Определение количества лейкоцитов. Методика подсчета лейкоцитов в камере горяева, нормы показателей и отклонения
Метод подсчета в камере. Взятие и разведение крови производят пробирочным методом. В пробирку (лучше видалевскую) вносят 0,4 мл разводящей жидкости и 0,02 мл капиллярной крови. Полученное разведение практически считается равным 1: 20. В качестве разводящей жидкости обычно употребляют 3-5%-ный раствор уксусной кислоты, подкрашенной метиленовым синим (уксусная кислота лизирует эритроциты, метиленовый синий окрашивает ядра лейкоцитов). Перед заполнением камеры Горяева пробирку с разведенной кровью тщательно встряхивают. Камеру заполняют так же, как для подсчета эритроцитов.
Лейкоцитов гораздо меньше, чем эритроцитов (1-2 на большой квадрат), поэтому для точности подсчет производят в 100 больших квадратах (неразграфленных). Расчет: в 100 больших квадратах (1600 малых) сосчитано а лейкоцитов. Помня, что объем малого квадрата равен 1/4000 мм3, а кровь разведена в 20 раз, рассчитывают количество лейкоцитов в 1 мкл крови: 4000 ґ 20 и делят на 1600 = а х 1/2. Практически для получения действительного содержания лейкоцитов в 1 мкл крови достаточно полученное при подсчете число разделить пополам и приписать 2 нуля.
В среднем ошибка метода составляет ± 7%.
Более точным (ошибка 2-3%) и совершенным является подсчет лейкоцитов с помощью электронных аппаратов. Подсчет лейкоцитов в счетчиках частиц производят по тому же принципу, что и эритроцитов. Предварительно кровь разводят и смешивают с каким-либо лизирующим эритроциты реактивом. В автоанализаторе “Техникон” в качестве такового применяют раствор уксусной кислоты, в аппаратах “Культер” и “Целлоскоп” — сапонин или сапоглобин, которые добавляют разведенными (1: 500, 1: 700) в изотоническом растворе хлорида натрия (6 капель на 20 мл разведения).
Подсчет лейкоцитарной формулы крови производят в окрашенных мазках периферической крови. Считать лучше ближе к концу мазка в самом тонком месте, не менее 200 клеток (исключение составляют выраженные лейкопении), а затем выводят процентное соотношение отдельных видов лейкоцитов. Подсчет рекомендуется производить в одном порядке: половину клеток считать в верхней, половину — в нижней части мазка, не заходя на самый край и середину, по зигзагу (3-4 поля зрения вдоль мазка, 3-4 поля под прямым углом к середине мазка, затем 3-4 поля в сторону параллельно краю, вновь под прямым углом вверх и так далее в одну сторону).
Приготовление мазков.
Тщательно вымытым и обезжиренным предметным стеклом (его краем) прикасаются к капле крови на месте укола. Мазок делают шлифовальным стеклом, поставив его под углом в 45° к предметному стеклу впереди капли. Подведя стекло к этой капле, ждут, пока кровь расплывется вдоль его ребра, затем быстрым легким движением проводят шлифовальное стекло вперед, не отрывая от предметного раньше, чем иссякнет вся капля.
Правильно сделанный мазок имеет желтоватый цвет (тонкий), не достигает краев стекла и заканчивается в виде следа (усов).
Окрашивание сухих мазков производят после предварительной фиксации. Лучшая фиксация достигается в абсолютном метиленовом спирте (3-5 мин) или в смеси Никифорова из равных частей абсолютного этилового спирта и эфира (30 мин).
Методы диагностики типовых нарушений лейкоцитов
1. Определение количества лейкоцитов:
1.1. Подсчет количества лейкоцитов в камере;
1.2. Подсчет количества форменных элементов в автоматическом счетчике.
2. Подсчет лейкоцитарной формулы. Исследование морфологии клеток крови.
Определение количества лейкоцитов (для мдф) Подсчет количества лейкоцитов в камере Горяева
Принцип основан на подсчете лейкоцитов в 1 мкл крови при постоянном ее разведении и определенном объеме счетной камеры.
