Антитела igg к цитомегаловирусу положительный: лечение, эффективная диагностика цитомегаловирусной инфекции в Москве

alexxlab 18.01.1970 No Comments

Содержание

Cytomegalovirus, IgG

Антитела класса IgG к цитомегаловирусу – специфические иммуноглобулины, вырабатывающиеся в организме человека в период выраженных клинических проявлений цитомегаловирусной инфекции и являющиеся серологическим маркером этого заболевания, а также перенесенной в прошлом цитомегаловирусной инфекции.

Синонимы русские

Антитела класса IgG к цитомегаловирусу (ЦМВ).

Синонимы английские

Anti-CMV-IgG, CMV Antibody, IgG.

Метод исследования

Электрохемилюминесцентный иммуноанализ (ECLIA).

Единицы измерения

Ед/мл (единица на миллилитр).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную, капиллярную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Цитомегаловирус (ЦМВ) относится к семейству вирусов герпеса.

Так же, как и другие представители этой группы, он может сохраняться у человека всю жизнь. У здоровых людей с нормальным иммунитетом первичная инфекция протекает без осложнений (и часто бессимптомно). Однако цитомегаловирус опасен при беременности (для ребенка) и при иммунодефиците.

Цитомегаловирусом можно заразиться через различные биологические жидкости: слюну, мочу, сперму, кровь. Кроме того, он передается от матери к ребенку (во время беременности, родов или при кормлении).

Как правило, цитомегаловирусная инфекция протекает бессимптомно. Иногда заболевание напоминает инфекционный мононуклеоз: повышается температура, болит горло, увеличиваются лимфатические узлы. В дальнейшем вирус сохраняется внутри клеток в неактивном состоянии, но если организм окажется ослаблен, то он снова начнет размножаться.

Для женщины важно знать, была ли она заражена ЦМВ в прошлом, потому что именно это определяет, есть ли риск осложнений при беременности. Если раньше она уже была инфицирована, то риск минимален.

Во время беременности может обостриться старая инфекция, однако такая форма обычно не вызывает тяжелых последствий.

Если у женщины еще не было ЦМВ, значит, она входит в группу риска и ей следует уделять особое внимание профилактике ЦМВ. Для ребенка опасна именно инфекция, которой мать заразилась первый раз во время беременности.

При первичной инфекции у беременной женщины вирус часто попадает и в организм ребенка. Это еще не означает, что он заболеет. Как правило, заражение ЦМВ протекает бессимптомно. Однако примерно в 10  % случаев оно приводит к врождённым патологиям: микроцефалии, церебральной кальцификации, сыпи и увеличению селезенки и печени. Это часто сопровождается снижением интеллекта и глухотой, возможен даже летальный исход.

Таким образом, для будущей матери важно знать, была ли она в прошлом заражена ЦМВ. Если да, то риск осложнений из-за возможного ЦМВ становится незначительным. Если же нет – нужно проявлять особую осторожность во время беременности:

  • избегать незащищенного секса,
  • не контактировать со слюной другого человека (не целоваться, не использовать общую посуду, зубные щетки и пр.),
  • соблюдать правила гигиены при играх с детьми (мыть руки, если на них попадает слюна или моча),
  • сдавать анализ на ЦМВ при признаках общего недомогания.

Кроме того, цитомегаловирус представляет опасность при ослаблении иммунной системы (например, из-за иммунодепрессантов или ВИЧ). При СПИДе ЦМВ протекает в тяжелой форме и является частой причиной смерти больных.

Основные симптомы цитомегаловирусной инфекции:

  • воспаление сетчатки (которое может приводить к слепоте),
  • колит (воспаление толстой кишки),
  • эзофагит (воспаление пищевода),
  • неврологические расстройства (энцефалит и др.).

Выработка антител – это один из способов борьбы с вирусной инфекцией. Существует несколько классов антител (IgG, IgM, IgA и др.).

Антитела класса G (IgG) присутствуют в крови в наибольшем количестве (по сравнению с другими типами иммуноглобулинов). При первичной инфекции их уровень возрастает в первые недели после заражения и затем может оставаться высоким годами.

Кроме количества, часто определяется еще и авидность IgG – прочность, с которой антитело связывается с антигеном. Чем выше авидность, тем прочнее и быстрее антитела связывают вирусные белки. Когда человек впервые заражается ЦМВ, его антитела IgG обладают низкой авидностью, потом (через три месяца) она становится высокой. По авидности IgG судят о том, как давно произошло первоначальное заражение ЦМВ.

Для чего используется исследование?

  • Чтобы установить, был ли человек в прошлом инфицирован ЦМВ.
  • Для диагностики цитомегаловирусной инфекции.
  • Чтобы установить возбудителя заболевания, которое похоже на цитомегаловирусную инфекцию.

Когда назначается исследование?

  • Во время беременности (или при ее планировании) – для оценки риска осложнений (проверочное исследование), при симптомах цитомегаловирусной инфекции, при нарушениях у плода по результатам УЗИ.
  • При симптомах цитомегаловирусной инфекции у людей с ослабленным иммунитетом.
  • При симптомах мононуклеоза (если тесты не выявили вирус Эпштейна – Барр).

Что означают результаты?

Референсные значения

Концентрация: 0 — 0,5 Ед/мл.

Результат: отрицательный.

Отрицательный результат при беременности

  • Женщина раньше не была инфицирована ЦМВ – есть риск приобрести первичную ЦМВ-инфекцию. Однако если с момента заражения прошло не больше 2-3 недель, то IgG могли еще не появиться. Чтобы исключить этот вариант, нужно сдать анализ повторно через 2 недели.

Положительный результат до беременности

  • Женщина уже была инфицирована ЦМВ в прошлом – риск осложнений минимален.

Положительный результат во время беременности

  • Нельзя сделать однозначный вывод. Возможно, ЦМВ попал в организм до беременности. Но не исключено, что женщина заразилась недавно, в начале беременности (за несколько недель до теста). Такой вариант представляет опасность для ребенка. Для точного диагноза нужны результаты других анализов (см. таблицу).

При попытке установить возбудителя неизвестного заболевания единичный тест на IgG дает мало информации. Нужно учитывать результаты всех анализов.

Результаты тестов в разных ситуациях

 

Первичная инфекция

Обострение давней инфекции

ЦМВ в латентном состоянии (человек был инфицирован в прошлом)

Человек не заражен ЦМВ

Результаты тестов

IgG: первые 1-2 недели отсутствуют, потом их количество увеличивается.

IgM: есть (высокий уровень).

Авидность IgG: низкая.

IgG: есть (количество увеличивается).

IgM: есть (невысокий уровень).

Авидность IgG: высокая.

IgG: присутствуют на постоянном уровне.

IgM: обычно нет.

Авидность IgG: высокая.

 

IgG: нет.

IgM: нет.
 Скачать пример результата

Важные замечания

  • Иногда нужно узнать, заражен ли цитомегаловирусом сам новорождённый ребенок. Однако анализ на IgG в данном случае неинформативен. IgG могут проникать через плацентарный барьер, поэтому, если антитела есть у матери, то они же будут присутствовать и у ребенка.
  • Что такое реинфекция? В природе существует несколько разновидностей ЦМВ, так что возможна ситуация, когда человек, уже инфицированный одним типом вируса, заражается еще раз другим.

Также рекомендуется

Кто назначает исследование?

Врач общей практики, терапевт, инфекционист, гинеколог.

Литература

  • Adler S. P. Screening for cytomegalovirus during Pregnancy. Infect Dis Obstet Gynecol. 2011:1-9.
  • Goldman’s Cecil Medicine. 24th ed. Goldman L, Schafer A.I., eds. Saunders Elsevier; 2011.
  • Lazzarotto T. et al. Why is cytomegalovirus the most frequent cause of congenital infection? Expert Rev Anti Infect Ther. 2011; 9(10): 841-843.

Антитела IgG к Цитомегаловирусу (AT IgG CMV)

Срок выполнения, дней: 1-2

Код исследования: IA19


Цитомегаловирусная инфекция — антропонозная вирусная инфекционная болезнь. Цитомегаловирус относится к вирусу герпеса человека типа 5. Характеризуется преимущественно латентным течением у взрослых, а также генерализованной формой с поражением нервной системы и внутренних органов при внутриутробном заражении плода.

Антитела класса IgG выявляются в сыворотке крови через 2-4 недели после инфицирования цитомегаловирусом. Они являются показателями как текущей, так и перенесенной инфекции и могут обнаруживаться еще в течение нескольких лет после заболевания.

 

Подготовка пациента: Сдача крови натощак.


Материал: Венозная кровь.

Стабильность пробы: не более 5 суток при температуре 2-8 °C при условии отсутствия микробной контаминации и не более 6 месяцев при температуре -20 °C. Замораживать только один раз. 

Метод: ИФА.
 

Анализатор: Sinnowa ER-500.

Тест – система: Beckman Coulter (США).

Референсные значения (норма):

Отрицательный:    <1.0;

Положительный:   ≥1.0.
 

Основные показания к назначению анализа:

1. Подготовка к беременности;

2. Признаки внутриутробной инфекции, фето-плацентарная недостаточность;

3. Состояние иммуносупрессии при ВИЧ-инфекции, неопластических заболеваниях, приёме цитостатических препаратов и т. д.;

4. Клиническая картина инфекционного мононуклеоза в отсутствие инфекции, вызванной вирусом Эпштейна –Барра;

5. Гепато-спленомегалия неясной природы;

6. Лихорадка неясной этиологии;

7. Повышение уровня печёночных трансаминаз, гамма-ГТ, ЩФ в отсутствие маркёров вирусных гепатитов;

8. Атипичное течение пневмонии у детей;

9. Невынашивание беременности (замёршая беременность, привычные выкидыши). 

 

Интерпретация результатов: 

Положительный результат: 

1. ЦМВ-инфекция;

2. Внутриутробная инфекция возможна, вероятность её возникновения неизвестна.

 

Отрицательный результат: 

В сыворотке крови, взятой в начале острого периода ЦМВ-инфекции и к концу периода выздоровления, специфические антитела класса IgG и IgM могут отсутствовать. Поэтому отрицательный результат анализа не позволяет исключить инфекцию. Для уточнения диагноза необходимо не менее двух исследований крови.

 

Anti-CMV-IgM (Антитела класса IgM к цитомегаловирусу, ЦМВ, CMV)

Исследуемый материал Сыворотка крови

Метод определения Иммуноферментный анализ (ИФА).

Антитела класса IgM к цитомегаловирусу (CMV, ЦМВ).

В ответ на внедрение в организм цитомегаловируса (ЦМВ) развивается иммунная перестройка организма. Инкубационный период колеблется от 15 дней до 3 месяцев. При данной инфекции имеет место нестерильный иммунитет (то есть не наблюдается полной элиминации вируса). Иммунитет при цитомегаловирусной инфекции (ЦМВ) нестойкий, медленный. Возможна реинфекция экзогенным вирусом или реактивация латентной инфекции. Вследствие длительного персистирования в организме вирус действует на все звенья иммунной системы больного. Защитная реакция организма проявляется, прежде всего, в виде образования специфических антител классов IgM и IgG к ЦМВ. Специфические антитела отвечают за лизис внутриклеточного вируса, а также ингибируют его внутриклеточную репликацию или распространение от клетки к клетке. Сыворотки пациентов после первичной инфекции содержат антитела, реагирующие с внутренними протеинами ЦМВ (р28, р65, р150). В сыворотке выздоровевших людей содержатся в основном антитела, реагирующие с гликопротеинами оболочки.

Наибольшее диагностическое значение имеет определение IgM, как показателя активности процесса, что может свидетельствовать об остро текущем заболевании, реинфекции, суперинфекции или реактивации. Появление анти-CMV IgM антител у ранее серонегативного пациента свидетельствует о первичной инфекции. При эндогенной реактивации инфекции IgM-антитела образуются нерегулярно (обычно в довольно низких концентрациях) или могут вообще отсутствовать. Выявление иммуноглобулинов класса G также позволяет определить первичную цитомегаловирусную инфекцию (ЦМВИ), проводить наблюдение в динамике за лицами с клиническими проявлениями инфекции и помогать при ретроспективной диагностике. При тяжелой ЦМВИ, а также у беременных и детей раннего возраста выработка антител к ЦМВ замедлена. Это проявляется обнаружением специфических антител в низкой концентрации или отсутствием положительной динамики антител.

Особенности инфекции. Цитомегаловирусная (ЦМВ) инфекция — это широко распространённое вирусное поражение организма, которое относится к так называемым оппортунистическим инфекциям, протекающим обычно латентно. Клинические проявления наблюдаются на фоне физиологических иммунодефицитных состояний (дети первых 3 — 5 лет жизни, беременные — чаще во 2 и 3 триместре), а также у лиц с врождёнными или приобретёнными иммунодефицитами (ВИЧ-инфекция, применение иммунодепрессантов, онкогематологические заболевания, облучение, диабет и т. п.).

Цитомегаловирус — вирус семейства герпес-вирусов. Так же как и другие представители семейства, после инфицирования сохраняется в организме практически пожизненно. Устойчив во влажной среде. Группу риска составляют дети 5 — 6 лет, взрослые 16 — 30 лет, а также лица, практикующие анальный секс. Дети восприимчивы к передаче инфекции воздушно-капельным путем от родителей и других детей с латентными формами инфекции. Для взрослых более характерен половой путь передачи. Вирус содержится в сперме и других биологических жидкостях. Вертикальная передача инфекции (от матери к плоду) происходит трансплацентарно и в процессе родов.

