
Всего, мл	10	10	10	10	10
Концентрация NaCl, %	0,1	0,3	0,5	0,7	0,9

В каждую из 5 пробирок с разной концентрацией растворов внести по 2 капли крови, поставить в штатив на 10-15 мин.

В пробирках №1 и №2 произойдет полный гемолиз, в пробирке №3 — частичный гемолиз (раствор окрашивается в слабо-розовый цвет, неразрушенные эритроциты оседают на дно). В пробирках №4 и №5 — гемолиз не произойдет. Через 60-90 мин эритроциты осядут на дно, раствор обесцветится. Из этого следует, что граница резистентности эритроцитов лежи в пределах между 0,5-0,7% раствором хлористого натрия.

Контрольные вопросы.

1. Каков механизм влияния различных факторов на СОЭ?

2. Как влияет на скорость оседания эритроцитов: увеличение числа эритроцитов в «монетных столбиках» и увеличение содержания глобулинов в плазме крови?

3. Что такое гемолиз? Какие виды гемолиза существуют?

4. Какой механизм гемолиза в каждом из наблюдаемых Вами случаев?

5. Что такое осмотическая резистентность эритроцитов?

6. Как определяют осмотическую резистентность эритроцитов?

Литература

1. Г.И. Азимов, Д.Я. Криницин; Н.Ф. Попов Физиология с.-х. животных. – М.- 1958.

2. Большой практикум по физиологии человека и животных. / Под ред. Л.Л. Васильева, И.А. Ветюкова. – М. — 1954.

3. С.И. Гальперин Физиология человека и животных. Учебное пособие для студентов университетов и педагогических факультетов. – М. — 1970.

4. Физиология человека / С.А. Георгиева, Н.В. Белинина, Л.И. Прокофьева, Г.В. Коршунов, Е.Ф. Киричук, В.М. Головченко_, Л.К. Токаева. – М.: Медицина. — 1981.

5 Физиология человека / Под ред. Г.И. Косицкого, 3-е изд., перераб. и доп. — М.: Медицина, 1985. — 544 с.

6. Руководство к практическим занятиям по физиологии / Под ред. Г.И. Косицкого, В.А. Полянцева. – М.: Медицина, 1988.

7. Коробков А.В., Чеснокова С.А. Атлас по нормальной физиологии: Пособие для студ. мед. и биол. вузов / Под ред. Н.А. Агаджаняна. – М.: Высш.шк., 1986. — 351 с.

8. Георгиевский В.И. Практическое руководство по физиологии с.-х. животных. Учеб. пособие для с.-х. вузов. М.: Высш.шк. — 1976. — 352 с,

 

 

РОССИЙСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ДРУЖБЫ НАРОДОВ

 

КАФЕДРА АНАТОМИИ, ФИЗИОЛОГИИ

И ХИРУРГИИ ЖИВОТНЫХ

 

Методика

практического занятия

по физиологии и этологии животных:

«Физиология крови»

План:

Осмотическая резистентность эритроцитов

Обращаясь к врачу, больного для точного диагноза направляют на различные лабораторные исследования. На сегодняшний день медицина предлагает множество разных диагностик, направленных на выявление патологий, вирусов, микробов и прочее. Одним из таких является метод осмотической резистентности эритроцитов. Его применяют при подозрении на гемолитическую анемию, сердечную недостаточность, талассемию, желтуху, артериосклероз и т. д. Эта статья познакомит со всеми важными нюансами метода, расскажет какие показатели ОРЭ считаются нормой и по каким причинам возможно их отклонение.

Применение осмотической резистентности эритроцитов в диагностических целях.

Что это такое

Осмотическая резистентность эритроцитов представляет собой одну из доступных диагностик, с помощью которой осуществляется оценка физико-химических особенностей эритроцитных мембран. Исследование заключается в изучении крови пациента. К основным целям исследования следует отнести:

Как проводится процедура

Обычно перед проведением лабораторных исследования больному необходима подготовка. Но диагностика методом ОРЭ не подразумевает специального режима питания, отказа от чего-либо. Сама процедура заключается во взятии пункции крови из вены, которая набирается в пробирку с гепарином. Если после этого у пациента появилась гематома, для её удаления нужно применить согревающий компресс. Следует уточнить, что исследование также имеет минусы, среди них:

• Длительность выполнения.
• Трудоёмкость.

Существуют разные модификации исследования ОРЭ:

1. Визуальный способ Лимбека и Рибьера. Во время диагностики по 20 мл. капилярной крови добавляют в пробирки, где имеется по 10 мл. раствора NaCL. Далее смесь нужно выдержать один час, в это время в комнате должна быть температура не меньше 15 и не больше 25 градусов. После используют цетрифугирование на протяжении трёх минут, при 2000 об/мин. Завершив эти действия, лаборант приступает к определению максимального, минимального уровня резистентности. Этот метод заключается в использовании немалого количества крови, характеризуется низкой точностью, а также не следует общепринятым нормативам.
2. Колориметрический – подразумевает прямое определение концентрации гемоглобина, который выходит из эритроцитов во время гемолиза. В пробирки, куда заблаговременно был добавлен раствор NaCl, добавляют эритроциты, а после гемометром Сали устанавливают концентрацию гемоглобина. Затем чертят кривую гемолиза. Способ имеет такие же недостатки, как и предыдущий.
3. Метод Л.И.Идельсона. Берут пару пробирок, куда предварительно добавляют по две капли гепарина, а после по 1,5 мл. крови из вены. Одну смесь изучают сразу, а второй дают постоять сутки в термостакане, температура в котором должна быть 37 градусов. Так, для первой диагностики, берут 14 цетрифужных пробирок, куда требуется разлитие по 5 мл. NaCl, концентрация данного раствора должна достигать 1,0 %, и добавляют также по 0,02 мл. крови из первой пробирки с гепарином. Эти ёмкости должны выдержаться полчаса, а затем они центрифугируются при 2000 об/мин. Завершает процедуру фотоколориметрирование насадочной жидкостью, характеризующейся содержанием 1% раствора хлорида натрия. И только потом осуществляется определение интенсивности гемолиза. Такие же действия проводят и со второй пробиркой, которая должна выдержаться сутки.
4. Ещё один способ заключается в смешивании в кювете спектрофотометра эритроцитов вместе с раствором NaCl и регистрации оптической плотности. Длина волны здесь достигает 650 нм, а температура комнаты 20 градусов. Одним из главных минусов способа является обязательное наличие спецоборудования.
5. Регистрация оптической плотности растворов, содержащих NaCL, во время прохождения света с волновой длиной в 670-750 нм. Диагностика проводится за несколько минут.
6. Модификация метода Л.И.Идельсона. Берут три пробирки с 0,01 мл. крови в каждой, эта смесь на протяжении 10 минут проходит центрифугирование, при 2000 об/мин. Далее с помощью спектрофотометра, длина волны которого 414 нм, оценивается, как происходит световой поглощение надосадочной жидкостью. Данный способ сократил трудоёмкость, затраты на лабораторную посуду, но все же имеется и недостаток. Так, интенсивность поглощения может меняться из-за формы гемоглобина.

Показатели нормы

Показатели стойкости эритроцитов норма:

• Минимальная ОРЭ – концентрация натрия хлорида на уровне 0,5-0,45%.
• Максимальная ОРЭ – концентрация натрия хлорида на уровне 0,4-0,35%.

Допустимо небольшое отклонения показателя у пожилых людей и детей, а именно снижение и повышение соответственно.

Отклонения от нормы

Отклонения от нормы могут произойти в сторону понижения или повышения. К причинам первого состояния стоит отнести наличие наследственного сфероцитоза или когда это заболевание возникло в результате приобретённой иммунной гемолитической анемии. Также этот список дополняет наследственный стоматоцидоз. Что касается второго состояния, оно может быть вызвано лептоцитозом, осложнённой аспленией, недугами печени, гипохромной микроцитарной анемией, к примеру, талассемией или железодефицитной анемией.

Причины отклонения

Изменения осмотической резистентности происходят по причине таких факторов:

• Был неправильно подобран анткоагулянт или плохо наполнена пробирка кровью, а также её плохое смешивание с антикоагулянтом.
• Неосторожное обращение с биоматериалом.
• В пробе имеются микроорганизмы, которые вызывают гемолиз.
• Болезни, во время которых снижено количество эритроцитов для исследования. К примеру, пациент может страдать от тяжелой анемии.
• Накануне диагностики проводилось переливание крови.
• Наличие возбудителя малярии приводит к гемолизу, несмотря на условия проведения процедуры.

Признаки нарушения осмотической устойчивости

Считается, что чем меньше ОРЭ, тем раньше наблюдается гемолиз. Причины нарушения осмотической устойчивости кроются в негативных изменениях в функциональных, структурных свойствах мембраны эритроцитов. В свою очередь это происходит вследствие различных врождённых, приобретённых болезней. К примеру, меняет структуру мембран наследственный дефицит глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и микросфероцитоз, некоторые недуги органов, тканей. Также к признакам нарушения относится:

• Быстрая утомляемость.
• Постоянно хочется спать.
• Кожа становится бледной.
• Отказ от пищи.
• Повышается температура тела.
• Беспричинная потеря веса.

Вышеперечисленное свидетельствует о кислородном голодании тканей организма.

Что предпринять

Когда осмотическая резистентность эритроцитов показала отклонения, врачом назначаются дополнительные исследования, чтобы установить точную причину такого состояния. Если становится ясно, что причина кроется не в генетическом недуге, тогда курс терапии приводит эритроциты в норму. При таком лечении больному назначают фолиевую кислоту, железосодержащие препараты, а также кортикостероидные гормоны. Когда имеют место быть тяжелые случаи и частые обострения недугов, прибегают к хирургическому вмешательству для удаления селезёнки.

Профилактика

На сегодняшний день не существует профилактических мер, направленных на предотвращение резистентности эритроцитов. Часто такие нарушения связаны с наследственностью. В этом случае пациенту необходимо обратиться к генетику, чтобы не передать эту проблему своему потомству. Профилактика необходима для предотвращения развития гемолитического криза. Так, больному нужно обеспечить условия для хорошего кроветворения. Ему назначают витамины, лекарство, защищающее от анемии. Помимо этого, потребуется соблюдение специальной диеты, характеризующейся достаточным содержанием железа. Такие меры помогут улучшить показатели ОРЭ.