Реактив – раствор уксусной кислоты (30–50 г/л), подкрашенный водным раствором метиленового синего (10 г/л) или раствором генцианвиолета (10 г/л).
Оборудование:
Пробирки 10×1 см или видалевские
Пипетка на 1 мл или дозатор, отрегулированный на 0,4 мл
Пипетка на 0,02 мл
Камера Горяева
Микроскоп.
Ход определения: лейкоциты считают в 100 неразграфленных больших квадратах, что соответствует 1600 малым (100×16).
Расчет: результаты подсчета лейкоцитов в больших квадратах суммируют и производят вычисление их количества в 1 мкл крови по формуле:
а × 4000 ×20
Х = ––––––––––––– , где
1600
Х – количество лейкоцитов в 1 мкл крови
а – количество ФЭК, сосчитанных на 100 больших квадратах
1600 – количество малых квадратов
20 – разведение крови
4000 – множитель, приводящий результат к объему 1 мкл крови, исходя из объема малого квадрата (1/4000 мкл).
Для перевода в единицы СИ (в 1 л крови) полученную цифру еще умножают на 106.
Клинико-диагностическое значение: изменения количества лейкоцитов трактуют с учетом индивидуальной нормы.
Подсчет лейкоцитарной формулы. Исследование морфологии клеток крови
Лейкоцитарная формула (лейкограмма) – процентное соотношение различных видов лейкоцитов.
Подсчет лейкоцитарной формулы проводится с помощью иммерсионной системы микроскопа. Для работы используется специальное иммерсионное масло, каплю которого наносят на препарат. Под визуальным контролем в нее опускают иммерсионный объектив, маркированный черной полоской и, глядя в окуляр, медленным движением макровинта поднимают тубус микроскопа до получения изображения, а с помощью микровинта добиваются четкости.
Рисунок 6 – Счетчик лабораторный СЛ-1
В последнее время для подсчета лейкоцитарных формул выпускают более совершенные варианты счетчиков, работа с которыми проводится в соответствии с прилагаемыми к ним инструкциями.
Рисунок 7 – Техника подсчета лейкоцитов
Подсчет ведут по зигзагообразной линии («линии Меандра»): 3–5 полей зрения вдоль края мазка, затем 3–5 полей зрения под прямым углом к середине мазка, потом 3–5 полей зрения параллельно краю и вновь под углом 900 возвращаются к краю мазка. Такое движение продолжают до тех пор, пока не будет сосчитана половина клеток. Затем переходят на противоположную сторону мазка и аналогично считают вторую половину клеток.
При подсчете лейкоцитарной формулы подсчитывают целые, не разрушенные клетки, а также обращают внимание на наличие дегенеративных изменений в лейкоцитах (токсогенную зернистость, пельгеризацию и/или гиперсегментацию ядер, пикноз ядер, вакуолизацию ядер и цитоплазмы и др.).
Клинико-диагностическое значение: при увеличении или уменьшении тех или иных форм лейкоцитов можно судить о различных патологиях.
Контрольные вопросы по теме
:Какие Вы знаете патологические формы лейкоцитов?
В чем заключается общебиологическое значение лейкоцитозов и лейкопений?
При каких ситуациях встречается физиологический лейкоцитоз?
При каких состояниях и заболеваниях встречается эозинофилия?
Что представляет собой панмиелофтиз?
Что характеризует индекс Боброва?
О чем свидетельствует сдвиг лейкоцитарной формулы вправо?
Какие Вы знаете сдвиги лейкоцитарной формулы влево?
Охарактеризуйте гематологические критерии агранулоцитозов.
Правила расчета относительного и абсолютного увлечения и снижения различных групп лейкоцитов в лейкоцитарной формуле.
Назовите отличия лейкемоидных реакций от лейкозов?
Методы диагностики типовых нарушений лейкоцитов
1. Определение количества лейкоцитов:
1.1. Подсчет количества лейкоцитов в камере;
1.2. Подсчет количества форменных элементов в автоматическом счетчике.
2. Подсчет лейкоцитарной формулы. Исследование морфологии клеток крови.
Определение количества лейкоцитов (для мдф) Подсчет количества лейкоцитов в камере Горяева
Принципоснован на подсчете лейкоцитов в 1 мкл крови при постоянном ее разведении и определенном объеме счетной камеры.