ЦМВ-инфекция характеризуется разнообразием клинических проявлений, но при полноценном иммунитете протекает клинически бессимптомно. В редких случаях развивается картина инфекционного мононуклеоза (около 10% всех случаев инфекционного мононуклеоза), клинически не отличимого от мононуклеоза, вызванного вирусом Эпштейн-Барра. Репликация вируса происходит в тканях ретикуло-эндотелиальной системы, эпителии урогенитального тракта, печени, слизистой дыхательных путей и пищеварительного тракта. При снижении иммунитета после трансплантации органов, терапии иммуносупрессорами, ВИЧ-инфекции, а также у новорожденных, ЦМВ представляет серьезную угрозу, так как заболевание может затрагивать любой орган. возможно развитие гепатита, пневмонии, эзофагита, гастрита, колита, ретинита, диффузной энцефалопатии, лихорадки, лейкопении. Заболевание может заканчиваться летально.

Цитомегаловирусная инфекция у беременных, обследование при беременности. При первичном инфицировании беременной цитомегаловирусом (в 35 — 50% случаев) или реактивации инфекции в период беременности (в 8 — 10% случаев) развивается внутриутробная инфекция. При развитии внутриутробной инфекции на сроке до 10 недель есть риск возникновения пороков развития, возможно самопроизвольное прерывание беременности. При инфицировании на 11 — 28 неделе возникают задержка внутриутробного развития, гипо- или дисплазии внутренних органов. Если инфицирование происходит на более позднем сроке, поражение может быть генерализованным, захватывать определенный орган (например, фетальный гепатит) или проявляться после рождения (гипертензионно-гидроцефальный синдром, нарушения слуха, интерстициальный пневмонит и т. д.). Проявления инфекции также зависят от иммунитета матери, вирулентности и локализации вируса.

На сегодняшний момент вакцина против цитомегаловируса не разработана. Медикаментозная терапия позволяет увеличить период ремиссии и воздействовать на рецидив инфекции, но не позволяет элиминировать вирус из организма.

Полностью излечить это заболевание невозможно: нельзя удалить цитомегаловирус из организма. Но если своевременно, при малейшем подозрении на инфицирование этим вирусом, обратиться к врачу, произвести необходимые анализы, то можно долгие годы удерживать инфекцию в «спящем» состоянии. Это обеспечит нормальное вынашивание беременности и роды здорового ребенка.

Особое значение лабораторная диагностика цитомегаловирусной инфекции имеет у следующих категорий обследуемых:

КатегорияПричины

Женщины,
при подготовке к беременности

 1.Латентное течение заболевания
2. Сложность дифференциальной
диагностики первичного инфицирования
и рецидива инфекции при обследовании
во время беременности
3. Тяжёлые последствия внутриутробной
инфекции у новорожденных.
Беременные женщины Тяжёлые последствия внутриутробной
инфекции у новорожденных
Иммунодефицитные состояния Генерализованные формы


Последовательное многократное определение уровня IgG-антител у новорожденных позволяет отличить врожденное заражение (постоянный уровень) от неонатального (нарастание титров). Если титр IgG антител при повторном (через две недели) анализе не увеличивается, то причин для тревоги нет, если титр IgG растет, следует рассмотреть вопрос об аборте.

ВАЖНО! CMV-инфекция входит в группу TORCH-инфекций (название образовано начальными буквами в латинских наименованиях — Toxoplasma, Rubella, Cytomegalovirus, Herpes), считающихся потенциально опасными для развития ребенка. В идеальном случае проконсультироваться с врачом и пройти лабораторное обследование на TORCH-инфекции женщине нужно за 2 — 3 месяца до планируемой беременности, поскольку в этом случае будет возможность предпринять соответствующие лечебные или профилактические меры, а также при необходимости в будущем сравнить полученные результаты исследований до беременности с результатами обследований во время беременности.

Цитомегаловирус: Симптомы, диагностика и лечение

Цитомегаловирус – это достаточно распространенное вирусное заболевание, которое, между тем, известно далеко не каждому. Цитомегаловирус, симптомы и характерные признаки которого определяются, прежде всего, состоянием иммунной системы, при нормальном ее состоянии может вообще никак себя не проявлять. Не проявлять и не оказывая никакого вредного воздействия на организм вирусоносителя. Примечательно, что в этом случае единственной особенностью вирусоносителя является возможность передачи цитомегаловирусной инфекции к другому человеку.

Причины и симптомы

Заражение цитомегаловирусом происходит через сперму, слизь канала шейки матки, слюну, кровь и грудное молоко. Младенцы заражаются от своих матерей во время родов или через грудное молоко. Дети заражаются друг от друга в детских садах (обычно через слюну). Взрослые нередко заражаются при половых контактах и поцелуях.

Стоит отметить, что для заражения требуются длительное, тесное общение или многократные контакты, поэтому подхватить вирус не так уж просто.

Этот вирус широко распространен среди людей. Антитела к цитомегаловирусу выявляют у 10-15% подростков. К возрасту 35 лет эти антитела выявляют уже у 50% людей.

У людей с нормальным иммунитетом цитомегаловирус в подавляющем большинстве случаев протекает бессимптомно, не причиняя никакого вреда.

Иногда у лиц с нормальным иммунитетом этот вирус вызывает так называемый мононуклеозоподобный синдром. Этот синдром возникает спустя 20-60 суток после заражения и длится 2-6 недель. Проявляется он высокой температурой, ознобом, утомляемостью, недомоганием и головной болью. В большинстве случаев мононуклеозоподобный синдром заканчивается полным выздоровлением.

У лиц с ослабленным иммунитетом (ВИЧ-инфицированные; химиотерапия по поводу злокачественных новообразований; иммуносупрессивная терапия при трансплантации внутренних органов) цитомегаловирус вызывает тяжелые заболевания (поражение глаз, легких, пищеварительной системы и головного мозга), которые могут приводить к смерти.

При заражении плода во время беременности (но не во время родов) возможно развитие врожденной цитомегаловирусной инфекции. Последняя приводит к тяжелым заболеваниям и поражениям центральной нервной системы (отставание в умственном развитии, тугоухость). В 20-30% случаев ребенок погибает. Врожденная цитомегаловирусная инфекция наблюдается почти исключительно у детей, матери которых во время беременности впервые заражаются цитомегаловирусом.

Лишь порядка 17% из общего числа зараженных детей испытывает различную симптоматику, соответствующую инфекции. Цитомегаловирус проявляется в виде желтухи, увеличения внутренних органов в размерах (селезенка, печень), понижения гемоглобина и изменения состава крови на биохимическом уровне, в тяжелых формах своего течения может спровоцировать нарушения в ЦНС. Помимо этого, как нами уже отмечено ранее, могут развиться поражения слухового аппарата и глаз.

Часто отмечается появление обильной сыпи у детей уже в течение первых часов с момента рождения при наличии у них инфекции. Затрагивает она кожные покровы в области туловища, лица, ног и рук. Кроме того, цитомегаловирус нередко сопровождается и кровоточивостью пупочной ранки наряду с обнаружением в кале крови.

Поражение головного мозга приводит к дрожанию ручек и к судорогам, отмечается повышенная сонливость.

Диагностика

Диагностирование заболевания производится с помощью ряда специфических исследований, ориентированных на обнаружение рассматриваемого вируса. Сюда входят не только лишь лабораторные методы, но также и изучение клинических особенностей.

Культуральный посев — с его помощью определяется возможность выявления вируса во взятых образцах слюны, спермы, крови, мочи, общего мазка. Здесь не только выявляется актуальность наличия вируса, но и составляется комплексная картина, указывающая на его активность. Кроме того, за счет проведения этого анализа становится понятно, насколько эффективна используемая против действия вируса терапия.

Световая микроскопия. С помощью данного метода с использованием в нем микроскопа имеется возможность обнаружения гигантских клеток цитомегаловируса.

ИФА. Данный метод основывается на выявлении антител к цитомегаловирусной инфекции. При иммунодефиците его не используют, потому, как это состояние исключает возможность выработки антител.

Диагностика ДНК. Ткани организма исследуются на предмет обнаружения ДНК рассматриваемого вируса.

Лечение

На сегодняшний день метода лечения, с помощью которого полностью устраняется из организма цитомегаловирус, не существует. При нормальном состоянии иммунной системы и отсутствии активности со стороны вируса, лечения, как такового, не требуется. В случае обнаружения в организме цитомегаловирусной инфекции, в обязательном порядке применять антивирусную терапию не нужно.

Курс лечения требуется в обязательном порядке при гепатите, расстройстве слуховых и зрительных органов, пневмонии, энцефалите, желтухе, подкожных кровоизлияниях и недоношенности (в случае врожденной формы цитомегаловируса). Лечение, как правило, предполагает использование препаратов в виде свечей, а также ряда противовирусных препаратов. Длительность приема, как и дозировка, определяются исходя из индивидуальных особенностей и состояния больного.

Для подробной консультации обращайтесь в нашу клинику.

Лечение хламидиоза и цитомегаловируса | Онли Клиник

Хламидиоз и цитомегаловирус: лечение инфекций


Хламидиоз – одно из распространённых заболеваний, которое передается половым путём. Как правило, заражение хламидиозом происходит при незащищённом половом акте, когда бактерия — возбудитель инфекции попадает в организм мужчины или женщины. Бытует мнение, что опасные бактерии, в частности хламидии, могут проникнуть в организм человека и на бытовом уровне – при посещении бассейна или использования грязной сантехники. Тем не менее, это не так – вне организма бактерии практически сразу прекращают своё существование, поэтому вероятность получить хламидиоз, лечение которого должно быть безотлагательным, без полового контакта с заражённым человеком, ничтожно мала.
Бессимптомный период может длиться от недели до месяца, пока бактерии в организме не дадут знать о своём присутствии.

У женщин симптомы хламидиоза — это выделения из влагалища жёлтого, белого или прозрачного цвета. Также постоянно присутствует боль при мочеиспускании, половом акте.

Примерно такие же симптомы хламидиоза наблюдаются у мужчин: неприятные выделения, повышенная боль при мочеиспускании и коитусе.

Часто бывает, что заболевание хламидиоз протекает без симптомов и почти не даёт о себе знать на протяжении долгого времени. Тем не менее, важно помнить о том, что в женском организме нахождение вредных бактерий чревато полным бесплодием. В то же самое время, у мужчин инфекция хламидиоз может спровоцировать начало процесса воспаления придатка яичка.

Цитомегаловирус — еще одна инфекция, которая передается половым путем. Цитомегаловирусная инфекция, лечение которой требует безотлагательного медицинского вмешательства. Цитомегаловирус достаточно опасен для организма и мужчины, и женщины. Особенно важно провериться на наличие этой инфекции и при необходимости начать её лечение беременным женщинам, а также парам, которые планируют стать родителями.
Результат анализа на цитомегаловирус «Антитела к цитомегаловирусу IgG положительный» — это означает, что в организме обследуемого человека имеется стойкий иммунитет на цитомегаловирус, потому что этот человек переболел данной инфекцией. Положительный результат анализа на антитела IgG к цитомегаловирусу говорит о том, что в крови пациента присутствуют иммуноглобулины, которые обладают способностью быстро и эффективно нейтрализовать вирусные частицы цитомегаловируса.

Цитомегаловирус IgG положительный — это означает очень хорошие результаты теста.

Цитомегаловирусная инфекция может долгое время никак себя не проявлять в организме человека. Основные симптомы цитомегаловируса — это высокая температура, резкая головная боль, сниженный тонус организма. Эти симптомы очень похожи на типичные ОРВИ, ОРЗ, грипп. Важно знать, что цитомегаловирус может прогрессировать в пневмонию, артрит, энцефалит.

Хламидиоз и цитомегаловирус: симптомы, лечение и профилактика.

Специалисты советуют тем людям, у которых нет постоянного полового партнёра, периодически отправляться на диагностику ИППП, в том числе, сдавать ДНК-анализы на предмет наличия бактерий в организме. Если же болезнь была обнаружена в организме одного из партнёров, то поход к врачу обязательно должен быть совместным.

Наиболее распространённым вариантом лечения сегодня является курс антибиотиков. Традиционно, назначается приём в течение трёх недель. Если бактерии были обнаружены у беременной женщины – лечение проводится в обязательном порядке, современная медицина предполагает наличие специализированных антибиотиков для беременных, которые должен назначить врач. Такой курс займёт всего две недели и избавит новорождённого от целого ряда неприятных заболеваний.


Диагностика и назначение лечения хламидиоза и цитомегаловируса.

Что касается вопросов лечения, то современная медицина не предполагает никакого точного инструмента для искоренения этой болезни. Тем не менее, фармацевтические средства помогают полностью подавить вирус и продлить его «инкубационный период» на долгие десятилетия.


Вместе с тем, такая особенность инфекционного заболевания – ещё один повод обратиться к компетентным специалистам, которые окажутся в состоянии не только вовремя распознать проблему, но и назначить самые передовые способы лечения.

Приглашаем на диагностику, лечение и реабилитацию в частную больницу Онли Клиник, которая находится в Нижнем Новгороде по адресу ул. Бетанкура, д. 2, — предлагаем только самые лучшие и прогрессивные способы к полному выздоровлению.

Цитомегаловирус IgG. Цитомегаловирусная инфекция — Симптомы и лечение при беременности, у детей. Анализ у женщин и мужчин

Что такое цитомегаловирус?

Цитомегаловирус – этот вирус распространен во всем мире. Как заболевание чаще отмечается в перинатальном периоде и в детском возрасте. Инфицирование происходит воздушно-капельным путем, при поцелуях и сексуальных контактах, при переливании препаратов крови.

Одним из основных направлений медицинской помощи в клинике «Витацелл» является диагностика активных форм и комбинированная противовирусная терапия герпетических инфекций, вызванных вирусами простого герпеса ( HSV 1/2) и опоясывающего герпеса ( HZV ), цитомегаловирусом ( CMV ), вирусом Эпштейна-Барр ( EBV ).

