Как получить сыворотку крови – Способ получения сыворотки крови взрослого крупного рогатого скота для культивирования клеток животных и человека

Содержание

Взятие, условия хранения и доставки венозной крови для проведения ИФА и ПЦР

Подготовка обследуемых

Взятие венозной крови производится натощак, в утренние часы. При взятии венозной крови необходимо учитывать ряд факторов которые могут повлиять на результат гематологических исследований: физическое перенапряжение (бег, быстрая ходьба, подъем по лестнице), эмоциональное возбуждение, прием пищи накануне исследования, купение, прием алкоголя и т.д. Для исключения этих факторов, следует соблюдать следующие условия подготовки пациентов:
•   взятие венозной крови осуществляется после 15-минутного отдыха обследуемого;
•   пациент во время взятия сидит, у тяжелых больных взятие крови может осуществляться лежа.
•   курение, прием алкоголя и пищи непосредственно перед исследованием исключаются;

Основной способ взятия венозной крови для лабораторного исследования – пунктирование вены. Венозную кровь, как правило, забирают из локтевой вены. В случае необходимости ее можно получить из любой вены (запястья, тыла ладони, над большим пальцем и т.д.). У новорожденных и грудных детей кровь обычно берется из лобной, височной или яремной вены.

При взятии крови из вены необходимо избегать: мест шрамов, гематом; вен, используемых для переливания растворов; ножных вен (у больных диабетом, при нарушениях периферического кровотока, ангиопатиях).

Оборудование

Для венепункции можно использовать три варианта пункционных систем:
•   одноразовые пластиковые системы (вакутейнеры), состоящие из контейнера с навинчивающейся на него одноразовой иглой и пробирки с плотно прилегающей пробкой и вакуумом внутри;
•   одноразовые шприцы с подходящим диаметром иглы;
•   иглы с внутренним диаметром 0,55-0,65 мм.

Условия транспортировки венозной крови

Правильно собранная венозная кровь должна быть своевременно доставлена в лабораторию. При комнатной температуре время доставки не должно превышать 60 мин после взятия крови. Если доставка крови в лабораторию осуществляется в течении дня, то она хранится при температуре +40С-+60С (в холодильнике) и далее в специальных транспортных контейнерах в ледяной бане доставляется в лабораторию.

Во время транспортировки пробирки и контейнеры с кровью должны быть соответствующим образом защищены от вредного воздействия окружающей среды и погодных условий. При транспортировке венозной крови должны строго соблюдаться правила техники безопасности, асептики и антисептики.
Пробирки должны быть промаркированы, упакованы и плотно закрыты. Упаковка должна быть удобной для транспортировки. Сроки хранения зависят от исследуемого показателя, температуры хранения и антикоагулянта, с помощью которого осуществляется взятие крови.

Методика получения сыворотки крови (без использования разделительных или вспомогательных средств для центрифугирования)

Оборудование
1. Центрифужные стеклянные пробирки общим объемом 10-12 мл.

2. Стеклянные палочки или Пастеровские пипетки с запаянными на конце капиллярами (для отделения сгустка).
3. Центрифуга лабораторная (до 3000 об/мин).

Приготовление сыворотки

Венозная кровь, полученная без антикоагулянтов в центрифужную стеклянную пробирку, отстаивается в ней при комнатной температуре (15-200С) в течение 30 минут до полного образования сгустка. По окончании образования сгустка пробирки открывают и осторожно проводят тонкой стеклянной палочкой или запаянным капилляром Пастеровской пипетки по внутренним стенкам пробирки по окружности в верхнем слое крови для отделения столбика сгустка от стенок пробирки. Сыворотку сливают в другую центрифужную пробирку, придерживая сгусток стеклянной палочкой, и центрифугируют, либо центрифугируют в тех же, первичных, пробирках.

Центрифугирование

После ретракции сгустка пробы центрифугируют при относительной центробежной силе RCF от 1000 до 1200 xg (максимально до 1500 xg) в течение 10 минут.

В случае использования микропробирок и центрифуги для них центрифугирование проводят при 6000-15000 xg в течение 1,5 минут. После центрифугирования сыворотку сливают во вторичные (транспортные) пробирки. Сыворотка не должна быть гемолизированной.
Плазма получается из крови путем отделения клеток крови. Она представляет собой бесклеточную надосадочную жидкость, которая получается при центрифугировании крови, свертываемость которой ингибирована добавлением антикоагулянтов тотчас после взятия. В плазме содержатся факторы свертывания крови. В связи с тем, что плазма и сыворотка содержат около 93% воды, в отличие от цельной крови, которая содержит около 81% воды, концентрация компонентов в плазме на 12% выше, чем в цельной крови. Это может иметь принципиальное диагностическое значение при исследовании активности, например ЛДГ у которого наиболее высокая концентрация наблюдается в сыворотке крови, чем в плазме.
Широко применяются коммерческие системы для получения плазмы. Они представляют собой пробирки или устройства типа шприцев (“вакутейнер”) с вакуумом внутри, содержащие различные антикоагулянты и/или ингибиторы гликолиза. Как и в случае устройств для сыворотки, эти пробирки для плазмы имеют разные варианты, содержащие разделительные гели и гранулят из полистирола, ускоряющие получение плазмы, облегчающие транспортировку и хранение. В них уже имеются антикоагулянты и метки до которых следует набирать кровь.

Методика получения плазмы

Приготовление плазмы

Венозную кровь, полученную с антикоагулянтом немедленно после взятия перемешивают переворачиванием пробирок с кровью, закрытых крышками, не менее 5 раз. Перемешивание должно осуществляться без встряхивания и пенообразования. Время между началом наложения жгута и смешиванием крови с антикоагулянтом не должно превышать 2 минут.
После уравновешивания пробирок с кровью, их центрифугируют при RCF 1000-1200 xg, но не более 1500 xg, в течение 10-15 минут. Плазму немедленно сливают в транспортную центрифужную или химическую пробирку. Пробирку закрывают крышкой.