Реактив – раствор уксусной кислоты (30–50 г/л), подкрашенный водным раствором метиленового синего (10 г/л) или раствором генцианвиолета (10 г/л).
Оборудование:
Пробирки 10×1 см или видалевские
Пипетка на 1 мл или дозатор, отрегулированный на 0,4 мл
Пипетка на 0,02 мл
Камера Горяева
Микроскоп.
Ход определения: лейкоциты считают в 100 неразграфленных больших квадратах, что соответствует 1600 малым (100×16).
Расчет: результаты подсчета лейкоцитов в больших квадратах суммируют и производят вычисление их количества в 1 мкл крови по формуле:
а × 4000 ×20
Х = ––––––––––––– , где
1600
Х – количество лейкоцитов в 1 мкл крови
а – количество ФЭК, сосчитанных на 100 больших квадратах
1600 – количество малых квадратов
20 – разведение крови
4000 – множитель, приводящий результат к объему 1 мкл крови, исходя из объема малого квадрата (1/4000 мкл).
Для перевода в единицы СИ (в 1 л крови) полученную цифру еще умножают на 106.
Клинико-диагностическое значение: изменения количества лейкоцитов трактуют с учетом индивидуальной нормы.
Подсчет лейкоцитарной формулы. Исследование морфологии клеток крови
Лейкоцитарная формула (лейкограмма) – процентное соотношение различных видов лейкоцитов.
Подсчет лейкоцитарной формулы проводится с помощью иммерсионной системы микроскопа. Для работы используется специальное иммерсионное масло, каплю которого наносят на препарат. Под визуальным контролем в нее опускают иммерсионный объектив, маркированный черной полоской и, глядя в окуляр, медленным движением макровинта поднимают тубус микроскопа до получения изображения, а с помощью микровинта добиваются четкости.
Рисунок 6– Счетчик лабораторный СЛ-1
В последнее время для подсчета лейкоцитарных формул выпускают более совершенные варианты счетчиков, работа с которыми проводится в соответствии с прилагаемыми к ним инструкциями.
Рисунок 7 – Техника подсчета лейкоцитов
Подсчет ведут по зигзагообразной линии («линии Меандра»): 3–5 полей зрения вдоль края мазка, затем 3–5 полей зрения под прямым углом к середине мазка, потом 3–5 полей зрения параллельно краю и вновь под углом 900возвращаются к краю мазка. Такое движение продолжают до тех пор, пока не будет сосчитана половина клеток. Затем переходят на противоположную сторону мазка и аналогично считают вторую половину клеток.
При подсчете лейкоцитарной формулы подсчитывают целые, не разрушенные клетки, а также обращают внимание на наличие дегенеративных изменений в лейкоцитах (токсогенную зернистость, пельгеризацию и/или гиперсегментацию ядер, пикноз ядер, вакуолизацию ядер и цитоплазмы и др.).
Клинико-диагностическое значение: при увеличении или уменьшении тех или иных форм лейкоцитов можно судить о различных патологиях.
Контрольные вопросы по теме:
Какие Вы знаете патологические формы лейкоцитов?
В чем заключается общебиологическое значение лейкоцитозов и лейкопений?
При каких ситуациях встречается физиологический лейкоцитоз?
При каких состояниях и заболеваниях встречается эозинофилия?
Что представляет собой панмиелофтиз?
Что характеризует индекс Боброва?
О чем свидетельствует сдвиг лейкоцитарной формулы вправо?
Какие Вы знаете сдвиги лейкоцитарной формулы влево?
Охарактеризуйте гематологические критерии агранулоцитозов.
Правила расчета относительного и абсолютного увлечения и снижения различных групп лейкоцитов в лейкоцитарной формуле.
Назовите отличия лейкемоидных реакций от лейкозов?
Методика подсчета лейкоцитов в камере Горяева, нормы показателей и отклонения
Камера Горяева – это приспособление для измерения числа клеток и частиц в определённом объёме жидкости (кровь, моча), состоящее из специального толстого предметного и покровного стёкла.