Зависимость резистентности от формы и зрелости эритроцита

На ОРЭ оказывает влияние форма, возраст клеток. Когда эритроциты в норме у них индекс сферичности небольшой, но при этом в крови могут наблюдаться элементы, имеющие шарообразную форму и низкую устойчивость к разрушению. Они понижают резистентность до 0,4-0,6%. Такая форма может быть наследственной. Также шарообразная форма элементов встречается у зрелых клеток, завершающих жизненный цикл.

Осмотическая резистентность эритроцитов — понятие, метод определения показателей

Эритроциты (другое название – красные кровяные тельца) – это клетки крови, главная функция которых – транспортировка кислорода с кровью от легких ко всем органам и тканям и перемещение углекислого газа в обратном направлении. Любое нарушение нормального функционирования организма может привести к изменению состава крови и, соответственно, к негативному воздействию на эти клетки.

Термин «резистентность» (от латинского resistentia – устойчивость, сопротивление) означает сопротивляемость какому-либо фактору. В данной статье речь пойдет об осмотической стойкости эритроцитов.

Осмотическое давление (от греческого osmos – давление, толчок) возникает в результате проникновения через полупроницаемую мембрану воды из раствора с меньшей концентрацией в раствор с большей для достижения равновесия.

Относительно эритроцитов рассматривают систему «плазма крови – мембрана – цитоплазма (внутреннее содержимое клетки)». Но в организме человека мембрана каждой клетки избирательно проницаема, то есть концентрации большинства веществ в цитоплазме клетки и окружающей ее среды различны.

Способность эритроцитов препятствовать осмотическому давлению и называется осмотической резистентностью.

Метод определения показателя

В лаборатории исследование осмотической устойчивости эритроцитов проводят разведением крови в растворах поваренной соли (NaCl) различных концентраций. В сравнении с содержанием ионов натрия и хлора в цитоплазме эритроцитов выделяют растворы:

• Изотонический. Концентрация соли равна примерно 0,9% – это ее норма в крови. В нем изменения клеток крови не происходит. Широко известно другое его название – физиологический раствор (физраствор).
• Гипотонические. Концентрация ионов в них ниже, из-за осмотического давления в эритроциты поступает вода, и они набухают вплоть до гемолиза (разрушения).
• Гипертонические. Содержание соли в них больше – клетки отдают воду и съеживаются.

Методика оценки осмотической резистентности эритроцитов следующая:

• в пробирки наливают гипотонические растворы (так как в них наблюдается гемолиз) поваренной соли различных концентраций (обычно в диапазоне от 0,22 до 0,7%),
• добавляют по 0,02 миллилитра собранной из пальца или из вены (оттуда результаты будут «чище») крови,
• полученные растворы держат на экспозиции около часа (для воздействия осмотического давления на эритроциты),
• после содержимое пробирки центрифугируют.

По оттенку определяют степень гемолиза (полный гемолиз – ярко-красный раствор, его начало – раствор с розоватым оттенком), для получения более точных показателей используют фотоколориметр – аппарат для оптического измерения концентрации вещества.

В лабораторной диагностике для определения осмотической резистентности эритроцитов используют следующие показатели:

• Максимальная резистентность. Она равна концентрации раствора NaCl, при которой в течение трех часов происходит полный гемолиз. Норма для взрослого человека – от 0,32 до 0,34%, норма для детей грудного возраста – 0,24-0,32%, дошкольного возраста – 0,26-0,36%.
• Минимальная резистентность. Равна концентрации того же раствора, при которой в течение трех часов гемолизу подвергаются только малоустойчивые клетки (цвет раствора получится слегка розовым). Норма для взрослого человека – 0,46-0,48%, норма для детей грудного возраста – 0,46-0,50%, дошкольного возраста – 0,46-0,48%.

В целом у людей солидного возраста осмотическая резистентность эритроцитов ниже, у детей она выше, но ее диапазон шире.

Причины изменения показателей

Повышение осмотической стойкости (максимальная резистентность меньше 0,32%) возникает при следующих патологиях:

1. Массивные кровопотери (более 5% от объема крови), так как в качестве компенсаторного механизма в крови увеличивается число молодых эритроцитов, но в условиях дефицита ресурсов. В итоге образуется большое количество клеток с недостаточно прочными мембранами.
2. Атеросклероз: производные холестерина могут откладываться на мембране эритроцита, что приводит к изменению ее свойств.
3. Механическая желтуха, ее причины: закупорка желчевыводящих протоков вследствие образования желчных камней, заболевания желчного пузыря и некоторые болезни печени.
4. Наследственные анемии, связанные с изменением структуры гемоглобина (гемоглобинопатии): талассемия, серповидно-клеточная анемия.
5. Наследственные заболевания, в результате которых изменяется структура мембраны эритроцитов (мембранопатии).
6. Состояние после удаления селезенки.
7. Истинная полицитемия – чрезмерное увеличение количества клеток крови из-за опухоли в кроветворных органах.
8. Рак органов желудочно-кишечного тракта.

Снижение осмотической резистентности (минимальная становится выше 0,48%) может быть связано с:

1. Отравлением свинцом и его производными.
2. Гемолитической анемией, при которой происходит массивный гемолиз красных кровяных телец. Причины различны: аутоиммунные, наследственные заболевания, гемолитическая желтуха новорожденных и другие.
3. Небольшое снижение возможно из-за туберкулеза, сердечной недостаточности, лейкоза (рак крови), цирроза печени.