Лабораторная диагностика цитомегаловирусной (CMV) инфекции

Прейскурант цен на молекулярно-биологические исследования (в том числе анализ на цитомегаловирус)

Видео по теме:

 

Цитомегаловирус и беременность

Цитомегаловирус, врожденная цитомегаловирусная (ЦМВ) инфекция является одной их наиболее частых причин внутриутробного инфицирования эмбриона и плода. В связи с отсутствием до настоящего времени корректного обследования беременных женщин на активность хронической ЦМВ инфекции, внутриутробное инфицирование этим вирусом происходит гораздо чаще, чем диагностируется. Женщина, которая является невольным источником заражения для своего самого любимого в мире человека, сама, в подавляющем большинстве случаев, не болеет и даже не знает о том, что произошло. Инфекция проникает через матку (первые 8-10 недель беременности) или через плаценту.

Цитомегаловирус у ребенка

При раннем заражении ребенка в эмбриональном периоде развития (первые 12 недель) обычно беременность прерывается из-за выкидыша, замирания и других осложнений раннего периода беременности. Могут также развиваться различные пороки внутриутробного развития, многие из которых бывают несовместимы с жизнью. Некоторые сложные пороки развития ребенка, которые относят к генетическим заболеваниям (например, синдром Денди-Уокера) также могут быть индуцированы ранним заражением цитомегаловирусом в первом триместре беременности. При инфицировании на более поздних сроках гибель плода наступает реже, но заражение ЦМВ может приводить к различным заболеваниям новорожденных и детей грудного возраста.

Среди детей этой возрастной группы острая врожденная ЦМВ-инфекция встречается примерно в 2-4% случаев от общего числа внутриутробно инфицированных новорожденных. Обычно уже в первые часы или сутки после рождения у таких новорожденных повышается температура, развивается гепатит, появляется желтуха, обильная геморрагическая сыпь на лице, туловище, конечностях, воспаление легких. Могут возникнуть кровоизлияния в слизистые оболочки, кровотечения из пупочной ранки, явления гемоколита (кровь в стуле). У новорожденных с острым поражением головного мозга наблюдаются дрожание рук, сонливость, судороги; возможны нарушения зрения и слуха. При острой врожденной ЦМВ-инфекции проводят специфическую противовирусную терапию, прогноз серьезный.

Не меньшую проблему, чем острая врожденная ЦМВ-инфекция, представляет первично хроническая врожденная ЦМВ-инфекция. Она может протекать в двух основных формах: клинически манифестной или в бессимптомной, известной как «скрытый» цитомегаловирусный синдром. К первой форме заболевания можно отнести детей грудного и раннего возраста с поражением глаз с резким снижением или даже полным отсутствием зрения; детей с органическими заболеваниями нервной системы (дебют эписиндрома и устойчивая к лечению эпилепсия, неокклюзивные гидроцефалии, детский церебральный паралич, аутизм и др.), а также — с различными задержками развития (физического с задержкой набора массы тела, речевого с дефектами речи, умственного). Среди детей с такими заболеваниями активная форма врожденной ЦМВ инфекции встречается примерно в 75%.

Как лечить цитомегаловирус у детей

Чем раньше начато лечение первично хронической врожденной цитомегаловирусной инфекции у детей с ее клиническими проявлениями – тем лучше прогноз. Лечение, начатое в первые 3-4 месяца жизни, в большинстве случаев позволяет полностью восстановить зрение, купировать дальнейшее прогрессирование эпилепсии, гидроцефального синдрома и наверстать отставание в развития. Дети с аутизмом, которым адекватное лечение врожденной ЦМВ-инфекции проведено в первые 2-3 года жизни, нередко затем могут проходить обучение в обычных, а не в специализированных школах.

Дети со «скрытым» цитомегаловирусным синдромом рождаются клинически здоровыми, но с лабораторными признаками репликативной активности вируса. В дальнейшем возможны также два варианта развития этого состояния: часто болеющие дети и клинически здоровые дети, у которых активную форму ЦМВ можно обнаружить только при адекватном лабораторном обследовании. Основным клиническим эквивалентом скрытой врожденной ЦМВ-инфекции является необычная склонность детей к частым хроническим бактериальным инфекциям. Нередко это проявляется уже на первых месяцах жизни: пиодермия новорожденного и другие проявления стафилококковой инфекции, рецидивирующие стоматиты, гаймориты, отиты, бронхиты и пневмонии, циститы, пиелонефриты и другие заболевания бактериальной природы. Среди часто болеющих детей этой группы врожденная ЦМВ-инфекция встречается не реже, чем в 70-75% случаев. При обследовании абсолютно клинически здоровых детей первого года жизни перед проведением плановых профпрививок примерно в 30% случаев удается обнаружить активную форму врожденной ЦМВ-инфекции. Проведение вакцинации таким детям до лечения ЦМВ-инфекции или естественной латенции вируса абсолютно противопоказано. Поражения нервной системы после прививок (эпилепсия, ДЦП, аутизм, параличи, умственная отсталость) сегодня связаны не с «плохими» вакцинами, а с неконтролируемой активацией после прививки скрытой врожденной ЦМВ-инфекции, которая собственно и приводит к тяжелым часто необратимым последствиям. Т.е. по сути после прививки развивается не поствакцинальное поражение нервной системы, а цитомегаловирусное, о чем родители и лечащий врач даже не догадываются. Врожденная цитомегаловирусная инфекция может проявляться не сразу, а на 3—5 году жизни ребенка или даже в школьном возрасте. Известно, что около 50% детей со «скрытым» цитомегаловирусным синдромом в дальнейшем относятся к плохо успевающим в учебе школьникам.

Опасность представляет только врожденная ЦМВ-инфекция. Заражение ЦМВ после рождения (с грудным молоком, от других детей и взрослых) у иммунокомпетентных детей (без иммунодефицита) уже никаких заболеваний вызвать не может.

Следует помнить, что обнаружение у ребенка антител IgG в первые 6-9 месяцев после рождения не имеет самостоятельного диагностического значения. Это могут быть материнские антитела, попавшие к ребенку через плаценту и пуповину во время беременности. А антитела IgMу 80% детей старше 2-3 месяцев с активной формой врожденной ЦМВ-инфекции вообще отсутствуют. Поэтому сегодня единственным адекватным методом лабораторной диагностики для подтверждения врожденной и хронической ЦМВ-инфекции являются положительные результаты одновременного ПЦР-исследования крови, слюны и мочи с количественным определением вирусной нагрузки.

Цитомегаловирус, цитомегаловирус лечение, чем лечить цитомегаловирус, цитомегаловирус при беременности. 

Если у Вас или Вашего ребенка есть такие жалобы или симптомы,

Особенности продукции IgG-антител к индивидуальным белкам цитомегаловируса при различных заболеваниях глаз (возрастной макулярной дегенерации и центральной серозной хориоретинопатии) | Нероев

1. Алексеев И.Б., Нам Ю.А., Непесова О.М. Патогенетические особенности развития дистрофических процессов сетчатки при миопии и возрастной макулярной дегенерации // Российский офтальмологический журнал. 2017. Т. 10, № 4. С. 90—96.

2. Игнатьев С.А., Алексеев И.Б., Чернакова Г.М., Клещева Е.А., Нам Ю.А. Возрастная макулярная дегенерация и цитомегаловирус: дискуссионные аспекты патогенеза // Российский офтальмологический журнал. 2015. Т. 8, № 4. С. 71-78.

3. Марданлы С.С., Арсеньева В.А., Захаров М.В., Марданлы С.Г., Амелина Е.А., Ротанов С.В. Применение линейного иммуноблоттинга для скрининга антител класса и М к основным возбудителям TORCH-инфекций // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2015. Т. 3, № 82. С. 59-65.

4. Мирзабекова К.А. Центральная серозная хориоретинопатия — современные подходы к лечению // Вестник офтальмологии. 2012. № 6. С. 62-64.

5. Мухамедьянова А.Ш., Азнабаев Р.А., Азнабаева Л.Ф. Клинические и иммунологические факторы возникновения и течения возрастной макулярной дегенерации // Вестник офтальмологии. 2014. Т. 130, № 3. С. 9-12.

6. Нероев В.В. Российское наблюдательное эпидемиологическое неинвертеционное исследование пациентов с влажной формой макулярной дегенерации // Российский офтальмологический журнал. 2011. Т 4, № 2. С. 4-9.

7. Нероев В.В., Рябина М.В., Цапенко И.В., Зуева М.В., Чиковани К.Р. Клинико-функциональные особенности различных форм центральной серозной хориоретинопатии // Российский офтальмологический журнал. 2011. Т. 4, № 1. С. 52-57.

8. Нероев В.В., Цапенко И.В., Зуева М.В., Рябина М.В., Чиковани К.Р. Морфофункциональные изменения сетчатки и ретинального пигментного эпителия у больных центральной серозной хориоретинопатией на фоне длительной системной стероидной терапии // Российский офтальмологический журнал. 2012. Т. 5, № 3. С. 34-38.

9. Никитина А.В., Помелова В.Г., Соколова М.В., Осин Н.С., Марданлы С.Г. Выбор антигенов для определения иммуноглобулина G к цитомегаловирусу на основе технологии ФОСФАН // Клиническая лабораторная диагностика. 2015. Т. 60, № 10. С. 36-39.

10. Слепова О.С., Еремеева Е.А., Рябина М.В., Сорожкина Е.С. Роль инфекции в патогенезе возрастной макулярной дегенерации // Вестник офтальмологии. 2015. Т. 131, № 4. С. 56—59. doi: 10.17116/oftalma2015131456-59

11. Biolatti М., Dell’Oste V., De Andrea М., Landolfo S. The human cytomegalovirus tegument protein pp65(pUL83): a key player in innate immune evasion. New Microbiologica, 2018, vol. 41, no. 2, pp. 87—94.

12. Kalejta R.F. Tegument proteins of human cytomegalovirus. Microbiol. Mol. Biol. Rev., 2008, vol. 72, no. 2, pp. 249—265. doi: 10.1128/VVBR.00040-07

13. Miller D.M., Espinosa-Heidmann D.G., Legra J., Dubovy S.R., Suner I.J., Sedmak D.D., Dix R.D., Cousins S.W. The association of prior cytomegalovirus infection with neovascular age-related macular degeneration. Am. J. Ophthalmol., 2004, vol. 138, no. 3,pp. 323-28. doi: 10.1016/j.ajo.2004.03.018

14. Nulens E., Bodeus M., Bonelli F., Soleti A., Goubau P. Reactivity to p52 and CM2 recombinant proteins in primary human cytomegalovirus infection with a microparticle agglutination assay. Clin. Diagn. Lab. Immunol., 2000, vol. 7, no. 4, pp. 536-539. doi: 10.1128/cdli.7.4.536-539.2000

15. Pepperl S., Munster J., Mach M., Harris J.R., Plachter B. Dense bodies of human cytomegalovirus induce both humoral and cellular immune responses in the absence of viral gene expression. J. Virol., 2000, vol. 74, no. 13, pp. 6132- 6146. doi: 10.1128/jvi.74.13.6132-6146.2000

16. Smith R.M., Kosuri S., Kerry J.A. Role of human cytomegalovirus tegument proteins in virion assembly. Viruses, 2014, vol. 6, no. 2, pp. 582-605. doi: 10.3390/v6020582

17. Tomtishen J.P. 3rd. Human cytomegalovirus tegument proteins (pp65, pp71, pp150, pp28). Virol. J., 2012, vol. 9: 22. doi: 10.1186/1743-422X-9-22

18. Varnum S.M., Streblow D.N., Monroe M.E., Smith P., Auberry K.J., Pasa-Tolic L., Wang D., Camp D.G. 2nd, Rodland K., Wiley S., Britt W., Shenk T., Smith R.D., Nelson J.A. Identification of proteins in human cytomegalovirus (HCMV) particles: the HCMV proteome. J. Virol., 2004, vol. 78, no. 20, pp. 10960-10966. doi: 10.1128/JVI.78.20.10960-10966.2004

ЦМВ при беременности: что мне нужно знать?

Цитомегаловирус (ЦМВ) — самый распространенный вирус, о котором большинство людей никогда не слышали! Это наиболее распространенный врожденный вирус, и примерно 1 из 100–150 новорожденных рождается врожденно инфицированным ЦМВ. Часто встречается как у детей, так и у взрослых. От 50 до 80 процентов женщин детородного возраста заразились ЦМВ, а от 1 до 5 процентов беременных женщин заразятся ЦМВ впервые во время беременности. Большинство ЦМВ-инфекций протекают «тихо» и безвредно, но у беременных женщин ЦМВ может передаваться плоду, иногда с разрушительными последствиями для будущего ребенка и новорожденного.Таким образом, если вы беременны или знаете кого-то из беременных, важно «осознавать цитомегаловирус» и «опасаться цитомегаловируса». Беременным женщинам следует обсудить ЦМВ со своим акушером. Тестирование на ЦМВ-инфекцию — это простой анализ крови. И есть способы вмешательства, которые могут помочь. К сожалению, исследования показали, что большинство женщин детородного возраста и, что удивительно, многие акушеры не осведомлены о последних достижениях в лечении ЦМВ-инфекции во время беременности. Поскольку многие вопросы, которые я получил из своего первого сообщения в блоге , касались ЦМВ-инфекции во время беременности, я решила опубликовать некоторую основную информацию, которая, надеюсь, вы найдете полезной:

Каковы признаки и симптомы ЦМВ во время беременности?