Предметное стекло имеет углубленную площадку посередине, на которую нанесена сетка из 225 больших квадратов. Из этих квадратов 25 равномерно разделены на 16 меньших квадратов. Благодаря такому объёму сетки подсчёт выполняется точнее, нежели в других ручных счётных устройствах.
Камера ГоряеваОбслуживание камеры
После использования инструмента предметное стекло дезинфицируют путём погружения в 4% раствор формалина на час или в 70% раствор этилового спирта на полчаса. После этого камеру тщательно промывают дистиллированной водой. Излишек жидкости убирают мягкой салфеткой. Стоит обратить внимание на то, что камеру нельзя протирать ватным тампоном из-за цепляющихся к ней волокон. Хранится стекло в сухом месте.
Правило Егорова
Во время использования камеры в подсчитываются те ФЭ, которые располагаются внутри квадрата сетки и на верхней и левой линии его периметра. При этом частицы, касающиеся правой и нижней линии периметра во время расчёта данной клетки не включаются.
Определение лейкоцитов в крови
Методика подсчёта лейкоцитов
Подсчёт количества лейкоцитов начинается с разведения крови в 3-5% растворе этановой кислоты с метиловой синью в 20 раз. Рабочий материал перед применением протирают марлей насухо.
Покровное стекло нужно протереть до возникновения цветных колец Ньютона. Далее, камеру заполняют разведённой кровью, при этом первые две капли выпускают на фильтровальную бумагу. Жидкость попадает в камеру благодаря капиллярному свойству воды. Важно проследить, чтобы в желобки при заполнении ничего не затекало. Если это произошло, жидкость аккуратно убирают фильтровальной бумагой. Затем оставляют сетку в покое на минуту, ожидая, пока ФЭ остановят своё движение.
Подсчёт лейкоцитов осуществляется в пределах ста больших квадратов при малом увеличении, то есть при окуляре 10х и объективе 8х, по правилу Егорова. Полученная цифра используется в формуле.
Х = (n × 250 × 20) / 100 или Х = n × 50
Х – количество лейкоцитов.
n – число, полученное в результате подсчёта в камере.
Количество лейкоцитов определяют, принимая во внимание число больших квадратов сетки – 100 и разведение крови – 20.
Как происходит подсчет лейкоцитовНорма лейкоцитов и отклонения
Норма лейкоцитов у людей составляет 4,0 – 9,0 × 10⁹/л. Или, по-другому, в 1 кубическом мм крови располагается примерно 6000 белых кровяных клеток.
На отклонения от нормы могут влиять внешние физиологические факторы:
- приём пищи перед сдачей крови;
- стресс;
- беременность или менструация у женщин;
- переохлаждение или перегрев;
- большая физическая нагрузка перед сдачей анализов.
Если количество белых кровяных клеток превышает 9,0 × 10⁹/л (повышены лейкоциты), такое состояние называется лейкоцитозом. Подобную картину можно увидеть при злокачественных заболеваниях крови, инфекциях, поражениях радиацией и отравлениях.
Лекарственные препараты тоже способны увеличить количество лейкоцитов. Некроз тканей, обильные кровотечения, в том числе в результате операций, почечная кома, болезни сердца – всё это может привести лейкоцитозу.
Падение количества лейкоцитов ниже 3,9 × 10⁹/л называется лейкопенией. Однако у некоторых людей фиксируется постоянное число лейкоцитов в количестве 3,5 × 10⁹/л. Принято считать, что у таких людей сохраняется резерв этих клеток в тканях в 50 раз больше, нежели в крови. Еще встречается функциональная лейкопения после введения анальгетиков, сульфаниламидов и других лекарственных препаратов, после долгой мышечной работы, в результате поражения инфекциями и вирусами (тиф, грипп, корь).
Лейкоцитарная формула
Все виды лейкоцитов составляют лейкоцитарную формулу. По ней можно выявить определённые патологии. Нормы формулы меняются в зависимости от возраста и периода жизни человека. Сдвиг хорошо заметен у женщин во время беременности или после родов.
Применяются разные способы подсчёта соотношения видов этих клеток, но все они связаны с тем, что более тяжелые клетки (базофилы, например) располагаются ближе к краю мазка, а лимфоциты, как легкие клетки, остаются в середине.