Условия транспортировки плазмы крови
Правильно полученная и собранная плазма крови должна быть своевременно доставлена в лабораторию. При комнатной температуре время доставки не должно превышать 24 часа. Если доставка плазмы в лабораторию осуществляется в течение дня, то она хранится при температуре +4…+80С (в холодильнике) и далее в специальных транспортных контейнерах в ледяной бане доставляется в лабораторию. Для более длительного хранения плазма может быть заморожена при температуре –200С.
Правила транспортировки плазмы такие же как и венозной крови.

Биология для студентов — 06. Как получит сыворотку и плазму крови

Оборудование

Центрифужные стеклянные пробирки общим объемом 10-12 мл.
Стеклянные палочки или Пастеровские пипетки с запаянными на конце капиллярами (для отделения сгустка).

Центрифуга лабораторная (до 3000 об/мин).

Приготовление сыворотки

Центрифугирование

Сыворотка не должна быть гемолизированной.

Плазма получается из крови путем отделения клеток крови. Она представляет собой бесклеточную надосадочную жидкость, которая получается при центрифугировании крови, свертываемость которой ингибирована добавлением антикоагулянтов тотчас после взятия. В плазме содержатся факторы свертывания крови. В связи с тем, что плазма и сыворотка содержат около 93% воды, в отличие от цельной крови, которая содержит около 81% воды, концентрация компонентов в плазме на 12% выше, чем в цельной крови. Это может иметь принципиальное диагностическое значение при исследовании активности, например, ЛДГ у которого наиболее высокая концентрация наблюдается в сыворотке крови, чем в плазме.

Широко применяются коммерческие системы для получения плазмы. Они представляют собой пробирки или устройства типа шприцев (“вакутейнер”) с вакуумом внутри, содержащие различные антикоагулянты и/или ингибиторы гликолиза. Как и в случае устройств для сыворотки, эти пробирки для плазмы имеют разные варианты, содержащие разделительные гели и гранулят из полистирола, ускоряющие получение плазмы, облегчающие транспортировку и хранение. В них уже имеются антикоагулянты и метки до которых следует набирать кровь.

Методика получения плазмы

Приготовление плазмы

После уравновешивания пробирок с кровью, их центрифугируют при RCF 1000-1200 xg, но не более 1500 xg, в течение 10-15 минут. Плазму немедленно сливают в транспортную центрифужную или химическую пробирку. Пробирку закрывают крышкой.

Условия транспортировки плазмы крови

Правильно полученная и собранная плазма крови должна быть своевременно доставлена в лабораторию. При комнатной температуре время доставки не должно превышать 24 часа. Если доставка плазмы в лабораторию осуществляется в течение дня, то она хранится при температуре +4…+80С (в холодильнике) и далее в специальных транспортных контейнерах в ледяной бане доставляется в лабораторию. Для более длительного хранения плазма может быть заморожена при температуре –200 С

Работа 2. Получение плазмы, сыворотки, фибрина и дифибринированной крови

КРОВЬ — жидкая соединительная ткань, которая состоит из жидкой части — плазмы и находящихся в ней во взвешенном состоянии, форменных элементов — эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов.

Получение плазмы

Для получения плазмы кровь необходимо предохранить от свёртывания добавлением антикоагуляторов – веществ, препятствующих свертыванию крови (гепарин, лимонно — кислый натрий).

СТАБИЛИЗИРОВАННАЯ КРОВЬ — кровь, предохраненная от свертывания. В пробирку или стеклянный цилиндр с антикоагулятором выпустить по 10 мл крови из яремной вены животного. Закрыв сосуд пальцем или пробкой, несколько раз перевернуть его для перемешивания крови.

1 способ. Цилиндр поставить в термостат кровь лошади — на 1 час, крупного рогатого скота — на 24…48 часов.

2 способ. Пробирку с взятой кровью поставить в центрифугу. Центрифугировать при 3000 об/мин в течение 20…30 минут.

Убедиться, что при стоянии или центрифугировании кровь расслаивается на плазму и форменные элементы (рис. 3).

Рис. 3. Состав стабилизированной крови.

1 – плазма; 2 – слой лейкоцитов; 3 — слой эритроцитов.

Получение сыворотки

Если выпущенную в сосуд кровь не стабилизировать антикоагулятором, происходит ее свертывание и образуется сгусток, содержащий форменные элементы и выпавший в осадок белок фибриноген.

Сгусток постепенно уплотняется, стягивается и от него отделяется прозрачная желтоватого цвета жидкость – сыворотка (происходит процесс ретракции) (рис. 4).

Рис. 4. Ретракция кровяного сгустка.

1 — сыворотка крови; 2- сгусток крови.

СЫВОРОТКА — представляет собой плазму, лишенную белка фибриногена и других веществ, участвующих в свертывании крови.

1 способ. В пробирку или цилиндр без антикоагулятора выпустить 10 мл крови животного и поставить ее в термостат при 38°С на несколько часов. Образование кровяного сгустка и частичная ретракция, т.е. его стягивание и самопроизвольное отделение сыворотки наступает у лошадей через 1…3часа, а полное отделение сгустка через 12…18 часов. У крупного рогатого скота ретракция протекает значительно медленнее. Из пробирки, с полной ретракцией сгустка, слить или отсосать сыворотку и сравнить ее с плазмой. Сыворотка имеет желтовато-соломенный цвет и более прозрачна, чем плазма.

2 способ получения сыворотки. При выделении из крови фибриногена механическим путем, получают кровь, которая содержит все составные части, кроме белка фибриногена — ДЕФИБРИНИРОВАННУЮ КРОВЬ, т. е. эта кровь, теряет способность к свертыванию. Состав дефибринированной крови (рис.5).

Рис. 5. Состав дефибринированной крови.

1 — сыворотка; 2- слой лейкоцитов; 3- слой эритроцитов.