Большинство ЦМВ-инфекций у беременных женщин протекают бессимптомно.Когда симптомы действительно возникают, чаще всего это лихорадка, боль в горле, увеличение лимфатических узлов и сильная усталость. В редких случаях может возникнуть сыпь, кашель или диарея. Эти симптомы не специфичны для ЦМВ-инфекции и могут быть вызваны другими состояниями. И, к сожалению, часто беременная женщина впервые узнает о ЦМВ, когда у нее появляется ребенок с диагнозом врожденная ЦМВ-инфекция. Поэтому для точной диагностики ЦМВ-инфекции во время беременности необходимы анализы крови.

Распространена ли ЦМВ-инфекция при беременности?

Приблизительно 1–4% всех беременных женщин будут инфицированы первичной ЦМВ-инфекцией во время беременности.Если вы работаете в учреждении по уходу за детьми, риск увеличивается примерно до 10%. Если у вас дома есть ребенок, который активно инфицирован ЦМВ и выделяет ЦМВ в слюне или моче, риск еще выше, приближаясь к 50% в некоторых исследованиях.

Каков риск для моего ребенка, если я заразился ЦМВ-инфекцией во время беременности?

ЦМВ-инфекция во время беременности может быть первичной (первая инфекция ЦМВ) или рецидивирующей (инфекция вторым штаммом ЦМВ или реактивация вашего собственного штамма ЦМВ).Примерно 40% женщин, перенесших первичную ЦМВ-инфекцию во время беременности, передадут ЦМВ-инфекцию своему ребенку, а примерно 60% — нет. Причина, по которой некоторые женщины передают ЦМВ своему ребенку, а некоторые — нет, неизвестна. Большинство детей, рожденных врожденно инфицированными ЦМВ, при рождении кажутся нормальными. Тем не менее, примерно у 10% детей, рожденных врожденно инфицированными в результате первичной ЦМВ-инфекции их матери во время беременности, симптомы будут проявляться еще в утробе матери или при рождении.Новорожденные с симптомами врожденного ЦМВ-заболевания при рождении могут иметь множество признаков и симптомов во многих системах органов, а также могут иметь длительную инвалидность в отношении слуха, зрения, познания и двигательного развития. У некоторых детей с тяжелым врожденным ЦМВ-заболеванием врожденная ЦМВ-инфекция приводит к летальному исходу. Следовательно, первичная ЦМВ-инфекция у матери может нести значительный риск для будущего ребенка. Женщины, которые перенесли рецидивирующую инфекцию ЦМВ , также могут передать ЦМВ своему ребенку, но частота случаев намного, намного ниже (0.1% или меньше), чем после первичной ЦМВ-инфекции (40%), и серьезные симптомы редко возникают у плода или новорожденного, рожденного врожденно инфицированными в результате рецидивирующей инфекции матери .

Как сделать тест на ЦМВ во время беременности?

Тестирование на ЦМВ-инфекцию представляет собой простой анализ крови, называемый CMV IgG-антителами . Он определит, была ли у беременной ЦМВ. Положительный результат указывает на текущую или прошлую инфекцию ЦМВ.Второй анализ крови, называемый CMV IgM antibody , поможет определить, является ли ЦМВ-инфекция текущей или прошлой. В случае положительного результата инфекция может быть текущей, обычно в течение последних 4 месяцев. ЦМВ IgM-антитело у некоторых женщин может оставаться положительным более 4 месяцев (иногда до года и более) или может быть ложноположительным результатом. Таким образом, может быть проведен третий тест на антитела к ЦМВ, который называется Индекс авидности IgG к ЦМВ . низкий индекс авидности IgG CMV указывает на то, что первичная инфекция CMV произошла менее чем за 4 месяца до анализа крови, а высокий индекс авидности IgG указывает, что инфекция CMV произошла 4 месяца назад или дольше.Тест на авидность IgG к CMV не рекомендуется, если антитела IgM к CMV отрицательны, и тест нельзя проводить, если антитела IgG к CMV отрицательны.

Что делать, если я заразился ЦМВ во время беременности?

Если вы заразились ЦМВ-инфекцией во время беременности, ваш акушер должен внимательно следить за ростом и развитием вашего плода с помощью серийных ультразвуковых исследований плода и других тестов. Кроме того, может быть показана консультация специалиста по материнско-фетальной медицине или акушерства высокого риска, особенно если эффекты in utero CMV наблюдаются у плода.В павильоне для женщин Техасской детской больницы на этом веб-сайте можно запросить консультацию специалиста по медицине плода. Пренатальное лечение беременной матери гипериммунным глобулином ЦМВ (антитело, обогащенное ЦМВ) может снизить передачу ЦМВ к плоду и уменьшить или обратить некоторые эффекты ЦМВ на плод. Если вы перенесли первичную ЦМВ-инфекцию во время беременности, проконсультируйтесь со своим акушером или специалистом по материнско-фетальной медицине о том, подходит ли лечение гипериммунным глобулином ЦМВ для вас и вашего ребенка, а также для наблюдения за здоровьем и благополучием вашего ребенка. ребенок еще в утробе матери.Национальное рандомизированное клиническое исследование также проводится в Соединенных Штатах (а также, возможно, в других странах Европы) для более тщательного изучения потенциальных преимуществ этого лечения. Более подробная информация также доступна на https://www.clinicaltrials.gov. Что делать, если я беременна и антитела к ЦМВ отрицательны? Если у вас отрицательные антитела к CMV IgG и CMV IgM и вы беременны, значит, у вас никогда не было инфекции CMV, и поэтому вы уязвимы для заражения CMV впервые во время беременности.Зная, что вы являетесь отрицательным по ЦМВ, и зная о мерах предосторожности в отношении ЦМВ, рекомендованных в моем первом сообщении в блоге, вы можете предпринять шаги для снижения риска заражения ЦМВ во время беременности.

Тест

CMV — информация, подготовка, результаты тестов и многое другое

что такое CMV (цитомегаловирус)?

Цитомегаловирус, также известный как вирус герпеса человека 5, является распространенным вирусом, который может передаваться при прямом контакте с жидкостями организма (моча, кровь, сперма, грудное молоко и вагинальные выделения). В отношении вируса ЦМВ нужно помнить о том, что он может оставаться в организме в спящем состоянии в течение длительного времени.Таким образом, носители болезни могут не знать, что у них она есть. Однако могут появиться определенные симптомы ЦМВ. Некоторые из положительных по ЦМВ симптомов включают истощение, боль в горле, боли в суставах, болезненность мышц, низкий аппетит, лихорадку и ночную потливость. Есть две основные уязвимые группы, которые могут пострадать от ЦМВ-инфекции. Младенцы заражаются ЦМВ от матери. Лица, прошедшие курс иммунорепрессивного лечения для облегчения трансплантации органов, также могут страдать от серьезных симптомов и последствий ЦМВ-инфекции.

о тесте CMV

Титр CMV — это тест для проверки уровня инфекции в вашем организме. Тест на антитела к ЦМВ проводится на образце крови. Есть два типа антител, которые вырабатываются как триггерная реакция на инфекцию ЦМВ. Основываясь на уровнях этих антител, IgM и IgG, технические специалисты могут установить серьезность вашей инфекции.

что означает положительный результат cmv igg?

Если наблюдается постоянное повышение уровня IgG к ЦМВ, это показатель активной инфекции.Положительное значение IgG означает, что человек недавно перенес инфекцию ЦМВ. Метод определения IgG — это проверенный метод, который используется для определения наличия многих других заболеваний, включая лихорадку денге. Для лечения с положительным результатом на CMV IgG рекомендуется обратиться к врачу. В большинстве случаев вирус находится в спящем состоянии, поэтому никакого лечения не требуется. Профилактика — это противовирусное лечение, которое рекомендуется взрослым людям с высоким риском заражения ЦМВ-инфекцией.

Низкое количество IgM может означать, что иммунная система не реагирует на инфекцию адекватным образом, или может указывать на то, что заболевание, от которого может страдать человек, не является ЦМВ.

cmv нормальный диапазон вирусной нагрузки

IgG к нормальному диапазону CMV составляет от 620 до 1400 мг / дл. Если показание выше этого порога, вам нужно будет проконсультироваться с врачом, чтобы предотвратить любые нежелательные симптомы или инфекции. Это действие особенно актуально для беременных мам или родителей, планирующих завести ребенка.

когда мы вам понадобимся?

Беременные женщины обязательно должны сдать анализ крови на ЦМВ, поскольку у ребенка могут быть врожденные патологии. ЦМВ-инфекция может быть опасной для людей со слабой иммунной системой.Это может привести к серьезным заболеваниям, таким как гепатит, энцефалит, пневмония и колит.

Тест на ЦМВ должен проводиться парами, планирующими создать семью, а также тем, кто постоянно испытывает эти симптомы. Если ваш диагноз ЦМВ положительный, то противовирусное лечение является наиболее эффективной мерой.

чем мы можем помочь?

В наших лабораториях используется самое современное медицинское испытательное оборудование, во главе которого стоят опытные техники.Вы можете пройти комплексный анализ на ЦМВ и проконсультироваться с опытным врачом, который поможет вам соответствующим образом. Стоимость теста CMV является доступной, а своевременное действие сэкономит вам больше средств и сэкономит физический дискомфорт.

резюме

CMV — это то, что нельзя игнорировать. Несмотря на то, что это обычный вирус, который присутствует на всю жизнь у многих людей, он может вызвать серьезные осложнения у новорожденных и детей с ослабленной иммунной системой, поскольку они перенесли трансплантацию органов. Прохождение теста на ЦМВ — очень разумное долгосрочное решение для здоровья.

Цитомегаловирус — Лабораторные тесты онлайн AU

Как он используется?

Тестирование на цитомегаловирус (ЦМВ) используется для определения наличия у человека активной инфекции. Иногда это может быть заказано, чтобы помочь определить, было ли у кого-то предыдущее заражение.

Существует несколько различных методов выявления ЦМВ-инфекции:

Тестирование антител
Тесты на антитела могут использоваться, чтобы определить, подвергался ли кто-либо недавний или прошлый контакт.Есть два типа ЦМВ, которые продуцируются в ответ на ЦМВ-инфекцию, и один или оба могут быть обнаружены в крови.

  • Антитела IgM первыми вырабатываются организмом в ответ на инфекцию ЦМВ. Они присутствуют у большинства людей в течение недели или двух после первоначального воздействия. Продукция IgM-антител на короткое время повышается, а затем обычно снижается. Через несколько месяцев уровень антител IgM к ЦМВ обычно падает ниже определяемого уровня. Дополнительные антитела IgM образуются при реактивации ЦМВ у человека с ослабленным иммунитетом..
  • IgG-антитела вырабатываются организмом через несколько недель после первичной инфекции CMV и обеспечивают защиту от первичных инфекций. Уровни IgG повышаются во время активной инфекции, затем стабилизируются, когда инфекция ЦМВ разрешается и вирус становится неактивным. После того, как человек подвергся воздействию ЦМВ, у него на всю оставшуюся жизнь останется некоторое измеримое количество антител IgG к ЦМВ. Тестирование на антитела IgG к ЦМВ может использоваться вместе с тестом на IgM, чтобы подтвердить наличие недавней или предыдущей инфекции ЦМВ.
  • Иногда антитела IgM к ЦМВ остаются положительными в течение длительных периодов (много месяцев) в сочетании с положительными антителами IgG. Может быть важно определить, когда произошла первичная инфекция, например, в случае беременной женщины, с риском врожденной инфекции у плода. В этой ситуации может быть проведен другой тест, называемый авидностью IgG, чтобы определить, произошла ли инфекция в течение последних 3-4 месяцев.

Тестирование на антитела к ЦМВ может использоваться для определения иммунитета к первичным инфекциям ЦМВ у людей до трансплантации органов или костного мозга, а также у людей, у которых диагностирован ВИЧ / СПИД.Поскольку ЦМВ-инфекция широко распространена и вызывает мало проблем у людей со здоровой иммунной системой, скрининг населения в целом проводится редко.

Тестирование на антитела и обнаружение вируса ЦМВ могут использоваться для диагностики первичной ЦМВ-инфекции у молодых людей, беременных женщин и у некоторых людей с гриппоподобными или мононуклеозоподобными симптомами. Сравнивая отсутствие или присутствие антител IgG и IgM в одном образце или количество антител, присутствующих в образцах, собранных в разные дни, врач может различить активный и ЦМВ.

Тестирование на антитела IgM может использоваться для выявления инфекции у новорожденного, обычно в сочетании с тестами, которые обнаруживают вирус напрямую.

Обнаружение вирусов
Обнаружение вирусов включает определение наличия ЦМВ в образце крови, жидкости или ткани. Это может быть сделано либо вирусом, либо обнаружением генетического материала вируса (CMV) с помощью.

Вирусная культура — традиционный метод обнаружения вирусов. Присутствие вируса (положительные культуры) часто можно определить всего за 1-2 дня, но культуры, отрицательные по вирусу, должны храниться в течение 3 недель, чтобы подтвердить отсутствие ЦМВ, поскольку вирус может присутствовать в очень низком количестве. числа в исходном образце и / или штамме ЦМВ могут расти медленно.

Молекулярные методы часто используются для обнаружения ЦМВ в образце человека. Тестирование может заключаться в определении наличия или отсутствия ЦМВ или измерении количества присутствующего вируса.

Выбор тестов и собранных образцов зависит от возраста человека, его общего состояния здоровья и симптомов, а также от клинических данных врача и подозрений на поражение органов. Например, моча или слюна новорожденного могут быть исследованы с помощью ПЦР или посевов для выявления ЦМВ, в то время как беременная женщина может пройти анализ крови на IgG и IgM (+/- авидность IgG), чтобы определить наличие антител и различить текущие первичные инфекция и предыдущая инфекция.Для диагностики врожденной инфекции необходимо провести тесты, которые обнаруживают вирус напрямую, чтобы подтвердить диагноз, и эти образцы должны быть собраны в течение 21 дня после рождения для подтверждения врожденной, а не послеродовой инфекции. Иногда можно проверить на вирусы регулярно собираемую карту скринингового обследования новорожденных, чтобы поставить этот диагноз ретроспективно.