- Метод Филипченко. В данном способе подсчёт осуществляется по поперечной прямой границы одного конца к другому. Мазок при этом мысленно разделяют на три части.
- Метод Шиллинга. Лейкоциты подсчитывают в четырех участках мазка.
Полученные данные записываются в таблицу. Индивидуально количество каждого вида белых клеток крови высчитывается по формулам. Отмечаются те элементы, которые попали в поле зрения. Счёт ведётся до того, момента, пока сумма всех подсчитанных клеток не составит 100.
Методика подсчёта лейкоцитов в моче
В моче подсчитывается количество лейкоцитов в камере Горяева по Нечипоренко. Этот анализ нужен для мониторинга заболеваний почек. Периодическое исследование мочи помогает проследить за правильностью лечения и эффективностью назначенной терапии.
Сбор мочи
В изучение идёт только первая утренняя моча в середине мочеиспускания. Для пациента важно следовать основным правилам сбора этого биоматериала. Специальной дополнительной подготовки для исследования не требуется.
Методика расчета
10 мл свежесобранной мочи центрифугируют в течение трёх минут при 2,5 тыс. оборотов в минуту. Перед этим необходимо проследить, чтобы моча, во избежание частичного распада клеток, имела слабокислую реакцию.
При помощи пипетки с узким оттянутым концом убирают верхний слой. В пробирке оставляют от 0,5 мл мочи до 1 мл в зависимости от объёма осадка.
Осадок аккуратно перемешивают с надосадочной жидкостью. Полученным раствором заполняют счётную камеру Горяева по схожему принципу, что используется при подсчёте ФЭ крови. Камеру оставляют в покое от 3 до 5 минут.
Лейкоциты необходимо подсчитать в больших квадратах по всей сетке с окуляром 7х и объективом 40х.
Полученная цифра используется в формуле:
Х = (а/0,9) × (1000/V)
Х – число лейкоцитов в 1 мл мочи.
а – подсчитанное количество, делённое на объём камеры в 1 мкл осадка мочи.
v – Количество мочи, взятой для исследования.
1000 – количество осадка.
Это важно! Норма лейкоцитов: в 1 мл мочи не более 2 × 10³ белых кровяных клеток.
Занятие 3. Подсчет форменных элементов крови. Определение цветового показателя крови.
Цель занятия: |
|
Форменные элементы подсчитывают в цельной или стабилизированной крови животных. Подсчет эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов производят в определенном объеме крови (1мм) при помощи специальных счетных камер, с предварительным разбавлением крови или методов подсчета с помощью фотометрических, электронных и других приборов.
Работа 1. Камера Горяева
Счетная камера Горяева представляет собой толстое предметное стекло, в средней части которого имеются четыре желобка. Между ими образуются узкие площадки. Средняя площадка ниже боковых на 0,1 мм и разделена пополам поперечным желобком. По обе стороны от него расположены сетки, нанесенные на стекло. При наложении на боковые площадки покровного стекла над сеткой образуется камера глубиной 0,1 мм (рис. 1).
Рис. 1. Камера Горяева
Рис. 2. Сетка Горяева
Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратиков, каждый третий из которых разделен продольными и поперечными линиями на 16 маленьких квадратиков. Сторона маленького квадратика равна 1/20 мм , площадь квадратика 1/400 мм2, обьем камеры над ним равен 1/4000 мм3 (рис. 2).
Рассмотреть камеру и сетку Горяева под микроскопом на малом и большом увеличении.
Работа 2. ПОДСЧЕТ ЭРИТРОЦИТОВ В КАМЕРЕ ГОРЯЕВА
Реактивы и оборудование: стабилизированная кровь, 0,9-%-ный р-р натрия хлорида, микроскоп, лабораторные пробирки, дозаторные микропипетки или капилляр от гемометра Сали, глазные пипетки.
Ход работы: в сухую чистую пробирку внести 8 мл 0,9-%-ного р-ра натрия хлорида и капиллярной пипеткой 0,02 мл крови. Предварительно кончик пипетки вытереть, кровь выдуть на дно пробирки, а пипетку промыть верхним слоем жидкости. Содержимое пробирки хорошо перемешать. В результате получили разведение крови 1:400, т.е. кровь разбавили в 400 раз.