Получение дефибринированной крови

Дефибринированную кровь разлить в центрифужные пробирки и центрифугировать при 3000 об/мин в течение 10…15 минут. Форменные элементы оседают на дно. Сверху окажется сыворотка. Иногда она приобретает красноватый оттенок, вследствие разрушений эритроцитов из дефибринированной крови.

Получение фибрина

Положить в стеклянную колбочку 10…12 стеклянных бусинок и выпустить в нее из сосуда животного 20…30 мл крови. Взбалтывать кровь вращательными движениями в течение 10…15 минут. Фибриноген, выпадающий в осадок в виде волокнистых нитей фибрина, оседает на шариках. Затем профильтровать содержимое колбы через 2 слоя марли. Фильтрат представляет собой дефибринированную кровь, а осевшие на шариках «метелки» — нити фибрина — отмыть от форменных элементов водой. Фибрин имеет вид белого волокнистого вещества.

Работа 3. Определение скорости свёртывания крови

при разных температурных условиях

СВЕРТЫВАНИЕ крови — сложный биологический процесс, протекающий при участии солей кальция, витамина К, ферментов тромбопластина, промбина и других компонентов плазмы (рис. 6).

Нанести по одной капле крови, вытекающей из надрезанного уха животного, на три предметных стекла. Одно стекло поместить в термостат при +40^оС, другое стекло положить на стол (при комнатной температуре), третье — на снег.

Через каждую минуту наклонять стекла с кровью и повторять до тех пор, пока кровь не свернется. Определить скорость свертывания крови у различных животных.

Данные записать в тетрадь, проанализировать.

ВОПРОСЫ:

1. Где, у животных, берут большое и малое количество крови для анализа.

2. Что такое плазма и как ее получить?

3. Дайте понятие сыворотке, какие есть способы ее получения.

4. Что такое дефибринированная кровь и каков ее состав?

5. В чем заключается механизм свертывания крови, и, какие факторы влияют на него?

Рис. 6. Классическая схема свертывания крови Шмидта — Моравица.

ЗАНЯТИЕ 2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЪЕМНОГО СООТНОШЕНИЯ ФОРМЕННЫХ ЭЛЕМЕНТОВ И ПЛАЗМЫ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВЯЗКОСТИ КРОВИ. ГЕМОЛИЗ. ОСМОТИЧЕСКАЯ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ (УСТОЙЧИВОСТЬ ЭРИТРОЦИТОВ)

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: Определить соотношение форменных элементов и плазмы в крови животных, вязкость крови, проследить за явлением гемолиза эритроцитов под влиянием повреждающих факторов с разным механизмом действия, определить осмотическую устойчивость эритроцитов разных видов животных.

Работа 1. Определение объёмного соотношения форменных

элементов и плазмы (показатель гематокрита)

Форменные элементы – 35…45%., плазма составляет 60…65% общего объема крови. Это соотношение изменяется в зависимости от вида, возраста, породы животных, функционального состояния, а также при некоторых заболеваниях.

ПОКАЗАТЕЛЬ ГЕМАТОКРИТА – показывает общий объем форменных элементов в 100 объемах крови. Показатель гематокрита используется при вычислении ряда других важных характеристик крови (среднего объема эритроцитов, среднеклеточной концентрации гемоглобина и пр.).

Набрать через узкий конец капиллярной трубочки гематокрита стабилизированную кровь животного. Трубки затянуть резинками и поставить в центрифугу. Центрифугировать 8…10 мин при 3000 об/мин. Извлечь капилляры. Форменные элементы располагаются в одной стороне капилляра, а плазма в другой. По показателям капилляров взять среднее из двух, определить относительный объем форменных элементов и плазмы, выразив их в процентах.

Техника получения крови, сыворотки и плазмы. — КиберПедия

Получение крови.Небольшие количества крови у животных в основном берут из ушной раковины, для этого место взятия предварительно обрабатывают, выстригают или выбривают. Протирают тампоном смоченным спиртом 70%, после этого либо делают надрез сосуда, либо прокалывают вену иглой. Первую выступившую каплю снимают тампоном так как после обработки спиртом эритроциты в ней разрушаются. Затем по каплям кровь собирают в часовое стекло и сразу же набирают в пипетки для исследования. У человека берут кровь из среднего или безымянного пальца левой руки, предварительно протерев 70% спиртом. Большое количество крови у лошади, у КРС, у МРС берут кровь из ярёмной вены на границе верхней и средней трети шеи. Для этого на шее животного ниже места прокола накладывают жгут, чтобы вена наполнилась кровью, протирают её спиртом или настойкой йода, затем в вену под углом 45 градусов вводят стерильную острую иглу против тока крови по направлению к голове. Кровь собирают в пробирки или колбы. У свиней большие количества крови получают из хвоста. Для этого скальпелем отсекают около 1 см хвоста, собирают кровь в пробирки, затем кончик хвоста сдавливают резинкой или бинтом на 1-2 суток, рану тщательно дезинфицируют. У собаки большие количества крови получают из вены сафена (наружная поверхность бедра). У кроликов из ушной вены, у морских свинок из сердца, у кур из гребня или подкрановой вены.

Получение сыворотки крови.Для получения сыворотки крови она должна свернуться, для этого кровь собирают в чистые сухие пробирки, струю крови направляют по стенке пробирки, чтобы не образовалась пена, затем пробирки с кровью ставят в термостат на несколько часов для полного свёртывания, затем образовавшийся сгусток отделяют от стенок пробирки стеклянной палочкой: обводя вокруг сгустки, затем кровь отстаивают или центрифугируют, при этом сгусток уплотняется-ретракцияи из него выделяется сыворотка соломенно-жёлтого цвета.