Людей с ослабленным иммунитетом и активным ЦМВ можно контролировать с помощью различных тестов на ЦМВ. Часто врачи хотят провести количественный анализ вируса (ПЦР), чтобы отслеживать количество присутствующего вируса ().Они могут использовать количественный тест, чтобы отслеживать реакцию человека на противовирусную терапию.

Когда это требуется?

ЦМВ тесты могут быть заказаны вместе с тестами на грипп и ВЭБ (вирус Эпштейна-Барра), когда человек болеет гриппом, похожим на железистую лихорадку, например:

  • Усталость, слабость
  • Боль в горле
  • Увеличение лимфатических узлов
  • Лихорадка
  • Головная боль
  • Мышечные боли

Другие менее распространенные, но более серьезные симптомы включают воспаление легких, глаз, печени, селезенки и / или пищеварительного тракта.

Один или несколько тестов на ЦМВ могут быть назначены через определенные промежутки времени, когда врач контролирует эффективность противовирусной терапии.

ЦМВ-анализ может быть проведен у новорожденного с желтухой, анемией, низким уровнем тромбоцитов, увеличенной селезенкой и / или печенью и маленькой головой; или у младенца с проблемами слуха и зрения, пневмонией, судорогами и / или признаками задержки умственного развития.

Если человек является кандидатом на трансплантацию органа или костного мозга, тестирование на антитела к ЦМВ может быть назначено в качестве скринингового теста, чтобы определить, подвергался ли человек воздействию ЦМВ в прошлом.

Что означает результат теста?

Следует проявлять осторожность при интерпретации результатов тестирования CMV. Врач оценивает результаты в сочетании с клиническими данными, включая и. Иногда бывает трудно отличить активную или реактивированную ЦМВ-инфекцию. Это связано с несколькими причинами, в том числе:

  • Здоровый человек, который когда-то был инфицирован ЦМВ, будет продолжать нести вирус. ЦМВ может реактивироваться периодически, часто субклинически, выделяя небольшое количество вируса в жидкости организма, но не вызывая симптомов.
  • У человека может не быть сильной реакции антител на ЦМВ-инфекцию — их уровни и могут быть ниже ожидаемых, даже если у него активный случай ЦМВ.
  • Вирус может не присутствовать в достаточном количестве в исследуемой жидкости или ткани, чтобы его можно было обнаружить.

Тестирование антител
Если у человека с симптомами присутствуют как IgG, так и IgM к ЦМВ, то наиболее вероятно, что он либо недавно впервые подвергся воздействию ЦМВ, либо что предыдущая инфекция ЦМВ была реактивирована.Это можно подтвердить повторным измерением уровня IgG через 2–3 недели. Не так важен высокий уровень IgG, как его повышающийся. Если между первым и вторым образцом наблюдается 4-кратное увеличение уровня IgG, значит, у человека активная ЦМВ-инфекция (первичная или реактивированная).

Другой тест, который можно заказать в этих условиях, — это тест на авидность IgG. Этот тест измеряет устойчивость человеческих антител IgG к ЦМВ, так как эти антитела со временем становятся более «активными» или прочно связывающимися.Таким образом, низкая авидность указывает на недавнюю инфекцию, а высокая авидность указывает на инфекцию, которая произошла до или примерно за 4 месяца до этого.

Если присутствует только IgM, возможно, человек был инфицирован совсем недавно. Если у кого-то есть симптомы, но у него низкие или неопределяемые уровни IgG и / или IgM, это может означать, что у него либо состояние, отличное от ЦМВ, либо он не реагирует нормально — не вырабатывает адекватное количество антител, даже если ЦМВ присутствует.

В следующей таблице приведены возможные результаты тестирования на антитела:

ЦМВ, IgM

CMV, IgG

Возможная интерпретация

отрицательный

отрицательный

 Нет текущей или предшествующей инфекции; иммунитета нет, человек подвержен первичному заражению.Симптомы, вызванные другой причиной
ИЛИ очень раннее инфицирование до образования антител
ИЛИ иммунная система не может производить достаточное количество антител (с ослабленным иммунитетом)

Положительно

отрицательный

 Недавняя активная первичная инфекция
ИЛИ симптомы, вызванные другой причиной, и это ложноположительный результат

* Результат НЕ является диагностическим признаком первичного заражения

Положительный

Положительный

 Вероятно активная первичная или реактивированная латентная инфекция (если есть четырехкратное увеличение между первым образцом и другим, собранным позже (и образцами))
ИЛИ человек повторно подвергся воздействию CMV
ИЛИ реактивация латентного CMV
Возможный пролонгированный положительный IgM — можно рассмотреть тест на авидность IgG

отрицательный

Положительный

Прошлая экспозиция; скрытая инфекция

Обнаружение вирусов
Если у человека есть симптомы и культура или культура положительна на цитомегаловирус, то у человека, вероятно, есть активная инфекция ЦМВ.Если результат ПЦР отрицательный, то симптомы у человека могут быть вызваны другой причиной или количество вируса ЦМВ в образце слишком мало для обнаружения. Высокие уровни вирусной ДНК, как правило, указывают на более инвазивную инфекцию, сопровождающуюся серьезными симптомами, в то время как низкие уровни указывают на инфекцию ЦМВ, обычно без симптомов или легкую. Как и при посеве, отрицательные результаты теста ПЦР не исключают инфекцию ЦМВ — вирус может присутствовать в очень небольшом количестве или может не присутствовать в исследуемом образце тела, но в другом участке тела.

При использовании для мониторинга эффективности лечения уменьшение отражает ответ на противовирусное лечение. Уровни, которые не снижаются в ответ на противовирусное лечение, могут отражать устойчивость к применяемой терапии.

Что еще мне следует знать?

CMV — одно из условий, традиционно включенных в испытательную панель «ФАКЕЛ». Эта группа тестов предназначена для выявления группы инфекционных заболеваний, которые могут вызывать заболевание у беременных женщин и могут вызывать врожденные дефекты у их новорожденных.TORCH — это аббревиатура от: Toxoplasmosis, Other (обычно относится к сифилису), Rubella, Cytomegalovirus и Herpes simplex virus.

Когда необходимо переливание крови, некоторые пациенты, например, ЦМВ-отрицательные пациенты с ВИЧ / СПИДом и ЦМВ-отрицательные кандидаты на трансплантацию сердца / легких, должны получать клеточные продукты крови, которые оказались отрицательными на антитела к ЦМВ (так называемые ЦМВ-серонегативные продукты крови. ).

границ | Защитный цитомегаловирус (CMV) -специфический Т-клеточный иммунитет часто встречается у пациентов с трансплантатом почки без сывороточных антител против CMV

Введение

Получатели трансплантата почки (КТ) подвергаются повышенному риску инфекций после трансплантации, одной из основных угроз является цитомегаловирус (ЦМВ).Первичная инфекция или реактивация ЦМВ может вызвать виремию и может привести к тяжелому ЦМВ-заболеванию с поражением органов (1). Пациенты с повышенным риском инфицирования ЦМВ после трансплантации почки получают либо профилактическую, либо упреждающую противовирусную терапию (валганцикловир) (2). Классификация риска ЦМВ-инфекции до КТ основана на наличии у пациента анти-ЦМВ-иммуноглобулина G (IgG) в сочетании с серостатусом ЦМВ донора почки. Иммунитет к вирусам, например, к ЦМВ, зависит от адекватной помощи со стороны ЦМВ-специфичных Т-лимфоцитов CD4 + , обеспечивающих выработку нейтрализующих антител ЦМВ-специфическими В-клетками / плазматическими бластами и эффективными цитотоксическими Т-клетками CD8 + (ЦТЛ). ) ответы (3–5).Отсутствие нейтрализующих антител не обязательно означает, что антиген не встречался раньше, поскольку клеточный иммунитет может все еще присутствовать. Кроме того, известно, что у пациентов с терминальной стадией почечной недостаточности (ТПН) защитный гуморальный иммунитет не поддерживается и часто не достигается (6, 7). Поэтому несколько групп предложили включить оценку клеточного иммунитета против ЦМВ в стратегию оценки риска для более точной оценки сенсибилизации перед трансплантацией (8–10).Данных о том, защищает ли ограниченный клеточный иммунитет от цитомегаловируса после трансплантации почки, недостаточно, и нет подробных сведений о том, какие субпопуляции Т-клеток участвуют в достаточной защите, поскольку клеточный иммунитет в основном оценивается с помощью ELISpot (11). .

Дифференциация Т-клеток может быть оценена с использованием экспрессии CD45RO или CD45RA и хемокинового рецептора CCR7, который способен идентифицировать наивные Т-клетки и различные подмножества Т-клеток памяти, т.е.е., центральная память (CM), эффекторная память (EM) и, наконец, терминально дифференцированная EM CD45RA + (EMRA) (12). Это сопровождается потерей костимулирующего маркера CD28. В частности, эффективный CMV-специфический Т-клеточный ответ дает множество высокодифференцированных CD28 нулевых Т-клеток (13, 14). Как мы показали ранее, этот Т-клеточный ответ усиливает иммунологическое старение Т-клеток, наблюдаемое при циркуляции крови у пациентов с ТПН, что приводит к сдвигу в сторону более дифференцированных Т-клеток памяти и усилению истощения теломер (14, 15).Неизвестно, влияет ли наличие ограниченного клеточного иммунитета к ЦМВ на характеристики старения Т-клеток у пациентов с ТПН.

Целью данного исследования является оценка ЦМВ-специфического Т-клеточного иммунитета, включая стадию дифференцировки ЦМВ-специфических Т-клеток, и определение его клинической значимости в отношении защиты от ЦМВ-виремии после трансплантации в когорте ЦМВ-серонегативных пациентов. Кроме того, было оценено влияние на параметры старения Т-клеток.

Материалы и методы

Исследуемая популяция

В когорте стабильных ЦМВ-серонегативных и, в качестве контроля, соответствующих по возрасту и полу ЦМВ-серопозитивных реципиентов почки от ЦМВ-серопозитивного донора (D + / R — и D + / R + соответственно), ЦМВ-специфический иммунитет оценивался перед трансплантацией и был связан с ЦМВ-виремией после КТ.Большинство пациентов (86%) получали индукционную терапию базиликсимабом (Simulect ® , Novartis). Стандартная тройная иммуносупрессия, проводимая после трансплантации, включала такролимус (Prograf ® , Astellas Pharma), микофенолятмофетил (Cellcept ® , Roche) и преднизолон (первые 3 месяца после КТ), первый назначался 93% и последние два — всем пациентам. Первые 6 месяцев после трансплантации проводилась противовирусная профилактика валганцикловиром 450 мг каждые сутки.d. был назначен и при необходимости скорректирован с учетом нарушения функции почек. Характеристики пациентов перечислены в таблице 1. Все пациенты дали письменное информированное согласие на участие в этом исследовании. Исследование было одобрено Медицинским этическим комитетом Erasmus MC (номер METC 2010-080) и проводилось в соответствии с Хельсинкской декларацией и Стамбульской декларацией.

Таблица 1 . Демографические и клинические характеристики исследуемой популяции.

Обнаружение CMV-виремии и антител, специфичных к CMV

Сывороточные IgG-антитела к CMV [выраженные в условных единицах / мл (AU / мл)] измеряли с помощью иммуноферментного анализа (Biomerieux, VIDAS, Lyon, France).Результат ≥6 AU / мл считался положительным. Пациенты наблюдались с интервалом в 3 месяца в течение первого года после трансплантации на предмет наличия ДНК ЦМВ. Диагноз эпизода ЦМВ-виремии основывался на наличии копий [выраженных в международных единицах / мл (МЕ / мл)] ДНК ЦМВ в крови и установлен с помощью количественной полимеразной цепной реакции в отделе вирусологии Erasmus MC. Исход> 50 МЕ / мл указывал на цитомегаловирусную виремию.

Выделение периферических мононуклеарных клеток (PBMC)

Перед KT, PBMC были выделены, как подробно описано ранее (16), из гепаринизированных образцов крови, взятых у CMV-серонегативных и CMV-серопозитивных пациентов, и хранились в количестве 10 миллионов PBMC на флакон при -150 ° C до дальнейшего использования.

Обнаружение ЦМВ-специфических CD137-экспрессирующих цитокин-продуцирующих Т-клеток

Периферические мононуклеарные клетки 28 CMV-серонегативных и 14 CMV-серопозитивных пациентов размораживали, оставляли на 8 часов при 37 ° C и стимулировали (5 × 10 6 PBMC / мл) в RPMI-1640, содержащем глутамакс (GibcoBRL, Пейсли, Шотландия) с добавлением 100 МЕ / мл пенициллина, 100 мкг / мл стрептомицина и 10% инактивированной нагреванием объединенной сыворотки человека, далее называемой стандартной культуральной средой. Стимуляцию проводили в полистирольных пробирках (BD Pharmingen, Erembodegem, Бельгия) в присутствии костимуляции CD49d (1 мкг / мл; BD) без (фона) или со смесью перекрывающихся пулов пептидов, покрывающих целые pp65 и IE-1. белок ЦМВ (1 мкг / мл; PepTivator-CMV pp65 и IE-1; Miltenyi Biotec GmbH, Бергиш-Гладбах, Германия) и брефельдин А (Golgiplug; BD Pharmingen) в течение 12 часов.Этот анализ внутриклеточного окрашивания цитокинов облегчает детальную характеристику CMV-специфических CD4 + , а также CD8 + Т-клеток, поскольку они могут быть идентифицированы по de novo экспрессии CD137 в комбинации с эффекторными молекулами (17). В качестве положительного контроля PBMC 10 CMV-серонегативных и 5 CMV-серопозитивных пациентов стимулировали комбинацией форболмиристата ацетата (PMA; 50 нг / мл; Sigma Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США) и иономицина (1 мкг). / мл; Sigma Aldrich) и обрабатывали, как описано ранее.