Симптомы патологической резистентности эритроцитов и способы борьбы

В норме одним из признаков «старых» эритроцитов (срок нахождения в плазме крови: 100-120 дней) становится низкая осмотическая резистентность. Другой – форма клетки: зрелые эритроциты двояковогнутые, молодые – слегка плоские, а заканчивающие клеточный цикл – сферические. Иммунные клетки опознают последние и разрушают в селезенке.

Патологическая осмотическая резистентность эритроцитов может привести к неконтролируемому гемолизу прямо в кровяном русле, что приводит к следующим симптомам:

• бледность слизистых оболочек, иногда – кожных покровов,
• быстрая утомляемость,
• ухудшение аппетита,
• снижение массы тела,
• постоянное повышение температуры,
• сонливость.

Из-за малой специфичности симптомов данную патологию чаще обнаруживают лишь после лабораторных исследований. Наиболее эффективный способ лечения – устранение причины, то есть основного заболевания (если оно наследственное, то проводят симптоматическую терапию). Профилактические меры общие: здоровый образ жизни, правильное питание, своевременное обращение к специалистам.

Загрузка…

Осмотическая резистентность эритроцитов

Осмотическая резистентность эритроцитов

Для оценки физико-химических свойств эритроцитов исследуют их резистентность к различным воздействиям. Наиболее часто в практике определяют осмотическую резистентность эритроцитов. Различают минимальную и максимальную резистентность. Минимальная резистентность эритроцитов определяется максимальной концентрацией гипотонического (менее 0,85%) раствора натрия хлорида (в серии постепенно уменьшающихся концентраций), при которой начинается гемолиз наименее устойчивых эритроцитов, находящихся в растворе 3 ч. Максимальная резистентность эритроцитов определяется максимальной концентрацией гипотонического раствора натрия хлорида, вызывающего в течение 3 ч гемолиз всех эритроцитов.

Унифицированная методика определения осмотической резистентности эритроцитов в модификации Л. И. Идельсона

Принцип. Количественное определение степени гемолиза эритроцитов в забуференных гипотонических растворах натрия хлорида.

Реактивы: основной раствор (по осмотической концентрации соответствует 10% раствору натрия хлорида), pH 7,4: натрия гидрофосфат безводный (Na₂HPO₄) — 27,31 г или кристаллогидрат (Na₂HPO₄ × 2Н₂0) — 34,23 г; натрия дигидрофосфат кристаллогидрат (NaH₂PO₄ × 2Н₂O) — 4,86 г: натрия хлорид — 180 г; дистиллированная вода — до 2 л. Раствор можно хранить в закрытой посуде в холодильнике несколько месяцев.

Основной раствор разводят в 10 раз дистиллированной водой и получают раствор, по осмотической концентрации соответствующий 1% раствору натрия хлорида. Из этого раствора готовят рабочие растворы, соответствующие растворам натрия хлорида следующих концентраций: 0,85; 0,75; 0,70; 0,65; 0,60; 0,55; 0,50; 0,45; 0,40; 0,35; 0,30; 0,20; 0,10%%. Целесообразно приготовить по 100 мл этих рабочих растворов. Хранят в холодильнике, пригодны они в течение 2 нед.

Специальное оборудование: 1) фотоэлектроколориметр; 2) термостат на 37 °С.

Ход определения. В две стерильные пробирки с 2 каплями гепарина (500 ЕД) вносят по 1,5 мл крови, перемешивают и одну используют для иссле дования, а вторую оставляют на сутки в термостате. В ряд центрифужных пробирок (14 шт.) разливают по 5 мл каждого из рабочих растворов с концентрацией натрия хлорида от 1 до 0,10%. В каждую пробирку добавляют по 0,02 мл гепаринизированной крови и оставляют на 30 мин при комнатной температуре. Центрифугируют смесь при 2000 об./мин в течение 5 мин. Из каждой пробирки сливают надосадочную жидкость и фотометрируют при длине волны 500–560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с длиной оптического пути 1 см против контрольной пробы.

Контрольная проба — надосадочная жидкость в пробирке, содержащей рабочий раствор с концентрацией натрия хлорида 1%.

Расчет. За полный (100%) гемолиз принимают гемолиз в пробирке с 0,1% раствором натрия хлорида. Вычисляют процент гемолиза в каждой пробирке, сравнивая величину экстинкции надосадочной жидкости с экстинкцией, принятой за 100 %, по формуле:

где Е₁ — экстинкция надосадочной жидкости в пробирке с 0,1% раствором натрия хлорида; Е_х — экстинкция исследуемой пробы; 100 — полный гемолиз в пробирке с 0,1% раствором натрия хлорида.

На следующий день повторяют исследование с кровью, инкубированной в течение 24 ч при 37 °С.

Нормальные величины. У здоровых людей в свежей крови гемолиз (минимальная резистентность эритроцитов) начинается при концентрации натрия хлорида 0,50–0,45 %, а полный гемолиз (максимальная резистентность эритроцитов) наблюдается в 0,40–0,35% растворе натрия хлорида.