Получение плазмы крови.Кровь нужно предохранить от свёртывания, то есть стабилизировать. Для стабилизации крови используют антикоагулянты. К ним относится лимоннокислый Na, щавелевокислый Na, гепарин. В пробирку помещают антикоагулянт, затем берут кровь. После взятия пробирку несколько раз аккуратно переворачивают для перемешивания. При отстаивании или центрифугировании, кровь разделяют на 2 слоя: Сверху желтоватая мутная жидкость-плазма, внизу тёмно-вишнёвого цвета слой эритроцитов, а на нём небольшой белый налёт лейкоцитов.

Сыворотка крови отличается от плазмы тем, что в ней отсутствует белок фибриноген, так как из него образуется не растворённый фибрин, который стал основой для тромба.

Для того чтобы из плазмы получить сыворотку, нужно из неё осадить белок фибриноген. Затем от центрифугировать и отстаивать в отдельную пробирку сыворотку. ТХУ-трихлоруксусная кислота.

Определение объёма соотношения между плазмой и форменными элементами крови-это показатель гематокрита.

В крови содержится 55-60 % плазмы 40-45 форменных элементов. Для определения показателя гематокрита используют стабилизированную кровь (с добавлением антикоагулянта). Немного стабилизированной крови помещают на часовое стекло. Берут 2 капиллярные пробирки. Оба капилляра заполняют кровью. Затем оба конца капилляра затыкают пластилином, затем помещают в специальную центрифугу и центрифугируется при режиме 3-4 тысяч оборотов в минуту 8-10 минут. Извлекают капилляры. Кровь в них разделяется на 2 слоя. От центра плазма, от периферии форменные элементы. Затем капилляры помещают в специальную рамку. Определяют количества плазмы в обоих капиллярах и берут среднюю величину.

Форменные элементы крови.

1. Эритроциты. Красные кровяные тельца у высших животных округлые, безъядерные, диаметром 5-6 макромеров, сверху покрыты белково-серозной оболочкой, внутри строма-она представлена гемоглобином. Гемоглобин-пигмент, который по структуре является сложным белком, состоящим из простого белка глобина и красящего вещества гема, который является простетической частью. Гемоглобин состоит из 4 перойдных колец в центре которых двухвалентное железо. На разрезе эритроцит имеет двояковогнутый диск для увеличения площади поверхности.

2. Лейкоциты-белые кровяные тельца, крупнее эритроцитов, содержит ядро, способны к самостоятельному передвижению как в кровеносном русле, так и за его пределами. По строению и воспроизведению окраски их делят на 2 группы: зернистые (гранулоциты) и не зернистые (агранулоциты). К зернистым относят базофилы, эозинофилы, нейтрофилы. Нейтрофилы по степени зрелости делят на юные, палочкоядерные и сегментоядерные.

Агранулоциты-лимфоциты (малые, средние, большие). Моноциты. У всех животных и человека преобладают сегментоядерные нейтрофилы и лимфоциты с разными вариациями.

Гемоглобин-сложный белок, который находится внутри эритроцитов и составляет его строму. Гемоглобин за счёт двухвалентного железа в составе гема может присоединять кислород-оксигемоглобин, это не прочное соединение, оно образуется в сосудах лёгких, отдаёт кислород в тканевую жидкость и восстанавливается. Соединение гемоглобина с углекислым газом-карбгемоглобин, оно образуется в тканях, транспортируется в лёгких. Карбгемоглобин легко отдаёт углекислый газ и присоединяет кислород.

Cito! – Быстро. Тройчатка экспресс анализа крови-это уровень гемоглобина, количество лейкоцитов в крови и скорость оседание эритроцитов. Для того чтобы определить уровень гемоглобина нужно разрушить эритроциты и выделить гемоглобин в раствор.

Физиологические соединения гемоглобина — это оксигемоглобин, карбгемоглобин, восстановленный. Патологических видов гемоглобина более 50-ти. Из них карбоксигемоглобин соединение гемоглобина с угарным газом, очень прочное соединение, метгемоглобин соединение, в котором железо меняет свою валентность и становится трёхвалентным и это также приводит к образованию очень прочных соединений.

СОЭ (скорость оседания эритроцитов).

Если взять кровь, стабилизированную лимоннокислым натрием и набрать её в капилляр, поставить капилляр вертикально, эритроциты начнут оседать, сверху будет оставаться плазма. Скорость оседания эритроцитов может быть различной. Это зависит от нескольких факторов, от вида животного. Самая высокая скорость оседания эритроцитов у лошади и составляет 64 мм\ч. У КРС и МРС, кроликов 0.5-1 мм\ч, собака 2.5 мм\ч, у свиньи 34 мм\ч, у человека 4-8 мм\ч. Кроме того у каждого индивидуума в течении жизни СОЭ может меняться. В физиологических условиях, то есть в норме СОЭ меняется не значительно, однако у женской особи во 2-ой половине беременности СОЭ значительно увеличивается. Чаще всего СОЭ ускоряется или замедляется при патологиях.

Например, СОЭ замедляется при сгущении крови, ускоряется при наличии в организме воспалительных процессов при которых образуются много защитных белков глобулинов, они адсорбируются на эритроцитах, понижая их поверхностный заряд и в столбике крови эритроциты будут оседать быстрее. СОЭ важный диагностический показатель и входит в тройчатку экспресс анализа крови.

Гемолиз эритроцитов.Это разрушение оболочки эритроцитов и выход гемоглобина в раствор. Различают несколько видов гемолиза:

1. Осмотический.

2. Химический.

3. Температурный.

4. Механический.

Осмотический гемолиз основан на том, что в гипотонических растворах эритроциты разрушаются в зависимости от их концентрации, причём эритроциты разных индивидуумов по-разному разрушаются в гипотонических растворах-это значит, что эритроциты обладают осмотической резистентностью-это способность эритроцитов противостоять пониженному осмотическому давлению.

Химический основан на разрушении эритроцитов под действием химических веществ (аммиак, дистиллированная вода, кислоты).

Температурный основан на разрушении эритроцитов после размораживания, предварительно замороженных эритроцитов. Механический при перемешивании.