Затем было проведено окрашивание поверхности для идентификации наивных (CD45RO — CCR7 + ) подмножеств Т-клеток памяти (12). CM Т-клетки — это CD45RO + CCR7 + , эффекторная память (EM) CD45RO + CCR7 — и терминально дифференцированная эффекторная память (EMRA) CD45RO — CCR7 —. Кроме того, по CD28 были идентифицированы все менее и более дифференцированные субпопуляции Т-клеток (т.е. менее дифференцированные, являющиеся CD28 + , и более дифференцированные, без CD28, обозначаемые как CD28 нулевые ).Были использованы следующие моноклональные антитела: меченные бриллиантовым фиолетовым (BV) -510 анти-CD4 (Biolegend Europe BV, Uithoorn, Нидерланды), меченные тихоокеанским синим анти-CD45RO (Biolegend), аллофикоцианин-Cy7 (APC-Cy7) — меченый анти-CD8 (BD, Erembodegem, Бельгия), меченный перидинином хлорофилл-Cy5.5 (PerCP-Cy5.5) анти-CD28 (BD) и меченный фикоэритрин-Cy7 (PE) -Cy7 анти-CCR7 (BD ). После фиксации и пермеабилизации клетки окрашивали внутриклеточно, используя APC-меченные анти-CD137 (BD) и PE-меченные анти-IFNγ (BD Pharmingen).Клетки, продуцирующие ИЛ-2, оценивали только у части протестированных пациентов, то есть у 12 ЦМВ-серонегативных и 6 ЦМВ-серопозитивных пациентов, путем совместного внутриклеточного окрашивания с использованием меченных флуоресцеином изотиоцианатом анти-ИЛ-2 (BD). Образцы были измерены на FACSCanto II (BD Pharmingen), чтобы получить 0,5–1 × 10 6 Т-клеток, и проанализированы с использованием программного обеспечения FACSDiva версии 6.1.2 (BD). Стратегия стробирования для идентификации ЦМВ-специфичных Т-клеток CD137 + CD4 + в различных подгруппах и в сочетании с производством цитокинов показана на рисунке S1 в дополнительных материалах, аналогичный подход применялся для Т-клеток CD8 + .Медиана (диапазон IQ) фон CD137-экспрессирующих CD4 + Т-клеток всех образцов составляла 0,05% (0,03–0,07%), тогда как фон CD137-экспрессирующих CD8 + Т-клеток был выше, составляя 0,44% ( 0,23–1,02%). Среднее фоновое значение для CD137 + IFNγ + CD4 + и CD8 + и CD137 + IL-2 + CD4 + Т-клетки всех образцов составляли 0,01% (0,01–0,02%). ), 0,04% (0–0,09%) и 0,01% (0,01–0,01%) соответственно.Большая часть фонового сигнала в Т-клетках CD4 + наблюдалась в клетках, коэкспрессирующих CD28 и обладающих фенотипом CM / EM, тогда как сигнал, наблюдаемый для Т-клеток CD8 + , преимущественно не обладал CD28 и фенотипом EM / EMRA. Поскольку частоты, полученные для различных параметров, значительно различались у разных пациентов, мы вычли нестимулированное значение для каждого пациента из значения после стимуляции ЦМВ-пептидом, чтобы рассчитать чистый сигнал, как показано в результатах. Положительный определяемый CMV-специфический ответ был идентифицирован, если чистый ответ был больше 0.Только детектируемые CD4 + и CD8 + CD137 + CMV-специфические Т-клеточные ответы были проанализированы более подробно в отношении продукции цитокинов и фенотипических аспектов.

Обнаружение CMV-специфических пролиферирующих Т-клеток

Периферические мононуклеарные клетки 12 CMV-серонегативных и 6 CMV-серопозитивных пациентов размораживали и метили сукцинимидиловым эфиром диацетата карбоксифлуоресцеина в соответствии с инструкциями производителя (CFSE; Molecular Probes ® , Нидерланды) и затем стимулировали в трех экземплярах в стандартной культуральной среде. при 5 × 10 4 / лунка (96-луночный планшет с круглым дном) без или с лизатом CMV (30 мкг / мл; Microbix Biosystems Inc., ON, Канада) или смесью перекрывающихся пулов пептидов, покрывающих весь pp65 и белок IE-1 CMV (оба в конечной концентрации 1 мкг / мл; PepTivator-CMV pp65 и IE-1; Miltenyi Biotec). Стимуляция CMV-лизатом может позволить охарактеризовать общий пул CMV-специфических CD4 + T-клеток, поскольку перекрывающиеся пептидные пулы покрывают только два (хотя и доминирующих) пептида белка CMV. Пролиферацию CMV-специфических Т-клеток CD8 + анализировали только после стимуляции перекрывающимися пулами пептидов pp65 и IE-1, а не целым лизатом CMV из-за их ограничения в отношении длины (количества аминокислот) пептидов, представленных в контекст HLA класса I.Через 6 дней клетки собирали, окрашивали с использованием моноклональных антител, направленных против CD3, CD4, CD8 и CD28 (снова для выявления менее дифференцированных по сравнению с более дифференцированными субпопуляциями среди пролиферирующих Т-клеток), и мертвые клетки исключали с использованием 7-аминоактиномицина D. Образцы были измерены на FACSCanto II (BD) и проанализированы с использованием программного обеспечения FACS Diva версии 6.1.2 (BD), процентное содержание CMV-специфичных пролиферирующих Т-клеток вычислялось путем вычитания процентов Т-клеток, пролиферирующих в отсутствие этих стимулов.Медиана (диапазон IQ) пролиферирующих Т-лимфоцитов CD4 + и CD8 + в отсутствие стимула составила 0,83% (0,50–2,48%) и 1,42% (0,69–3,36%) соответственно. Положительный обнаруживаемый ответ был идентифицирован, если чистый ответ был больше 0.

Общие и CMV-специфические IgG-секретирующие клетки (ASC)

Периферические мононуклеарные клетки 11 CMV-серонегативных и в качестве положительного контроля 4 CMV-серопозитивных пациентов размораживали и затем стимулировали при плотности 2 × 10 6 / мл в течение 5 дней с R848 и рекомбинантным IL-2, согласно к инструкции производителя (U-Cytech BV, Утрехт, Нидерланды).На 4 день лунки 96-луночного планшета покрывали в течение ночи при 4 ° C в соответствии с инструкциями производителя. Покрытие состояло либо из антител против человеческого IgG для подсчета общего IgG ASC, либо из лизата CMV (30 мкг / мл Microbix Biosystems Inc., ON, Канада) для подсчета CMV-специфических IgG ASC. После стимуляции клетки собирали, подсчитывали и добавляли в покрытый планшет ELISpot в различных концентрациях, каждую в трех экземплярах. После 7 ч инкубации (37 ° C, 5% CO 2 ) клетки лизировали и смывали дебрис с использованием PBS / 0.05% Твин-20. Затем лунки планшета ELISpot инкубировали в течение 1 ч при 37 ° C с биотинилированным антителом против человеческого IgG (обнаружение) и после промывки с последующей инкубацией с phi-меченным антителом против биотина (ГАМК) в течение 1 ч при 37 ° C. С. Наконец, ASC визуализировали после процедуры промывки с использованием активационного раствора (U-Cytech BV), что приводило к образованию осадка серебра при инкубации в темноте при комнатной температуре. Развитие окраски останавливали с помощью диионизированной воды и подсчитывали пятна с помощью считывающего устройства ELISpot (Bioreader ® -600V, BIO-SYS GmbH, Карбен, Германия).CMV-IgG ASC выражаются как количество / 10 5 клеток и частота общего IgG ASC.

Помимо анализа ASC, образец до и после стимуляции анализировали на образование бластов В-клеток с помощью проточной цитометрии. Использовали следующую панель моноклональных антител: меченные BV510 анти-CD19 (Biolegend), меченные BV421 анти-CD38 (BD) и меченные PE-Cy7 анти-CD27 (eBioscience). Плазменные бласты были CD19 + CD38 high CD27 + .

Абсолютные числа CD4

+ и CD8 + Т-клеток и статус дифференцировки Т-клеток с помощью проточной цитометрии

Абсолютное количество субпопуляций Т-клеток (18) и статус дифференцировки Т-клеток (19) определяли с использованием окрашивания цельной крови, как подробно описано ранее.

Анализ длины теломер

Относительную длину теломер CD4 + и CD8 + Т-клеток определяли с помощью флуоресцентной гибридизации Flow in situ (flow-FISH), как описано ранее (15, 20).

Статистический анализ

Статистический анализ был выполнен с использованием GraphPad Prism версии 5.01. Непараметрический тест Манна – Уитни U или критерий Краскела – Уоллиса с последующим апостериорным анализом (тест множественного сравнения Даннса).Категориальные переменные сравнивались с использованием точного критерия Фишера. Непараметрический коэффициент ранговой корреляции Спирмена (Ро Спирмена, R s) использовался для оценки связи между различными параметрами. P — значения <0,05 для двух сторон считались статистически значимыми.

Результаты

Характеристики исследуемой популяции

Демографические и клинические характеристики исследуемой популяции представлены в таблице 1. В это исследование были включены 28 ЦМВ-серонегативных и 14 сопоставимых по возрасту и полу пациентов с ЦМВ-серопозитивом.Обе группы были хорошо сопоставимы без существенных различий в клинических характеристиках. Приблизительно половина пациентов с ЦМВ-серонегативом по сравнению с ни одним из ЦМВ-серопозитивных пациентов не испытали ЦМВ-виремию в течение 12 месяцев после трансплантации ( P <0,01).

ЦМВ-серонегативные пациенты часто имеют ЦМВ-специфические Т-клетки

Цитомегаловирус-специфические CD4 + и CD8 + Т-клетки, идентифицированные по экспрессии CD137 при стимуляции пептидным пулом двух иммунодоминантных белков pp65 и IE-1 (CD137 + CD4 + и CD137 + CD8 + ) присутствовали у 16 ​​из 28 пациентов с серонегативным CMV.Медианы (диапазон IQ) положительных ответов составили 0,03% (0,01–0,11%) и 0,10% (0,03–0,18%) для CD4 + и CD8 + Т-клеток соответственно (рисунки 1A, C, черные точек). Положительная корреляция наблюдалась между уровнем CD4 + и CD8 + CMV-специфического Т-клеточного ответа у CMV-серонегативных пациентов ( R s = 0,50, P <0,05). Процент ЦМВ-специфичных CD137-положительных CD4 + и CD8 + Т-клеток (присутствующих у 14 и 11 из 14 серопозитивных по ЦМВ пациентов, соответственно) был значительным ( P <0.001) выше у CMV-серопозитивных пациентов и составили 0,61% (0,11–1,04%) и 1,45% (0,44–8,69%) (рисунки 1A, C, белые точки) соответственно.

Рисунок 1 . Цитомегаловирус (CMV) -специфические CD137-экспрессирующие и цитокин-продуцирующие Т-клетки. Периферические мононуклеарные клетки пациентов стимулировали в течение 12 часов в присутствии только брефельдина A и αCD49d или смесью перекрывающихся пулов пептидов ppp65 и IE-1. Затем клетки окрашивают поверхность и внутриклеточно для определения частот и фенотипических характеристик CMV-специфических CD137-экспрессирующих Т-клеток, а также тех, которые продуцируют цитокины.CMV-специфические CD137-экспрессирующие CD4 + (A) и CD8 + (C) Т-клетки, скорректированные на фон (только αCD49d), представлены как процент от общего количества CD4 + или CD8 + Т-клеток и нескорректированные значения устанавливаются на 100% и анализируются на CD4 + (B) или CD8 + (D) Т-клетки, коэкспрессирующие или лишенные CD28, а также различные наивные Т-клетки и Т подмножества ячеек. Аналогичный подход применяется для CMV-специфического CD137-экспрессирующего IFN-γ и IL-2-продуцирующего CD4 + [ (E, G) и рассечение в (F, H) ] и CD8 + [ (I) и рассечение на панели (J) ] Т-клеток, соответственно.Закрытые и открытые символы / столбцы обозначают ЦМВ-серонегативных (с обнаруживаемым ответом) и ЦМВ-серопозитивных пациентов, соответственно, а столбцы отображают медианы и межквартильный диапазон групп пациентов. * P <0,05; ** P <0,01, *** P <0,001.

Цитомегаловирус-специфичные CD137 + CD4 + и CD137 + CD8 + Т-клетки преимущественно имели фенотип памяти как у CMV-серопозитивных, так и у CMV-серонегативных пациентов.Однако значительно более высокий процент ( P <0,05) CD137 + CD4 + и CD137 + CD8 + Т-лимфоцитов у пациентов с серонегативным CMV имел наивный фенотип по сравнению с пациентами с серопозитивным CMV (рис. 1Б, Г соответственно). Никаких различий не наблюдалось при сравнении максимальной способности Т-клеток экспрессировать CD137 между CMV-серонегативными и CMV-серопозитивными пациентами при стимуляции PMA / иономицином (рисунки S2A, B в дополнительном материале).