Клиническое значение. Данное исследование проводят при подозрении на гемолитическую анемию. Наименее устойчивы к гипотоническим растворам сфероциты (появление гемолиза эритроцитов отмечено при более высоких концентрациях натрия хлорида 0,75–0,70 %). Понижение осмотической устойчивости наблюдается не только при наследственном микросфероцитозе, но и при некоторых наследственных несфероцитарных гемолитических анемиях, при аутоиммунной гемолитической анемии. Повышение осмотической резистентности эритроцитов характерно для талассемии, гемоглобинопатии, возможно при механической желтухе.

См. также:

Виды гемолиза

Внутриклеточный гемолиз— стареющие эритроциты разрушаются в ретикулоэндотелиальной ткани селезенки, печени, фагоцитируются макрофагами.

Внутрисосудистый гемолиз- эритроциты способны гемолизироваться /разрушаться/, находясь в циркулирующей крови. Небольшая часть разрушается так даже в норме.

Различные факторы включают один из_……или оба вида гемолиза.

Для оценкиустойчивости мембран эритроцитов проводят определениеin vitro:

Осмотическая резистентность эритроцитов

Уменьшение осмотического давления крови приводит в начале к набуханию, а затем к разрушению эритроцитов — осмотический гемолиз. Мерой осмотической резистентности эритроцитов (ОРЭ) является концентрация NaCI. Отмечают концентрацию NaCI, предшествующую началу гемолиза — min ОРЭ и концентрацию, предшествующую окончанию гемолиза — max ОРЭ. В норме min ОРЭ составляет от 0,46 до 0,48% NaCI ,а max ОРЭ — от 0,32 до 0,34% NaCI.

Нередко определяют кислотную резистентность эритроцитов. В основе также лежит принцип разведения.

Скорость оседания эритроцитов

Если предохранить кровь от свертывания, то при ее стоянии эритроциты оседают.

Факторы, влияющие на величину скорости оседания эритроцитов (СОЭ):

1. Белки плазмы крови — при увеличении в плазме крови концентрации белков, особенно грубодисперсных, СОЭ увеличивается.

2. Количество эритроцитов — увеличение количества эритроцитов и приводит к замедлению СОЭ.

Возможно физиологическоеувеличение СОЭ (при беременности, тяжелой мышечной работе)

и патологическое— как правило при патологиях воспалительного характера.

В норме СОЭсоставляет:

у мужчин — нижняя граница 4 мм/час, верхняя — 12 мм/час;

у женщин — нижняя граница — 4 мм/час, верхняя — 16 мм /час.

47. Понятие о системах групп крови…

В настоящее время установлено, что каждая клетка человеческого организ­ма, в том числе и эритроцит, содержит на своей поверхности набор специфиче­ских белков —Антигенов, закрепленных генетически, которые и обеспечивают её видовую и индивидуальную специфичность.

Кроме антигенов существует и второй класс белков—антителак антиге­нам, которые циркулируют в плазме крови и при взаимодействии с определен­ным антигеном, расположенным на мембране клетки, способны вызыватьреакцию агглютинации, образуя т.н.агглютинационные пары.

На данный момент на поверхности эритроцита обнаружено более 300 раз­лич­­ных антигенов, ряд из которых объединен в более чем20 систем, по которым кровь подразделяется наопределенные группы(АВО, Rh-Hr, Кел-Челлано, М, N, S, Даффи, Льюис, Диего, Лютеран и т.д.).

Т.о., принадлежность человека к той или иной группе крови по различным системам обусловлена генетически, является индивидуальной особенностью и не изменяется в течение всей жизни.

Наиболее важной и практически значимойявляетсясистема АВО.

В основу деления людей на группы крови по этой системе положено

нали­чие или отсутствие на поверхности эритроцитов белков-антигенов (агглютиногенов) А и В. Антигенам А и В соответствуют антитела, обозначаемые буквами греческого алфавита и , названные агглютининами.

Агглютиноген А и агглютинин , агглютиноген В и агглютинин-образуют т.н. агглютинационные пары.В норме в крови у человека таких комби­на­­­­­­ций не встречается,т.е. при отсутствии агглютиногена А в его плазме крови находится агглютинини наоборот. Исходя из этих положений и образуются 4 возможные комбинации антигенов и антител, т.е.система АВО включает в себя 4 группы крови:

Группы крови	Агглютиногены	Агглютинины
I (0)	—	 и 
II (A)	А	
III (B)	В	
IV (АВ)	А и В	—

Классификация по системе АВО:

1. I (0) группа — в эритроцитах не содержатся агглютиногены А и В, в плазме крови имеются агглютинины и.

2. II (A) группа — в эритроцитах у людей с этой группой крови имеется агглютиноген А, а в плазме крови — агглютинин .

3. III (B) группа — в эритроцитах у людей с этой группой крови имеется агглютиноген В, а в плазме крови — агглютинин .

4. IV (АВ) группа — у людей в этой группой крови в эритроцитах имеются агглютиногены А и В, при этом в плазме крови агглютинины отсутствуют.

Агглютиногены А и В неоднородны по своей структуре, т.е. можно выделить подгрупповые факторы, например А₁, А₂…….., В₁, В₂……., и т.д.

Система АВОвпервые описанав 1901 году австрийским ученым Ландштей­нером. Лишь через 30 лет после этого открытия он был удостоен Нобелевской премии.

Антитела  и  являются врожденными. Наиболее интенсивно соответствующие агглютинины вырабатываютсяв возрасте 8-10 лет.