Свёртывание крови.

Свёртывание крови — это защитная реакция организма, которая предохраняет его от кровопотерь. Свёртывание крови запускается при нарушении целостности сосудистой стенки, при механических или других повреждениях, или при появлении на сосудистой стенке шероховатостей. В крови есть вещества 3 категорий, которые участвуют в свёртывании крови:

1. Вещества, способствующие свёртыванию. Они объединяются в свёртывающуюся систему крови.

2. Вещества, препятствующие свёртыванию крови. Они объединились в противсвёртывающую систему.

3. Система веществ, обуславливающих разжижение уже свернувшейся крови-это фибринолитическая система.

Свёртывание крови складывается из взаимодействия их компонентов:

1. Гемостаз-остановка кровотока.

2. Рефлекторное сужение повреждённых кровеносных сосудов вплоть до спазма.

3. Гуморальное сужение под действием гормонов и медиаторов адреналин, серотонин, норадреналин.

4. Агрегация (прилипание) тромбоцитов друг к другу и их повреждение.

Свёртывающая система крови.

Выделяют 13 факторов свёртывания:

I. Фибриноген-белок плазмы крови, который попадая в необычную среду превращается в нерастворимую фазу-фибрин.

II. Протромбин-неактивная форма фермента, который при определённых условиях превращается в активный тромбин.

III. Тромбопластин-фермент, выделяющийся из тромбоцитов и активирующий протромбин.

IV. Ионизированный кальций-участвует во всех фазах свёртывания, активирует все ферменты.

V. Акцелерин (Ас)- фермент, ускоряющий активацию тромбопластина.

VI.

VII. Проконвертин- сходен с 5 фактором, участвует в образовании тромбопластина.

VIII. Антигемофильный глобулин А. Участвуют в образовании

IX. Антигемофильный глобулин В. Тромбопластина.

X. Тромботропин плазмы – участвует в образовании тромба.

XI. Протромбопластин плазмы.

XII. Фактор Хагемана. Он активирует протромбопластин.

XIII. Фибринстабилизирующий фактор (ФСФ).

Свёртывание крови проходит в 3 фазы и представляет собой цепь ферментативных реакций. Результат каждой ферментативной реакции становится пусковым механизмом для следующей ферментативной реакции.

Цепи ферментативных реакций предшествует следующей реакции. Это рефлекторный спазм травмированного сосуда и образование «тромбоцитарного гвоздя». Его образование начинается с изменения заряда сосудистой стенки в месте повреждения. Возникает смена заряда. Это приводит к тому, что форменные элементы начинают скучиваться около повреждённого участка. Особая роль принадлежит тромбоцитам. Они скучиваются, слипаются между собой (агрегация), что приводит к первичному гемостазу. Агрегация тромбоцитов приводит к их нарушению. Из них выходят БАВ, которые запускают ферментативное свёртывание (коагуляционный гемостаз). В нём различают три фазы:

1. При разрушении тромбоцитов из них освобождается тромбопластин, который называется кровяной тромбопластин. Из повреждённой сосудистой стенки освобождается тканевой тромбопластин. В норме они в организме отсутствуют и выделяются только при повреждении стенки. При их участии образуется фермент-кровяная и тканевая протромбиназа. Это происходит под влиянием 5 8 9 10 и 11 факторов с участием ионов кальция.

2. Заключается в активации протромбина и превращению его в активный тромбин под влиянием 5 7 факторов и в присутствии ионов кальция.

3. Заключается в образовании фибрина. Идёт в 3 этапа:

a. Протеолитический этап. Тромбин действует на фибриноген, отщепляет от него отдельные мономеры, образуется профибрин.

b. Полимеризация. При участии кальция молекулы профибрина склеиваются. Образуется фибрин-полимер.

c. Под влиянием 8 фактора молекулы фибрин-полимера цементируются. Образуется окончательный фибрин. Он выпадает в виде нитей, в них запутываются форменные элементы, образуется сгусток.

Это не окончательный этап, так как через некоторое время начинается укорочение нитей фибрина, которое вызывает уплотнение сгустка и отжатие от него жидкости-сыворотки. Уплотнение сгустка ретракция-сложный биологический процесс, который приводит к плотному закрытию сосуда пробкой, края раны при этом сближаются. Фибриновая пробка со временем растворяется. Этот процесс-фибринолиз осуществляется под действием фибринолитической системы.

Работа 2. Получение плазмы, сыворотки, фибрина и дифибринированной крови.

Получение плазмы.

Для получения плазмы кровь необходимо предохранить от свёртывания добавлением антикоагуляторов – веществ, препятствующих свертыванию крови (гепарин, лимонно-кислый натрий).

1 способ. Цилиндр поставить в термостат кровь лошади — на 1 час, крупного рогатого скота — на 24…48 часов.

Убедиться, что при стоянии или центрифугировании кровь расслаивается на плазму и форменные элементы (рис. 50).

1 – плазма; 2 – слой лейкоцитов; 3 — слой эритроцитов.

Рис. 50. Состав стабилизированной крови.

Получение сыворотки.

Сгусток постепенно уплотняется, стягивается и от него отделяется прозрачная желтоватого цвета жидкость – сыворотка (происходит процесс ретракции) (рис. 51).

1 — сыворотка крови; 2- сгусток крови.

Рис. 51. Ретракция кровяного сгустка.

1способ. В пробирку или цилиндр без антикоагулятора выпустить 10 мл крови животного и поставить ее в термостат при 38°С на несколько часов. Образование кровяного сгустка и частичная ретракция, т.е. его стягивание и самопроизвольное отделение сыворотки наступает у лошадей через 1…3часа, а полное отделение сгустка через 12…18 часов. У крупного рогатого скота ретракция протекает значительно медленнее. Из пробирки, с полной ретракцией сгустка, слить или отсосать сыворотку и сравнить ее с плазмой. Сыворотка имеет желтовато-соломенный цвет и более прозрачна, чем плазма.