ЦМВ-специфические Т-клетки у ЦМВ-серонегативных пациентов продуцируют IFNγ и IL-2

Затем были изучены наличие и распределение CMV-специфических Т-клеток, продуцирующих IFNγ и IL-2. У 13 из 28 ЦМВ-серонегативных пациентов присутствовали ЦМВ-специфические IFNγ + CD137 + CD4 + Т-клетки, и медиана (диапазон IQ) частот составила 0,01% (0,01–0,04%) против 0,58% ( 0,16–0,87%) для ЦМВ-серопозитивных пациентов, у которых у всех был ЦМВ-специфический IFNγ + CD137 + CD4 + Т-клетки (рис. 1E, P <0.001). У CMV-серонегативных пациентов примерно 37% CMV-специфичных CD137-экспрессирующих CD4 + Т-клеток продуцировали IFNγ по сравнению с 69% у CMV-серопозитивных пациентов ( P <0,05). IFNγ-продуцирующие CMV-специфические CD137 + CD4 + Т-клетки все ко-экспрессировали CD28, и аналогичные частоты присутствовали в подмножестве CM и EM у CMV-серонегативных пациентов. У CMV-серопозитивных пациентов наблюдался несколько более дифференцированный фенотип — 16% ( P <0.01) из этих клеток не хватало CD28, и 75% были классифицированы как Т-лимфоциты (рис. 1F).

У 12 CMV-серонегативных и 6 CMV-серопозитивных пациентов была оценена частота IL-2-продуцирующих CD4 + Т-клеток, специфичных для CMV, поскольку мы ранее показали, что они связаны с титрами анти-CMV IgG (6). ЦМВ-специфические CD137 + CD4 + ИЛ-2 + Т-клетки были обнаружены у 9 из 12 (75%) ЦМВ-серонегативных по сравнению со всеми ЦМВ-серопозитивными пациентами, и медиана (диапазон IQ) частот составила до 0.01% (0,01–0,01%) и 0,26% (0,01–0,87%) для ЦМВ-серонегативных и ЦМВ-серопозитивных пациентов ( P <0,05; Рисунок 1G). Сорок процентов CMV-специфичных CD137-экспрессирующих CD4 + Т-клеток у CMV-серонегативных пациентов продуцировали IL-2 по сравнению с 37% у CMV-серопозитивных пациентов. У CMV-серонегативных пациентов почти все IL-2-продуцирующие клетки коэкспрессировали CD28, в отличие от присутствия CD28 нулевых CMV-специфических IL-2-продуцирующих клеток (10%) в CMV-серопозитивной группе ( P <0.01; Рисунок 1H).

IFN-γ-продуцирующие CD137 + CD8 + Т-клетки были обнаружены у 11 из 28 (39%) CMV-серонегативных и 11 из 14 (79%) CMV-серопозитивных пациентов. Медиана (диапазон IQ) составляла 0,05% (0,01–0,12%) и 0,64% (0,22–1,90%) в общей популяции Т-лимфоцитов CD8 + для CMV-серонегативных и CMV-серопозитивных пациентов, соответственно (Рисунок 1I, P <0,01). Только 9% CD137-экспрессирующих CD8 + Т-клеток продуцировали IFNγ у CMV-серонегативных пациентов по сравнению с 36% CMV-серопозитивных пациентов ( P <0.01). Статус дифференцировки этих клеток был схожим для обеих групп, и большинство Т-клеток IFNγ + CD137 + CD8 + были обнаружены в подмножествах EM и высокодифференцированных EMRA (рис. 1J). У CMV-серонегативных пациентов 65% CMV-специфичных IFNγ-продуцирующих клеток коэкспрессировали CD28, в отличие от присутствия 89% CD28 нулевых IFNγ-продуцирующих клеток у CMV-серопозитивных пациентов ( P <0,05; 1J). Частота CMV-специфических CD137 + CD8 + Т-клеток, продуцирующих IL-2, была низкой, т.е.е. медиана и диапазон IQ составили: 0,001% (0,001–0,001%) и 0,024% (0,01–0,05%) от общего количества Т-лимфоцитов CD8 + для CMV-серонегативных и CMV-серопозитивных пациентов, соответственно. Поскольку менее 5% экспрессирующих CD137 Т-клеток CD8 + продуцировали IL-2, дальнейшего разделения на субпопуляции Т-клеток не проводили.

ЦМВ-специфические CD137 + CD4 + и CD8 + Т-клетки с наивным фенотипом, присутствующие с более высокой частотой у пациентов с серонегативным ЦМВ (рисунки 1B, D), не продуцируют IL-2 (рисунок 1H). или IFNγ (Фигуры 1F, J).

В совокупности эти данные показывают, что у значительной части ЦМВ-серонегативных пациентов цитокин-продуцирующие клетки присутствуют в ЦМВ-специфичных CD137-экспрессирующих Т-клетках, хотя и с более низкой частотой. Подобно CMV-серопозитивным пациентам, они в основном имеют фенотип памяти, хотя и менее дифференцированы, поскольку они больше CD28 + . Никаких различий не наблюдалось при сравнении максимальной способности Т-клеток экспрессировать CD137 (рисунки S2A, B в дополнительном материале) и продуцировать цитокины между CMV-серонегативными и CMV-серопозитивными пациентами (рисунки S2C – E в дополнительном материале).

ЦМВ-специфическая пролиферация Т-клеток у пациентов с серонегативным ЦМВ

В дополнение к измерению способности осуществлять эффекторную функцию путем продуцирования цитокинов, мы оценивали CMV-специфическую пролиферацию Т-клеток с использованием как CMV-лизата, так и пептидного пула иммунодоминантных белков pp65 и IE-1 (Рисунки 2A, B, типичный проточно-цитометрический анализ). пример). Индуцированная CMV-лизатом пролиферация наблюдалась у 10 из 12 CMV-серонегативных KT-реципиентов для CD4 + Т-клеток, соответственно.Средний процент (диапазон IQ) пролиферирующих CD4 + Т-клеток составил 2,2,55% (0,88–7,09%) (рис. 2C). Пролиферация в ответ на смесь пулов перекрывающихся pp65 и IE-1 пептидов наблюдалась у меньшего количества пациентов с серонегативным CMV, то есть у 7 и 3 из 12 реципиентов KT для CD4 + и CD8 + T клетки [медиана и диапазон IQ: 0,35 и 0,09–0,64% (рис. 2C) и 0,33 и 0,19–1,00% (рис. 2E), соответственно]. CD4 + Т-клетки CMV-серопозитивных пациентов интенсивно пролиферировали до CMV-лизата.Средний процент пролиферирующих CD4 + Т-клеток составлял 36% (рис. 2C). Пролиферация в ответ на смесь пулов перекрывающихся pp65 и IE-1 пептидов составила 6,34% (3,47–24,32%) и 9,64% (4,26–43,63%) для Т-клеток CD4 + и CD8 + соответственно. (Рисунки 2C, E). У CMV-серонегативных пациентов большинство (> 97%) пролиферирующих CD4 + Т-клеток коэкспрессировали CD28, что свидетельствует о менее дифференцированном фенотипе. У CMV-серопозитивных пациентов примерно 10% всех пролиферирующих CD4 + Т-клеток были CD28 нулевыми (рис. 2D).Эта разница в статусе дифференцировки была еще более выражена в пролиферирующих CD8 + Т-клетках, поскольку 78% этих клеток у CMV-серонегативных пациентов экспрессировали CD28 по сравнению с примерно 34% CMV-серопозитивных пациентов ( P <0,05) (рис. 2F). ). Частоты CMV-специфических IFNγ-продуцирующих CD137 + CD4 + T-клеток и IL-2-продуцирующих CD137 + CD4 + T-клеток положительно коррелировали с процентами пролиферирующих CD4 + T-клеток [для IFNγ : R s = 0.63; P = 0,02 (ЦМВ-лизат) и R s = 0,71; P = 0,02 (пептиды pp65 / IE-1), для IL-2: R s = 0,62; P = 0,02 (ЦМВ-лизат) и R s = 0,74; P = 0,01 (пептиды pp65 / IE-1)].

Рисунок 2 . Цитомегаловирусная (ЦМВ) -специфическая пролиферация Т-клеток. Показан типичный пример стратегии стробирования для анализа пролиферации CMV-специфических Т-клеток. Вкратце, на основе прямых / боковых характеристик живые клетки контролируются и отображаются на точечном графике для дальнейшего отбора живых (7AAD-отрицательных) CD3 + Т-клеток (A) .Затем они были дополнительно разделены на CD4 + и CD8 + Т-клетки (A) . Наконец, построены графики Т-клеток CD4 + и CD8 + для визуализации пролиферации (разведение CFSE) и экспрессии CD28, а на последних двух графиках показан типичный пример фоновой пролиферации в Т-клетках CD4 + и CD8 + . на панели A. На панели (B) типичные (выявляемые) пролиферативные ответы Т-лимфоцитов CD4 + и CD8 + на ЦМВ-лизат (только Т-клетки CD4 + ; верхние графики) или смесь перекрывающиеся пептиды для pp65 / IE-1 (как CD4 + , так и CD8 + Т-клетки; средние и нижние графики, соответственно) изображены для CMV-серонегативного (левая панель) и CMV-серопозитивного пациента (правая панель).% соответственно. Разделение нескорректированных индуцированных лизатом или пептидом CMV пролиферирующих Т-клеток (установлено на 100%) на те, у которых отсутствует или экспрессируется CD28, показано на панелях (D, F) для CD4 + и CD8 + Т-клеток. соответственно.ЦМВ-серонегативные (с обнаруживаемым ответом) и ЦМВ-серопозитивные пациенты показаны закрытыми и открытыми символами соответственно, а столбцы представляют медианы и межквартильный диапазон групп пациентов. * P <0,05; ** P <0,01.

Низкая частота CMV-специфических IgG ASC у CMV-серонегативных пациентов

Затем мы оценили, могут ли ЦМВ-специфические В-клетки памяти обнаруживаться в циркуляции ЦМВ-серонегативных пациентов. Частота плазменных бластов в кровотоке очень мала, но они могут быть индуцированы В-клетками при поликлональной стимуляции.Общее количество B-клеток и ответы могут быть отрицательно затронуты у пациентов с ESRD, и поэтому мы впервые задокументировали, что этот протокол действительно может индуцировать плазменные бласты. Как показано на фиг. 3A, плазматические бласты индуцировались (CD27 + CD38 высокий CD19 + , от 1,4 до 48,1%) после 5-дневной поликлональной стимуляции. Затем общий IgG и CMV-IgG ASC были количественно определены с помощью ELISpot. ЦМВ-IgG ASC были обнаружены выше фона у 4 из 11 (36%) CMV-серонегативных пациентов, а чистая медиана (диапазон IQ) CMV-специфических IgG ASC составила только 1/10 5 (1-10 / 10 5 ), п.е. 0,08% (0,02–0,14%) общего ASC IgG (Рисунки 3B, C). Все ЦМВ-серопозитивные пациенты имели обнаруживаемый ASC CMV-IgG [медиана 45 клеток / 10 5 (7–114 / 10 5 ), 0,38% (0,11–1,70%) от общего ASC IgG]. Интересно, что ЦМВ-специфический IFNγ-, а также продуцирующие ИЛ-2 CD137 + CD4 + Т-клетки всей группы пациентов (CMV-серопозитивные и CMV-серонегативные пациенты) положительно коррелировали с количеством CMV-специфических IgG. ASC ( R s = 0,52; P <0.05 и R s = 0,53; P <0,05 соответственно).

Рисунок 3 . Цитомегаловирус (CMV) -специфические В-клеточные ответы. Анализ B-клеток ELISpot выполняли для подсчета клеток, секретирующих антитела (ASC), специфичных для CMV и общего иммуноглобулина G (IgG). На панели (A) приведен типичный пример проточной цитометрии бластов B-клеток, идентифицированных как CD19 + CD27 + CD38 high клеток, перед следующей 5-дневной стимуляцией R848 и рекомбинантным IL- 2 с левой стороны.На правой стороне изображены индивидуальные и средние частоты бластных В-клеток до стимуляции и после 5-дневной стимуляции для 15 реципиентов почечного трансплантата (11 CMV-серонегативных и 4 CMV-серопозитивных пациентов). После стимуляции B-клеток клетки переносили в разном количестве на лунку в лунки 96-луночного планшета B-ELISpot, покрытые CMV-лизатом или антителом против человеческого IgG или не покрытые (содержащие PBS; фоновые клетки, продуцирующие IgG). На панели (B) показаны репрезентативные примеры для фоновых, CMV-специфических и общих IgG ASC, как определено у CMV-серопозитивных и CMV-серонегативных пациентов.На панели (C) индивидуальные и средние (определяемые) ЦМВ-специфические и общие IgG ASC с поправкой на фон (количество пятен при отсутствии покрывающих антител) для ЦМВ-серопозитивных (открытые символы) и ЦМВ-серонегативных (закрытые) символы) изображены пациенты. * P <0,05; *** P <0,001.

ЦМВ-специфический CD137

+ IFNγ + CD4 + Т-клеточные ответы защищают от цитомегаловируса

ЦМВ-специфический Т-клеточный ответ у ЦМВ-серонегативных пациентов оценивали на предмет клинической значимости, связывая его с возникновением ЦМВ-виремии после трансплантации.У 13 из 28 (46%) пациентов с ЦМВ-серонегативом виремия ЦМВ развивалась в течение первого года после трансплантации донорской почки с ЦМВ-серопозитивом. ЦМВ-серонегативные пациенты с ЦМВ-специфическим CD137 + IFNγ + CD4 + Т-клетки до трансплантации имели более низкий риск развития ЦМВ-виремии после трансплантации с донорской почкой, положительной по ЦМВ, по сравнению с пациентами без (относительный риск: 0,43, P = 0,03). Не наблюдалось различий в процентном содержании CMV-специфических IFNγ-продуцирующих CD137 + CD4 + Т-клеток между CMV-серонегативными пациентами без и пациентами с CMV-виремией (данные не показаны).