Камеру Горяева и покровное стекло вымыть и насухо вытереть. Покровное стекло притереть к камере так, чтобы появились радужные кольца (кольца Ньютона). Это служит показателем того, что стекла прилегают вплотную
Заполнить камеру Горяева каплей разведенной крови, поднеся глазную пипетку к краю покровного стекла. Капля заполняет камеру в результате капиллярных сил. Излишек раствора при этом стекает в желобки.
Если на сетку попал воздух, то камеру следует промыть дистиллированной водой, насухо вытереть и заполнить снова.
Заполненную камеру поставить под микроскопии через 1 мин считать эритроциты под малым увеличением микроскопа (объектив х8, окуляр х10 или х15) с прикрытой диафрагмой или опущенным конденсатором (в затемненном поле зрения).
Подсчет эритроцитов производить в 80 маленьких квадратиках, то есть в 5 больших квадратиках по диагонали или по углам сетки и посередине ее. Считают клетки, находящиеся внутри квадрата, а также на левой и пограничных линиях. Порядок подсчета представлен на рис. 3.
Рис. 3. Порядок подсчета эритроцитов в камере Горяева
Найти среднее арифметическое число эритроцитов в одном маленьком квадрате. Для этого полученное число эритроцитов (Э) делим на 80 (в одном большом квадрате находится 16 маленьких: 5х16=80). Объем пространства над одним маленьким квадратом равен 1/4000 мм3. Умножая полученное число на 4000, получаем количество эритроцитов в 1 мм3 разведенной крови; умножая на 200, получаем количество эритроцитов в миллионах в 1 мкл цельной крови.
Итоговая формула для исчисления следующая:
Число эритроцитов в 1 мкл = | Э х 4000 х кратность разведения |
80 |
где Э – среднее арифметическое число эритроцитов в 5 больших квадратах (80 маленьких).
ВЫВОД (сделайте вывод о количестве эритроцитов в крови)
Работа 3. вычесление цветового показателя
Цветовой показатель – это процентное отношение содержания гемоглобина к числу эритроцитов в единице объема крови (1мм3).
ЦП = | 3 х Hb (г/л) |
три первые цифры от числа эритроцитов |
В норме ЦП равен 1 или близок к ней. Такие эритроциты называют нормохромными. При ЦП 0,8 и ниже эритроциты слабо насыщены гемоглобином и называются гипохромными. При ЦП выше 1 эритроциты называются гиперхромными.
Рассчитайте цветовой показатель, используя значения гемоглобина, полученные на предыдущем занятии.
ВЫВОД (сделайте вывод о содержании гемоглобина в эритроцитах)
ПОДСЧЕТ ЛЕЙКОЦИТОВ В КАМЕРЕ ГОРЯЕВА
Реактивы и оборудование: стабилизированная кровь, 3%-ный р-р ледяной уксусной кислоты, подкрашенный метиленовым синим (1 мл 1%-ного водного раствора краски на 100 мл уксусной кислоты), микроскоп, лабораторные пробирки, дозаторные микропипетки или капилляр от гемометра Сали, глазные пипетки.
Ход работы: в пробирку внести 0,4 мл 3-5%-ного раствора уксусной кислоты, подкрашенного метиленовым синим (жидкость Тюрка). Капиллярной пипеткой набрать 0,02 мл крови, конец пипетки тщательно протереть. Перенести кровь в пробирку, пипетку промыть жидкостью Тюрка. Кровь в пробирке тщательно перемешать, закрыть и оставить стоять на 4 мин, периодически перемешивая содержимое.
Приготовить камеру Горяева (так же, как и для подсчета эритроцитов).
Кровь в пробирке снова перемешать стеклянной палочкой, взять каплю крови и нанести на край покровного стекла камеры. Лейкоциты подсчитывать в 100 больших квадратах через 1 мин после заполнения камеры, когда осядут клетки крови, пользуясь малым увеличением микроскопа (объектив х8, окуляр х10 или х15) при затемненном поле.