2 способ получения сыворотки. При выделении из крови фибриногена механическим путем, получают кровь, которая содержит все составные части, кроме белка фибриногена — ДЕФИБРИНИРОВАННУЮ КРОВЬ, т. е. эта кровь теряет способность к свертыванию. Состав дефибринированной крови (рис.52).

1 — сыворотка; 2- слой лейкоцитов; 3- слой эритроцитов.

Рис. 52. Состав дефибринированной крови.

Получение дефибринированной крови.

Получение фибрина.

Положить в стеклянную колбочку 10…12 стеклянных бусинок и выпустить в нее из сосуда животного 20…30 мл крови. Взбалтывать кровь вращательными движениями в течение 10…15 минут. Фибриноген, выпадающий в осадок в виде волокнистых нитей фибрина, оседает на шариках. Затем профильтровать содержимое колбы через 2 слоя марли. Фильтрат представляет собой дефибринированную кровь,а осевшие на шариках «метелки» — нити фибрина — отмыть от форменных элементов водой. Фибрин имеет вид белого волокнистого вещества.

Работа 3. Определение скорости свёртывания крови

при разных температурных условиях.

Данные записать в тетрадь, проанализировать.

ВОПРОСЫ:

1. Где, у животных, берут большое и малое количество крови для анализа.

2. Что такое плазма и как ее получить.

3. Дайте понятие сыворотке, какие есть способы ее получения.

4. Что такое дефибринированная кровь и каков ее состав.

5. В чем заключается механизм свертывания крови, и, какие факторы влияют на него.

Рис. 53. Классическая схема свертывания крови Шмидта — Моравица.

ЗАНЯТИЕ 21. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЪЕМНОГО СООТНОШЕНИЯ ФОРМЕННЫХ ЭЛЕМЕНТОВ И ПЛАЗМЫ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВЯЗКОСТИ КРОВИ. ГЕМОЛИЗ. ОСМОТИЧЕСКАЯ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ

(УСТОЙЧИВОСТЬ ЭРИТРОЦИТОВ).

Работа 1. Определение объёмного соотношения форменных

элементов и плазмы (показатель гематокрита).

ПОКАЗАТЕЛЬ ГЕМАТОКРИТА – показывает общий обьем форменных элементов в 100 объемах крови. Показатель гематокрита используется при вычислении ряда других важных характеристик крови (среднего объема эритроцитов, среднеклеточной концентрации гемоглобина и пр.).

Получение сыворотки крови для лабораторных исследований

Факторы, влияющие на состав крови

При проведении лабораторных исследований крови необходимо строго соблюдать условия отбора биологических образцов, а также предпринимать меры для противодействия деградации полученных материалов и активного вещества, содержащегося в них.

Каждый медицинский работник должен знать и предупреждать пациента о том, что в крови:

сразу после приема пищи может существенно повышаться концентрация гормонов и некоторых других биологических веществ;
для ряда компонентов присуще наличие суточных (циркадных) колебаний уровня;
прием большинства препаратов тем или иным способом влияет на концентрацию определяемого вещества;
положение пациента (горизонтальное или вертикальное) или воздействие физической нагрузки непосредственно перед отбором образцов для анализа способно отразиться на уровне исследуемых компонентов, увеличив или уменьшив их концентрацию более чем на 10%.

Лабораторная центрифуга С2004

Предпочтительно отбирать образцы крови, предназначенные для дальнейших исследований, сразу в центрифужные пробирки. Подготовка тары (мойка, сушка, добавка ингибиторов ферментов или коагулянтов) должна производиться одним специалистом. Собранная кровь, в которую не вносились добавки, оставляется для отстоя, а модифицированная помещается в многофункциональную настольную центрифугу, где отделяется сыворотка или плазма. Полученный исследовательский материал разливается в более мелкую пластиковую или стеклянную тару. Количество пробирок с образцами должно равняться или превышать число предстоящих разновидностей анализов.

https://www.youtube.com/watch?v=ytpolicyandsafetyru

При отборе биологического материала необходимо учитывать, что секреция многих веществ в организме происходит с определенной цикличностью, которая может составлять от нескольких минут до суток. Определять результаты анализов без учета временного фактора и фактического физиологического состояния организма некорректно.

Изображение процесса гемолиза

Непосредственно процесс забора крови должен проходить так, чтобы был исключен гемолиз, который происходит при продолжительном венозном застое, создании избыточного разрежения в шприце, попадании в канал иглы детергентов или воды, воздействия низких и высоких температур.

Литература

Аристовский
В.М. др. Учебник медицинской микробиологии.
— М: Медгиз, 1949.
Справочник
по микробиологическим и вирусологическим
методам исследования. Под ред. Биргера
М.О, — М: «Медицина», 1982.
Лабинская
А.С. Микробиология с техникой
микробиологических исследований. —М.:
«Медицина», 1978.
Методы
общей бактериологии в 3-х т. — М:, «Мир»,
1983.
Розанов
Н.И. Микробиологическая диагностика
заболеваний сельскохозяйственных
животных. — М:, ГИСХИ. 1952.
Сидоров
М.А., Скородумов Д.И., Федоров В.Б.
Определитель зоопатогенных микроорганизмов.
— М.: «Колос», 1995.
Тимаков
В.Д., Гольдфарб Д.М. Основы экспериментальной
медицинской бактериологии. — М.: Медгиз,
1958.

Выделение плазмы или сыворотки

Выделенная плазма (сверху)

Цельная кровь, как венозная, так и капиллярная, используется при проведении биохимических исследований (определение концентрации электролитов в эритроцитах, уровня глюкозы и показателей КЩР), а также гематологии (стандартный клинический анализ, проверка на малярию, проверка гематокрита и LE-клеток). Радиоиммунные и иммуноферментные методы предусматривают выделение плазмы или сыворотки.