Антитела ипо своей природеявляются соответственноиммуногло­бу­ли­нами М и G, т.е. представляют собой крупномолекулярные белки, не способные проникать через сосудистую стенку, в частности, через фетоплацен­тарный барьер во время беременности, что делает невозможным развитие ситуаций, подобных Резус-конфликту, о котором речь пойдет ниже.

Система резус (Rh-Hr)

Эта следующая по значимости система крови была открыта в 1940 годувсё тем же Ландштейнером совместно с Винером впервые у макак (Makakus rhezus).

Впоследствии оказалось, что и у 85% людей в эритроцитах содержится белок, названный резус-фактором(Rh-фактор). Людей, на эритроцитах которых есть Rh-фактор, называютрезус-положительными, а у которых он отсутствует —резус-отрицательными.

Наследуется Rh-фактор как доминантный признак, т.е. будет проявляться фенотипически и в гетерозиготном состоянии.

В настоящее время установлено, что Резус-фактор наследуется с помощью 3-х антигенов: C, D и Е, однако из нихтолько на D-антиген вырабатываются антитела. Таким образом, резус-положительными называются люди, имеющие на поверхности своих эритроцитов D-антиген.

Существуют отдельные народы (н-р: эвены) со 100% Резус-положительным населением. Среди европеоидов 85% резус-положительных

Особенностью данной системы и отличием от системы АВО является то, что против Rh-фактора нет врожденных антител, однако они могут быть выработаныв следующих ситуациях:

1. Если Rh-положительную кровь перелить Rh-отрицательному пациенту.

2. При беременности Rh-отрицательной женщины Rh-положительным плодом.

Для иммунизации достаточно 0,25 мл Rh(+) крови.Rh-антитела, в отличие от агглютининов  и , являются не полными, следовательно, их молекулярный вес позволяет импроникать через плацентарный барьериз материнского крово­­тока в кровоток плода, что, при достаточной концентрации антител может привести кразвитию резус-конфликта.

Резус-конфликт может развиться:

1. При повторномпереливании Rh-положительной крови Rh-отрицательному пациенту (очень редкая ситуация, страдает реципиент).

2. При повторнойбеременности Rh-отрицательной женщины Rh-положительным плодом. Эту ситуацию называют резус-конфликтом матери и плода (встречается гораздо чаще, страдает плод: варианты — от гемолитической желтухи новорожденных до внутриутробной гибели плода).

В настоящее время, чтобы избежать Резус-конфликта, таким матерям из группы риска при абортах и родах вводят концентрированные анти-D-антитела, которые агглютинируют Rh(+) эритроциты плода в кровотоке матери и не дают её организму выработать собственные анти-D-антитела.

Правила переливания крови:

Если можно не переливать, то не переливать ! (т.е. по возможностипереливать не цельную кровь, а кровезаменители либо отдельные фракции или компоненты крови, в зависимости от конкретных показаний).

1. Определение групп крови донора и реципиента по системе АВО.

Методы определения групп крови:

а. Определение групп крови по стандартным сывороткам.

б. Определение групп крови по стандартным эритроцитам.

в. Перекрестный метод(и по стандартным сывороткам, и по

эритроцитам).

г. Определение групп крови по моноклональным антителам(к

антигенам по системе АВО).

2. Определение резус-принадлежности.

3. Проведение пробы на индивидуальную совместимость(смешивают по одной капле кровь донора и реципиента) — контроль совместимости по другим системам крови (нельзя постоянно переливать кровь от одного донора— м.б. иммунизация по другим системам крови).

4. Проведение пробы на биологическую совместимость(переливают по 10-15 мл крови и выжидают 20 минут, затем повторяют процедуру, т.к. возможно появление клиники гемотрансфузионного шока).

Клиника гемотрансфузионного шока:

1. Реакция агглютинации— агглютинаты блокируют зону микроциркуляции — ишемия тканей — боли в пояснице, одышка, акроцианоз, рефлекторный кашель.

2. Гемолиз— значительное повышение вязкости крови, выход тканевых тромбопластинов (обломки мембран эритроцитов).

3. ДВС-синдром.

Для того, чтобы произошла агглютинация, необходимыследующие условия:

1. Наличие агглютинационной пары.

2. Достаточная концентрация агглютининов. Так, если небольшое количество крови I группы (до 500 мл) ввести в кровеносное русло человеку со II группой, то произойдет разведение агглютининов, они станут неактивными и реакция агглютинации не произойдет.

В настоящее время в плановом порядке переливается только одногруппная кровь!

Однако, в полевых условиях, при экстремальных ситуациях необходимо помнить о втором условии агглютинации. Это позволяет однократно, в объеме до 500 мл использовать для переливания кровь I группы в качестве универсаль­нойпо жизненным показаниям(см.схему совместимости групп крови) .

Таким образом, люди с I группой крови являются «универсальными донорами«, а с IV — «универсальными реципиентами«.

Методы переливания крови:

1. Прямое(по экстренным показаниям, через шприц с тройником и зажимом).

2. Струйное(по экстренным показаниям, донорская стабилизированная кровь).

3. Капельное(по плановым показаниям, донорская стабилизированная кровь).