Подсчитанное в 100 больших квадратах число клеток умножают на 50 (разведение крови 1:20), получают окончательный результат в тысячах в 1 мкл.
ВЫВОД (сделайте вывод о количестве лейкоцитов в крови)
Практическая работа №3.Подсчет лейкоцитов камерным методом.
Ход работы и интерпретация результатов. —
Разведение крови. Кровь из пальца насасывают в капилляр Сали в количестве 0,02 мл и вводят в пробирку, в которую налито 0,2 или 0,4 мл раствора уксусной кислоты с метиленовой синькой (разведение в 10 или в 20 раз).
Подсчет лейкоцитов. Уксусная кислота вызывает разрушение оболочки эритроцитов и лейкоцитов, а метиленовая синька окрашивает ядра лейкоцитов.
Заранее притирают покровное стекло к боковым площадкам счетной камеры Горяева до появления радужных колец. Заполняют камеру раствором с по мощью капилляра Сали. Лейкоциты считают в 25 больших квадратах при малом увеличении.
Количество лейкоцитов в 1 мм3 крови считают по формуле
Л = [4000А *20 (10)]/ 400
где N/400 — среднее число клеток в 1 малом квадрате; 1/4000 — объем камеры под малым квадратом; 20 (или 10) — степень разведения крови. Внимание! Счет количества клеток в квадратах камеры Горяева проводится по правилу Егорова: к данному квадрату относятся только те клетки, которые находятся внутри квадрата или на его верхней и левой границе.
Практическая работа №1.Подсчет количества эритроцитов в камере горяева.
Ход работы и интерпретация результатов. Разведение крови для счета эритроцитов производят в пробирках. В этом случае для забора крови используют капилляр Сали (объем 0,02 мл), а в небольшую пробирку наливают соответствующее количество раствора ( 3% раствор NaCl) — 2 или 4 мл..
Считают эритроциты под большим увеличением микроскопа в малых квадратах камеры Горяева по правилу Егорова. Необходимо просчитать 5 больших (т. е. 80 малых) квадратов сетки по диагонали. Формула подсчета эритроцитов в 1 мм3 крови:
Э =[4000 А *100(200)]/80,
где N/80 — среднее число эритроцитов в 1 малом квадрате, 1/4000 — объем камеры над малым квадратом; 100 (или.200) — степень разведения крови.
При выражении количества форменных элементов в системе СИ полученный результат необходимо умножить на 106. В этом случае результат будет выражен следующим образом: Э*1012 эритроцитов в литре крови, Л *109 лейкоцитов в литре крови.
Практическая работа №5.Составление заключения о состоянии системы крови.
Общий анализ крови включает анализ содержания форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов), общего количества гемоглобина, цветного показателя, скорости оседания эритроцитов (СОЭ), соотношения форменных элементов и плазмы крови (гематокритный показатель), и процентного соотношения различных форм лейкоцитов (лейкоцитарная формула).
Нормальные показатели. При оценке результатов анализа крови больного сравнивают полученные показатели с нормой.
Эритроциты, кл/л | у мужчин 4,0—5,0-1012 у женщин 4,0—4,5 • 1012 |
Лейкоциты, кл/л | У мужчин 4,0—6,0-109 у женщин 6,0—8,0-109 |
Тромбоциты, кл/л | 200—400-109 |
Гемоглобин, г/л | у мужчин 130—160 у женщин 120—140 |
СОЭ, мм/ч . | у мужчин 1 — 10 у женщин 2—15 |
Гематокрит, % | 40—45 |
Лейкоцитарная формула, % базофилы эозинофилы нейтрофилы юные палочкоядерные сегментоядерные лимфоциты моноциты | 0,1 1—5 0—1 1—5 45—70 20—40 2- 10 |
Эталон заключения по общему анализу крови
Эритроцитоз (эритропения, анемия), гипо-, нормо- или гиперхромия (при сочетании с эритропенией— гипо- или гиперхромная анемия), увеличение (уменьшение или норма) СОЭ, ретикулоцитоз (ретикулопения), лейкоцитоз (лейкопения) со сдвигом лейкоцитарной формулы влево или вправо (при отсутствии сдвига не указывается), относительный базофилез (базофилопения), эозинофилез (эозинопения), нейтрофилез (нейтропения), лимфоцитоз (лимфопения), абсолютный (относительный) моноцитоз (моноцитопения), тромбоцитоз (тромбоцитопения).