Среди специалистов не сформировано единого мнения по поводу того, что лучше подходит для анализа – сыворотка или плазма. Например, для биохимического исследования чаще берут сыворотку венозной крови. Аргументами «за» в таких случаях выступает тот факт, что стероиды в этом случае экстрагируются легче и полнее. Также отмечается, что плазма чаще образует эмульсию с органическими растворителями, а при оттаивании после заморозки в ней могут появляться фибриновые хлопья.

Также при выборе конкретного материала следует принимать во внимание следующие объективные факторы:

При выделении сыворотки существует опасность, что в процессе отстаивания крови из эритроцитов активно выделяются протеолитические ферменты, способные разрушить определяемое вещество, а также повредить его меченый аналог при инкубировании. С учетом данного момента рекомендуется готовить плазму для определения концентрации белковых соединений.
Получение плазмы часто предусматривает применение цитрата или гепарина. Первый оказывает существенное влияние на кислотность среды, к чему весьма чувствительны отдельные вещества, а второй препятствует связыванию антигена с антителом. Чтобы избежать негативного влияния, в сухую пробирку, в которой будет производиться центрифугирование, стоит добавить 50 мг этилендиаминтетрауксусной кислоты на 5 мл крови. Сразу после забора кровь перемешивается с ЭДТА для получения смеси в пропорции 1:100. Кислота является блокатором протеолитических ферментов, слабым антикоагулянтом, а также входит в состав различных буферных смесей.

В большинстве случаев для проведения анализов считается допустимым использование материала, хранившегося при комнатной температуре не более 8 часов. При охлаждении образцов до температуры 4°С их допускается выдерживать в течение недели. Если биологический материал подлежит длительному хранению, то необходима его глубокая заморозка до температуры -20°С. Это позволит провести анализ на раковые маркеры, холестерин, мочевину, многие гормоны даже спустя несколько месяцев.

Вернуться к списку

для
иммунохимических исследований

Подготовка крови к проведению лабораторных исследований

Отобранный образец крови должен быть доставлен в лабораторию и обработан или подвергнут анализу в кратчайшие сроки. Продолжительное нахождение сыворотки над эритроцитами способно приводить к изменению концентрации компонентов и, соответственно, искажению результатов. Также необходимо учитывать, что период биологического полураспада ряда исследуемых веществ при нахождении образца под воздействием комнатной температуры крайне непродолжительный.

Медицинская центрифуга PrO-Hospital GP6

На первом этапе обработки с помощью сухой чистой стеклянной палочки производится аккуратное отделение сгустка крови от стенок пробирки и взвешивание емкости. Затем образец помещается в центрифугу для медицинских учреждений, работающую в подходящем скоростном диапазоне. В большинстве случаев обработку образцов крови при подготовке к исследованиям рекомендуется проводить при температуре 4°С, скорости вращения 1500 – 3000 об/мин, перегрузках от 500 до 1000g в течение 15-20 минут. Более высокая скорость вращения ротора может привести к гемолизу плазмы или сыворотки.

Выделенную сыворотку или плазму следует оперативно отделить от других элементов крови, после чего плотно закрыть пробирки крышками. Испорченные образцы подлежат утилизации.

Рост микробов на плотной питательной среде

Для
изучения свойств колоний микробы
культивируют на плотных питательных
средах в чашках Петри. При посеве
материала стараются получить изолированный
рост колоний. Чашки с посевом просматривают
сначала невооруженным глазом или через
лупу, затем помещают их на столик
микроскопа вверх дном и просматривают
колонии в проходящем свете с объективом
малого увеличения и с суженной диафрагмой.

https://www.youtube.com/watch?v=ytcreatorsru

Колонии
характеризуют по величине, форме, контуру
края, рельефу, поверхности, цвету,
структуре и консистенции.

Величина
колонии
определяется ее диаметром. В зависимости
от диаметра различают колонии точечные
(диаметр меньше 1 мм), мелкие (диаметр
1—2 мм), средние (диаметр 2—4 мм) и крупные
(диаметр 4—6 мм и более).

Форма
колонии
бывает правильная — круглая, неправильная
— амебовидная, ризоидная — корневидная,
напоминающая переплетающиеся корни
деревьев.

Характер
контура края
определяют при рассмотрении колонии
под лупой или микроскопом с малым
увеличением. Различают ровные края в
виде четко выраженной линии и неровные.
Последние делят на:

фестончатый
край, состоящий из крупных, слегка
округлых или уплощенных зубцов
правильной формы;
волнистый край,
который несколько отличается от
фестончатого тем, что крупные зубцы
его выражены нечетко;
эрозированный,
или зазубренный, край, состоящий из
острых зубцов различной величины и
формы;
бахромчатый
край, имеющий нежные ворсинки. В некоторых
случаях четко выраженная линия,
отграничивающая колонию от поверхности
среды, отсутствует. Такой край колонии
называется расплывчатым.

Рельеф
колонии характеризуется приподнятостью
ее над поверхностью питательной среды
и контуром формы в вертикальном разрезе.
Определяется рельеф колонии невооруженным
глазом или с лупой при рассматривании
сверху и сбоку. Различают:

каплеобразные
и куполообразные колонии правильной
круглой формы с различно выраженной
степенью выпуклости, которые в
вертикальном разрезе представляют
собой сегмент шара и отличаются только
длиной радиуса. Колонии слабовыпуклые
имеют большую длину радиуса; куполообразные
— меньшую;
колонии
плоско-выпуклые с плоским верхом,
пологими или круто обрывающимися
краями; имеют в вертикальном разрезе
форму трапеции;
колонии
конусообразные, имеющие в вертикальном
разрезе форму треугольника:
колонии
с приподнятой в виде соска серединой
и валиком по периферии;
колонии с вдавленным
центром;
колонии плоские,
стелющиеся по поверхности среды.