Работа 2. Определения вязкости крови

ВЯЗКОСТЬ — показатель, характеризующий внутреннее сцепление составных частей крови. Вязкость— это способность оказывать сопротивление течению жидкости при перемещении одних частиц относительно других за счет внутреннего трения. Вязкость имеет большое значение для дви­жения крови по сосудистой системе, т.к. она во много определяет гидродинамические свойства крови. На величину вязкости влияет содержание форменных элементов, гемоглобина и белков плазмы.

Наиболее простым методом определения вязкости крови является наблюдение времени протекания ее через капиллярные трубочки (вискозиметры). Насосать воду в вискозиметр до верхней метки и зажать пальцем выходное отверстие. Определить с помощью секундомера вре­мя вытекания воды (до нижней метки). Проверить трижды. Точно таким же методом определить время вытекания стабилизированной крови из вискозиметра.

Время вытекания крови разделить на время вытекания воды. Полученная величина характеризует вязкость крови. Вязкость крови в 3-6 раз больше вязкости воды. После определения капилляры промыть водой и просушить.

Работа 3. Гемолиз. Осмотическая резистентность

(Устойчивость эритроцитов)

ГЕМОЛИЗ — это выход гемоглобина в плазму (раствор), вызванный повреждением (разрывом или растворением) оболочки эритроцита. Гемолиз может быть вызван воздействием разных повреждающих факторов — механических, термических, химических, осмотических, биологических (гемолизинов).

Осмотический гемолиз происходит при помещении эритроцитов в гипотонический раствор (т.е. раствор с меньшим осмотическим давлением) или в изотонический раствор веществ, способных диффундировать через оболочку эритроцита (мочевина, глюкоза).

Под РЕЗИСТЕНТНОСТЬЮ (устойчивостью) эритроцитов понимают их способность противостоять различным, разрушительным воздействиям. Обычно исследуют резистентность эритроцитов по отношению к гипотоническим растворам хлористого натрия, т.е. их осмотическую устойчивость. В нормальных условиях эритроциты выдерживают концентра­цию хлористого натрия в пределах 0.60…0.40%, не гемолизируясь. У сельскохозяйственных животных наименьшую резистентность имеют эри­троциты овец, коз, свиней, наибольшую — птиц и рыб. В летний период времени резистентноеть эритроцитов животных повышается.

1. Гемолиз под влиянием физических и химических факторов

Берут три пронумерованные пробирки. В первую пробирку наливают 5 мл дистиллированной воды и 5 капель крови. Во вторую- 5 мл 1% раствора хлорида натрия, 1 мл нашатырного спирта и 5 капель крови. В третью — 5 мл 1% раствора хлорида натрия и 5 капель крови. Все пробирки встряхивают и ставят на 5 минут в штатив (рис. 7.).

Рис. 7. Гемолиз и плазмолиз эритроцитов.

1- физический гемолиз; 2- химический гемолиз; 3-плазмолиз эритроцитов.

ПЛАЗМОЛИЗ — сморщивание, сжатие эритроцитов, в гипертонических растворах (в пробирке раствор мутный, появляется взвесь эритроцитов).

Физический гемолиз – разрыв, разрушение оболочки эритроцитов и выход гемоглобина в плазму (раствор) (в пробирке раствор прозрачный, ярко красного цвета).

Химический гемолиз – растворение оболочки эритроцитов и выход гемоглобина в плазму (раствор) (в пробирке раствор прозрачный темно красного цвета).

Записывают результаты, обращая внимание на степень окраски жидкости и на ее прозрачность.

2. Определение осмотической резистентности эритроцитов

Приготавливают растворы хлорида натрия различной концентрации из 1% раствора хлорида натрия по следующей схеме (табл. 13):

Таблица 13

№ пробирки	1% раствор хлорида натрия (исходный раствор), мл	Дистиллированная вода, мл	Концентрация (рабочего раствора) хлорида натрия, %	Окраска раствора после центрифугирования	Осадок эритроцитов	Границы резистентности
1	0.9	0.1	0.9
2	0.8	0.2	0.8
3	0.7	0.3	0.7
4	0.6	0.4	0.6
5	0.5	0.5	0.5
6	0.4	0.6	0.4
7	0.3	0.7	0.3
8	0.2	0.8	0.2

В каждую пробирку пипеткой вносят по 2 капли стабилизированной крови, хорошо смешивают и дают постоять 3…5 минут. Затем все пробирки центрифугируют при 2000 об/мин.

По результатам опыта определяют минимальную, максимальную резистентность и ширину резистентности. Занести в таблицу результаты «+» — полный гемолиз, «» — частичный гемолиз, «-» — отсутствие гемолиза.

Минимальная резистентность эритроцитов соответствует концентрации хлорида натрия (0.7…0.5%), обуславливающей частичный гемолиз эритроцитов, в пробирках жидкость слабо окрашена, на дне пробирок имеется осадок эритроцитов.

Максимальная резистентность эритроцитов соответствует концентрации хлорида натрия (0.4…0.2%), обуславливающей полный гемолиз, в пробирках жидкость прозрачна, окрашивается в ярко красный цвет, осадок эритроцитов отсутствует.

ВОПРОСЫ:

1. Что показывает гематокритный показатель?

2. Что такое вязкость крови, как ее определить?

3. Объясните явления гемолиза и укажите его причины.

4. Что называется осмотической резистентностью эритроцитов?

5. Дайте понятие минимальной и максимальной резистентнооти эритроцитов.