Нормальные показатели системы крови, как правило, в заключении отражаются фразой: «показатели крови и норме».
Что такое камера Горяева? Правила подсчета форменных элементов крови
Сегодня камера Горяева является одним из самых используемых приспособлений в лабораторной диагностике. С ее помощью можно подсчитать количество тех или иных кровяных клеток. Как известно, анализ крови крайне важен для процесса диагностики и лечения почти каждого заболевания.
Что такое Камера Горяева?
Столь известное и полезное приспособление было разработано и предложено русским врачом Н. К. Горяевым. Камера Горяева, по сути, представляет собой специфическое предметное стекло с нанесенной на него микроскопической сеткой.
Для чего используется эта камера? В первую очередь с ее помощью определяют количество кровяных клеток, в частности лейкоцитов и эритроцитов. Кстати, с ее же помощью можно определить увеличение используемого микроскопа. Формула для этого выглядит следующим образом:
В данном случае:
- Kg — это увеличение микроскопа;
- m2 — положение правой границы клетки камеры Горяева;
- m1 — положение левой границы;
- а — размер одной клетки, который является стандартным и составляет 0,05 мм;
- N — это количество клеток между измеряемыми границами камеры.
Строение камеры
Камера Горяева представляет собой не что инное, как предметное стекло (но намного толще обычного), разделенное поперечными бороздами на три части. Средняя часть стекла содержит специальную сетку для подсчета. Крайние же части камеры служат для притирания покровного стекла — таким образом, по центру создается закрытая камера с капиллярными пространствами по бокам, через которые она и заполняется жидкостью.
Что же касается сетки, то камера Горяева разделена на 225 больших квадратов равных размеров — расположены они в пятнадцать рядов. 25 больших квадратов дополнительно разделены на меньшие, по 16 в каждом. Длина каждой стороны этого маленького квадратика составляет 0,05 мм.
Подготовка к подсчету форменных элементов
Безусловно, в данном случае огромное значение имеет техника проведения лабораторного исследования. Конечно же, все поверхности камеры Горяева должны быть чистыми и сухими. После этого покровное стекло притирают так, чтобы можно было увидеть характерные радужные кольца. Крайне важно, чтобы в камере не было пузырьков воздуха, так как это может исказить результаты анализа.
Естественно, для того чтобы подсчитать количество форменных элементов, для каждой разновидности кровяных клеток используются разные реактивы. Например, для подсчета эритроцитов используется 0,9% раствор натрия хлорида. В пробирке нужно смешать 8 мл раствора соли и 0,02 мл крови. Так, лаборант разбавляет кровь в 400 раз. Иногда разведение может быть большим.
Для того чтобы подсчитать количество лейкоцитов, нужно смешать 0,4 мл уксусной кислоты (берут 3% или 5% раствор) и 0,02 мл крови.
После того как компоненты перемешаются в пробирке, с помощью специальной пипетки набирают небольшое количество смеси и аккуратно заполняют камеру для счета (как правило, одной или двух капель будет вполне достаточно).
Как правильно рассчитать количество кровяных клеток?
Подсчет эритроцитов в камере Горяева осуществляется в пяти больших квадратах, что равно восьмидесяти малым. Для того чтобы избежать ошибки из-за неравномерного распределения образцов крови, выбирают квадраты, расположенные по диагонали. Отдельное внимание обращают на клетки, расположенные по краям, — здесь считают эритроциты на левой и верхней стенках, но не берут во внимание те, которые расположены на нижней и правой линиях.
Для того чтобы определить количество эритроцитов в миллилитре крови, число клеток в пяти больших квадратах умножают на 20 000 (при разведении в 400 раз).
Лейкоциты в камере Горяева считают по-другому. Здесь нужно вычислить количество элементов по меньшей мере в сотне больших квадратов. Полученное количество делят на 1600, после чего умножают на 4000, а затем на 20 (степень разведения).