Поверхность
колонии изучают с помощью лупы или под
микроскопом при малом увеличении.
Поверхность колоний бывает матовая
или блестящая с глянцем, сухая или
влажная, гладкая или шероховатая. Гладкие
колонии обозначают буквой S (smooth),
шероховатые — буквой R (rough), что означает
соответственно «гладкий» и «шероховатый».

Механизм формирования гладких и
шероховатых форм колоний обусловлен
различием процессов клеточного деления.
Микробные клетки в колониях S-форм
располагаются, соприкасаясь своими
боковыми поверхностями, клетки R-форм,
сохраняя при делении цитоплазматические
мостики, образуют цепочки, которые,
накладываясь друг на друга, обусловливают
шероховатую поверхность и неровный
край колонии.

Цвет
колонии
определяется пигментом, который
продуцирует культура микробов.
Преобладающее большинство патогенных
бактерий пигмента не образуют, вследствие
чего колонии их бесцветны или
молочно-мутного цвета, похожи на опал.
В проходящем свете такие колонии в
большей или меньшей степени прозрачны.
Пигментообразующие виды микробов
дают колонии различных цветов: кремовые,
желтые, золотисто-оранжевые, синие,
красные, сиреневые, черные и др.

Структура
колоний
определяется в проходящем свете при
слабом увеличении микроскопа, суженой
диафрагме или при несколько опущенном
конденсоре. У пигментированных
колоний и колоний, не пропускающих
света, она не определяется.

По
характеру структуры различают следующие
виды колоний:

гиалиновые —
бесцветные, прозрачные, без видимой
определенной структуры;
зернистые,
которые в зависимости от величины зерен
разделяются на мелко- и грубозернистые;
нитевидные
или волокнистые, характеризующиеся
наличием длинных, густо переплетающихся
нитей в толще колонии.

Колонии
бывают однородные и неоднородные.
Строение первых одинаково во всех
частях, у вторых центральная часть
отличается от периферической или
отдельные сектора имеют строение,
неодинаковое с остальной массой.

Консистенцию
колонии,
определяющую ее физическое состояние,
исследуют посредством прикосновения
или взятия из нее части материала
бактериальной петлей. По характеру
консистенции колонии бывают:

пастообразные,
легко снимающиеся и размывающиеся по
поверхности питательной среды наподобие
сливочного масла;
вязкие
или слизистые, прилипающие и тянущиеся
за петлей;
волокнистые
или кожистые, плотные, снимающиеся с
поверхности питательной среды в виде
упругой пленки, соответствующей
величине и форме колонии;
хрупкие,
сухие, рассыпающиеся при прикосновении
петли.

Сыворотка крови — Medside.ru

Закрыть

Болезни
- Инфекционные и паразитарные болезни
- Новообразования
- Болезни крови и кроветворных органов
- Болезни эндокринной системы
- Психические расстройства
- Болезни нервной системы
- Болезни глаза
- Болезни уха
- Болезни системы кровообращения
- Болезни органов дыхания
- Болезни органов пищеварения
- Болезни кожи
- Болезни костно-мышечной системы
- Болезни мочеполовой системы
- Беременность и роды
- Болезни плода и новорожденного
- Врожденные аномалии (пороки развития)
- Травмы и отравления
Симптомы
- Системы кровообращения и дыхания
- Система пищеварения и брюшная полость
- Кожа и подкожная клетчатка
- Нервная и костно-мышечная системы
- Мочевая система
- Восприятие и поведение
- Речь и голос
- Общие симптомы и признаки
- Отклонения от нормы
Диеты
- Снижение веса
- Лечебные
- Быстрые
- Для красоты и здоровья
- Разгрузочные дни
- От профессионалов
- Монодиеты
- Звездные
- На кашах
- Овощные
- Детокс-диеты
- Фруктовые
- Модные
- Для мужчин
- Набор веса
- Вегетарианство
- Национальные
Лекарства
- Антибиотики
- Антисептики
- Биологически активные добавки
- Витамины
- Гинекологические
- Гормональные
- Дерматологические
- Диабетические
- Для глаз
- Для крови
- Для нервной системы
- Для печени
- Для повышения потенции
- Для полости рта
- Для похудения
- Для суставов
- Для ушей
- Желудочно-кишечные
- Кардиологические
- Контрацептивы
- Мочегонные
- Обезболивающие
- От аллергии
- От кашля
- От насморка
- Повышение иммунитета
- Противовирусные
- Противогрибковые
- Противомикробные
- Противоопухолевые
- Противопаразитарные
- Противопростудные
- Сердечно-сосудистые
- Урологические
- Другие лекарства
ДЕЙСТВУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА
Врачи
Клиники
Справочник
- Аллергология
- Анализы и диагностика
- Беременность
- Витамины
- Вредные привычки
- Геронтология (Старение)
- Дерматология
- Дети
- Женское здоровье
- Инфекция
- Контрацепция
- Косметология
- Народная медицина
- Обзоры заболеваний
- Обзоры лекарств
- Ортопедия и травматология
- Питание
- Пластическая хирургия
- Процедуры и операции
- Психология
- Роды и послеродовый период
- Сексология
- Стоматология
- Травы и продукты
- Трихология
- Другие статьи
Словарь терминов
- [А] Абазия .. Ацидоз
- [Б] Базофилы .. Булимия
- [В] Вазектомия .. Выкидыш
- [Г] Галлюциногены .. Грязи лечебные
- [Д] Дарсонвализация .. Дофамин
- [Е] Еюноскопия
- [Ж] Железы .. Жиры
- [З] Заместительная гормональная терапия
- [И] Игольный тест .. Искусственная кома
- [К] Каверна .. Кумарин
- [Л] Лапароскоп .. Лучевая терапия
- [М] Магнитотерапия .. Мутация
- [Н] Наркоз .. Нистагм
- [О] Общий анализ крови .. Отек
- [П] Паллиативная помощь .. Пульс
- [Р] Реабилитация .. Родинка (невус)
- [С] Секретин .. Сыворотка крови
- [Т] Таламус .. Тучные клетки
- [У]