6. Что называется изо-, гипо-, гипертоническими растворами хлорида натрия и каково их действие на эритроциты?

ЗАНЯТИЕ 3. СКОРОСТЬ ОСЕДАНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ (СОЭ). ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА ГЕМОГЛОБИНА В КРОВИ ПО САЛИ И С ПОМОЩЬЮ ЭРИТРОГЕМОМЕТРА

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: Овладеть методикой определения скорости оседания эритроцитов, выяснить механизм реакции оседания эритроцитов и его значение для клиники, овладеть методикой определения количества гемоглобина по Сали и с помощью эритрогемометра, определить его количество, изучить основные свойства и значение гемоглобина.

Осмотическая резистентность эритроцитов

Эритроциты – красного цвета кровяные тельца, как и все «организмы», имеют определенный срок жизнедеятельности.

Длительность существования данного компонента определяют интервалом времени, которое начинается с момента образования «красной клетки» до времени ее разрушения организмом человека (впрочем, любым организмом млекопитающего).

Лимфатическая система человека добавляет, так называемые, маркеры к уже не пригодным эритроцитам, с помощью которых селезенка определит и выводит непригодные клетки из системы кровообращения человека.

При выводе из системы, эритроциты подвергаются разложению на различные вещества. Так, к примеру, железо, образуемое при распаде – билирубин, отправляется в печень для дальнейшего использования в организме.

Эритроцит, для нормальной функциональности, должен быть довольно прочным и эластичным. Также, должен сопротивляться разрушению под воздействием осмотического давления. Свойство, сопротивляться разрушения под активным действием осмотического давления, эритроцитов называется осмотической резистентностью эритроцитов.

Метод определения резистентности

В лабораторных условиях стойкость к разрушению эритроцитов проводят при помощи ввода в равные объемы крови солевых растворов, причем различной концентрации. Осмотическая насыщенность жидкости в обычных условиях организма внутри и снаружи жидкости равна. При проведении данного анализа выявляют стабильность мембран эритроцитов. Причем, в гипертоническом солевом растворе эритроциты теряют воду, обретают сморщенный вид. В гипотоническом – эритроциты наоборот перенасыщаются водой, увеличиваются в размерах до пикового уровня. Превышение в размерах эритроцита сопровождается гемолизом, в ходе которого происходит выброс гемоглобина в кровь.

Количество эритроцитов, которое считается нормальным в изотоническом растворе, то есть в норме, принято считать за сто процентов. Критическое количество эритроцитов в крови человека 146 процентов. Недавно мы публиковали статью о пониженном объеме эритроцитов в крови, ознакомьтесь, будет интересно.

Зависимости от зрелости

Осмотическая резистентность эритроцитов напрямую зависит от их возраста, зрелости, формы самого эритроцита и состава плазмы крови. Касательно формы эритроцита, то она определяется при помощи сопоставления размеров, толщины и диаметра. Нормальный размер эритроцита называют индекс сферичности. Нормальный индекс сферичности составляет 0,27-0,28. Данный индекс может быть значительно отличавшимся от нормы, к примеру, при наследственности шарообразных эритроцитов. Данное проявление эритроцитов в значительном образе снижает стойкость эритроцитов к осмотическому давлению.

Норма устойчивости 0,32-0,44 процента раствора NaCl, в случае шарообразных эритроцитов 0,4-0,6 процента. Также, округлую форму имеют эритроциты, которые находятся на стадии завершения своего жизненного пути.

Наиболее резистентными эритроцитами являются те, которые появляются в кровотоке, выходя из костного мозга, а наиболее стойкими — молодые красные тельца, которые имеют более плоскую форму, с незначительным индексом сферичности.

Причины изменения осмотической резистентности эритроцитов

Причинами увеличения стойкости эритроцитов является механическая желтуха, в течение чего происходит адсорбция холестериновых отложений на эритроцитов. Артериосклероз, на эритроцитах начинают скапливаться продукты распада белка. Раковые заболевания желудочно-кишечного тракта. Кровопотеря.

В последних двух случаях кровь перенасыщается незрелыми эритроцитами, которые имеют малый индекс сферичности. К уменьшению устойчивости к осмотическому давлению, может приводить следующее:

• недостаточная работа сердца, эритроциты в данном случае набухают, приобретают высокий индекс сферичности, что приводит к их малому сроку жизни;
• наследственность, связанная с большим количеством шарообразных эритроцитов;
• конечные стадии жизни эритроцитов, старение, и, как продолжение приобретения шарообразной формы, значительное увеличение проницаемости стенок эритроцитов.

Симптоматика

Симптомами нарушения осмотической резистентности эритроцитов можно считать следующее:

• быстрая общая утомляемость;
• упадок сил;
• полное отсутствие аппетита;
• повышение температуры тела, может достигать значительных отметок;
• потеря веса;
• постоянная сонливость;
• бледность видимых слизистых оболочек.

В течение данного нарушения иммунная система организма помечает маркерами, а в дальнейшем выводится селезенкой из организма большое количество эритроцитов. Печень не в полной мере справляется с билирубином, образовавшемся в ходе распада эритроцитов. Результатом такого процесса в организме происходит развитие болезни называемой гемолиз. Конечным этапом такого течения, есть недостаток эритроцитов в крови, что ведет за собой недостаточное насыщение клеток и тканей организма кислородом.