ЦМВ-ассоциированные Т-клеточные дефекты, имитирующие старение Т-клеток, отсутствуют у ЦМВ-серонегативных пациентов с ЦМВ-специфическими Т-клетками

Задержка цитомегаловируса оставляет четкий отпечаток на Т-клеточной иммунной системе. Связанные с ЦМВ изменения в компартменте циркулирующих Т-клеток у CMV-серопозитивных пациентов с ТПН включают уменьшение длины теломер, значительное увеличение пула Т-клеток CD8 + и повышение статуса дифференцировки Т-клеток памяти, в частности индукцию CD28. нулевые Т-клетки как в CD4 + , так и в CD8 + Т-клетках (21, 22).Однако такие изменения не наблюдались при сравнении CMV-серонегативных пациентов с и без обнаруживаемых CMV-специфических CD137-экспрессирующих IFNγ-продуцирующих CD4 + Т-клеток (Таблица 2).

Таблица 2 . Влияние ЦМВ-иммунитета на параметры Т-клеток до трансплантации.

Обсуждение

В этом исследовании мы оценили наличие CMV-специфического клеточного и гуморального иммунитета в когорте CMV-серонегативных пациентов и оценили клиническую значимость в отношении риска CMV-виремии после трансплантации почки.Данные показали наличие низкой частоты ЦМВ-специфических Т-клеток у более чем половины этих пациентов. Интересно, что, в частности, продуцирующие IFNγ CMV-специфические Т-клетки CD4 + были связаны с защитой от CMV-виремии после трансплантации почки от CMV-серопозитивного донора. Таким образом, защитный клеточный иммунитет против ЦМВ может существовать в отсутствие сывороточного IgG к ЦМВ.

Наличие клеточного иммунитета при отсутствии защитных антител не редкость.Возможные объяснения этой диссоциации могут заключаться в том, что либо клеточный иммунитет неэффективен для индукции адекватного гуморального иммунитета (6, 7), либо защитные антитела не поддерживаются должным образом. Оба эти механизма могут быть верными для пациентов с ТПН. Известно, что Т-клеточно-зависимые вакцины (например, HBsAg, столбнячный анатоксин и дифтерия) являются плохими индукторами защитных титров антител у этих пациентов, а титры антител плохо поддерживаются (23-25). Детальный анализ динамики и качества антиген-специфического Т-клеточного ответа после вакцинации HBsAg у пациентов с ХПН показал плохую генерацию Т-клеток памяти CD4 + (6, 7).В частности, присутствие антиген-специфичных Т-лимфоцитов CD4 + в значительной степени коррелировало с титрами анти-HBsAg, и аналогичная связь могла быть показана для IgG против ЦМВ. Результаты этого исследования также показали статистически значимую связь между присутствием IL-2 или IFNγ-продуцирующих CMV-специфических CD4 + Т-клеток и анти-CMV IgG ASC. Следовательно, слабая индукция ЦМВ-специфического Т-клеточного ответа может лежать в основе неадекватной генерации гуморального ответа против ЦМВ.Кроме того, все еще может быть возможно, что низкий, но выявляемый гуморальный ответ против ЦМВ возник изначально, но не поддерживался должным образом.

Хотя могут возникнуть проблемы, связанные с надежным измерением низких частот ЦМВ-специфических Т-клеток, многопараметрический проточный цитометрический анализ CD137, описанный ранее (17), позволяет детально охарактеризовать общий пул антиген-специфических Т-клеток, который является связаны с другими параметрами, анализируемыми в этой статье, и связаны с клиническим исходом, т.е.е., ЦМВ-виремия. Подробный анализ CMV-специфического ответа внутри субпопуляций T-клеток показал, что CMV-специфические Т-клетки памяти CD4 + и CD8 + были менее дифференцированы у CMV-серонегативных пациентов, чем у CMV-позитивных пациентов. Это было очевидно по относительно большему количеству Т-клеток памяти CD28 + и меньшему количеству ЦМВ-специфичных Т-клеток, продуцирующих эффекторные цитокины, такие как IFNγ и IL-2. Интерес представляет обнаружение CMV-специфического ответа CD137 + в фенотипически наивных Т-клетках, которые не продуцируют цитокины.Эти клетки могут быть частью так называемых разветвленных Т-клеток памяти, которые являются фенотипически наивными Т-клетками, но на самом деле являются Т-клетками памяти на ранней стадии развития, некоторые из которых способны выполнять эффекторную функцию (26). Опять же, это открытие подтверждает концепцию менее дифференцированного CMV-специфического Т-клеточного ответа. В связи с этим в статье Redeker et al. (27) хорошо проиллюстрировали на мышиной модели большие межиндивидуальные вариации в высоте CMV-специфических Т-клеточных ответов, которые зависят от начальной вирусной нагрузки, которая также влияет на степень инфляции Т-клеток памяти и фенотип ЦМВ-специфические Т-клетки.ЦМВ-инфекция обычно приводит к длительным существенным изменениям циркулирующих Т-клеток, особенно у пациентов с ТПН (13, 28–31). В частности, высокодифференцированные Т-клетки EMRA, лишенные Т-клеток CD28, размножаются в популяции Т-клеток CD8 + и, в меньшей степени, в популяции Т-клеток CD4 + (13-15). Этот типичный след ЦМВ-инфекции в составе циркулирующих Т-клеток не был обнаружен в ЦМВ-специфических Т-клетках ЦМВ-серонегативных пациентов. Это указывает на то, что эти пациенты столкнулись с ЦМВ, но у них был только ограниченный Т-клеточный ответ.Наиболее вероятным объяснением является низкий уровень воздействия вирусных антигенов, который может не приводить к специфическому отпечатку, вызванному высоким воздействием вирусного антигена, что приводит к устойчивым титрам сывороточного IgG-специфического CMV (32, 33). Кроме того, часть пациентов с положительной реакцией на ЦМВ не имела или не имела специфичных для ЦМВ Т-лимфоцитов CD8 + или имела низкие частоты, но имела ЦМВ-специфические Т-клетки CD4 + , а также клетки, продуцирующие ЦМВ-IgG до трансплантации, которые были достаточно, чтобы предотвратить реактивацию ЦМВ.Это контрастировало с работой Tey et al. в котором описаны реципиенты трансплантата гемопоэтических стволовых клеток, другая группа пациентов с ослабленным иммунитетом, дефицитных в восстановлении специфичного для ЦМВ иммунитета для более высокой вирусной нагрузки (34). Наши данные удивительно согласуются с недавним исследованием Lucia et al. (11), которые идентифицировали CMV-специфические Т-клеточные ответы у 30% серонегативных по CMV индивидуумов. Однако их данные были получены с помощью ELISpot и поэтому не имеют более глубокого анализа задействованных субпопуляций Т-клеток.Они также заявляют об обнаружении ЦМВ-специфических В-клеток памяти, но, к сожалению, не сообщается о частотах.

В заключение, оценки анти-CMV-IgG, по-видимому, недостаточно для правильной идентификации лиц, не инфицированных ЦМВ, поскольку значительная часть имеет слабый клеточный CMV-специфический ответ, который связан с защитой от ЦМВ-виремии после трансплантации с ЦМВ. -серопозитивная донорская почка. Поэтому мы предлагаем включить оценку клеточного иммунитета в оценку риска перед трансплантацией почки.Кроме того, мониторинг ЦМВ-специфического клеточного иммунитета после трансплантации, то есть в конце анти-ЦМВ-профилактики, может быть полезным для дальнейшего выявления пациентов с риском ЦМВ-виремии, требующих дополнительной противовирусной терапии или корректировки иммуносупрессивных препаратов (35).

Заявление об этике

Все пациенты дали письменное информированное согласие на участие в этом исследовании. Исследование было одобрено Медицинским этическим комитетом Erasmus MC (номер METC 2010-080) и проводилось в соответствии с Хельсинкской декларацией и Стамбульской декларацией.

Авторские взносы

NL разработал эксперименты, выполнил и проанализировал данные и написал рукопись; LH, BD и RM провели эксперименты и проанализировали данные; JK интерпретировал данные и редактировал рукопись; и МБ разработали эксперименты и отредактировали рукопись.

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Финансирование

Это исследование финансировалось Голландским фондом почек (KSPB.10.12) и Китайским советом по стипендиям, финансирующим стипендию доктора философии LH (номер файла: 201307720043).

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу https://www.frontiersin.org/article/10.3389/fimmu.2017.01137/full#supplementary-material.

Рисунок S1 . Типичная стратегия стробирования для цитомегаловируса (CMV) -специфических CD137-экспрессирующих и цитокин-продуцирующих CD4 + Т-клеток.Типичный пример проточной цитометрии показан для анализа ЦМВ-специфических CD137-экспрессирующих и цитокин-продуцирующих Т-клеток CD4 + для CMV-серопозитивных (A – C) и CMV-серонегативных (D – F) пациент. Вкратце, на основе прямых / боковых характеристик, живые клетки контролируются и изображаются на точечной диаграмме для дальнейшего отбора Т-клеток CD4 + и CD8 + . Выбирают CMV-специфические CD137-экспрессирующие CD4 + Т-клетки [ (A, D) , первый график], а также клетки IFNγ и IL-2 в CD137-экспрессирующих CD4 + Т-клетках [ ( А, Г) , второй график].CD137-экспрессирующие CD4 + Т-клетки впоследствии разделяются на наивные и разные подмножества Т-клеток памяти [ (A, D) , третий график] с использованием экспрессии CCR7 и CD45RO [CCR7 + CD45RO — : наивный, CCR7 + CD45RO + : центральная память (CM), CCR7 — CD45RO + : эффекторная память (EM) и CCR7 — CD45RO — : EMRA] или CD28 + и CD28 null Т-клетки [ (A, D) , четвертый график].IFNγ (B, E) и IL-2 (C, F) -продуцирующие CD137-экспрессирующие Т-клетки CD4 + анализировали аналогичным образом. Кроме того, тот же подход применялся для анализа ЦМВ-специфичных CD137-экспрессирующих и цитокин-продуцирующих Т-клеток CD8 + (не показаны). Процентное содержание CD137-экспрессирующих CD4 + Т-клеток от общего количества CD4 + Т-клеток и процентное содержание цитокина + в CD137 + CD4 + Т-клеток даны как процентное соотношение CD137 + CD4 + Т-клеток (установлено на 100%), а в скобках указана частота CD137 + цитокинов + в общем количестве CD4 + Т-клеток.Рассечение по определенному фенотипу Т-клеток выполняется путем установки процента CD137 + или CD137 + цитокина + CD4 + Т-клеток на 100%.

Рисунок S2 . CD137-экспрессирующие и цитокин-продуцирующие Т-клетки при стимуляции форболмиристатацетатом (PMA) и иономицином. Периферические мононуклеарные клетки пациентов стимулировали в течение 12 часов в присутствии только брефельдина А и αCD49d или смесью ФМА и иономицина. Затем клетки окрашивают поверхность и внутриклеточно для определения максимальной способности Т-клеток экспрессировать CD137 и продуцировать цитокины.PMA / иономицин-индуцированные CD137-экспрессирующие CD4 + (A) и CD8 + (B) Т-клетки с поправкой на фон (только αCD49d) представлены как процент от общего количества CD4 + или CD8 + Т-клетки. Аналогичный подход применяется для индуцированных PMA / иономицином CD137-экспрессирующих IFN-γ- и IL-2-продуцирующих CD4 + (C, E) и CD137-экспрессирующих IFN-γCD8 + Т-клеток (D ) . Закрашенные и открытые символы / столбцы обозначают пациентов, серонегативных по цитомегаловирусу (ЦМВ), и пациентов с положительной реакцией на ЦМВ, соответственно.

Список литературы

1. Фиала М., Пейн Дж. Э., Берн ТВ, Мур Т. К., Хенле В., Монтгомери Дж. З. и др. Эпидемиология цитомегаловирусной инфекции после трансплантации и иммуносупрессии. J Infect Dis (1975) 132 (4): 421–33. DOI: 10.1093 / infdis / 132.4.421

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

2. Харвала Х., Стюарт С., Мюллер К., Бернс С., Марсон Л., МакГилкрист А. и др. Высокий риск цитомегаловирусной инфекции после трансплантации солидных органов, несмотря на профилактическую терапию. J Med Virol (2013) 85 (5): 893–8. DOI: 10.1002 / jmv.23539

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

3. Йонджик С., Муттер В., Вейланд Ф., Реддхейз М.Дж., Кошиновски У. Ограниченная по сайту персистирующая цитомегаловирусная инфекция после длительного избирательного истощения CD4 + Т-лимфоцитов. J Exp Med (1989) 169 (4): 1199–212. DOI: 10.1084 / jem.169.4.1199

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

4. Kalams SA, Walker BD.Критическая потребность в CD4 помогает поддерживать эффективный ответ цитотоксических Т-лимфоцитов. J Exp Med (1998) 188 (12): 2199–204. DOI: 10.1084 / jem.188.12.2199

CrossRef Полный текст | Google Scholar

5. Малой К.Дж., Буркхарт С., Фрир Дж., Рулике Т., Пирчер Х., Коно Д.Х. и др. Качественные и количественные требования к антивирусной защите, опосредованной CD4 + Т-клетками. J Immunol (1999) 162 (5): 2867–74.

PubMed Аннотация | Google Scholar

6.Litjens NH, Huisman M, Hijdra D, Lambrecht BM, Stittelaar KJ, Betjes MG. CD4 + Т-лимфоциты памяти, продуцирующие IL-2, тесно связаны с образованием плазматических клеток, секретирующих IgG. J Immunol (2008) 181 (5): 3665–73. DOI: 10.4049 / jimmunol.181.5.3665

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

7. Litjens NH, Huisman M, van den Dorpel M, Betjes MG. Нарушение иммунных ответов и антиген-специфической памяти CD4 + Т-лимфоцитов у пациентов, находящихся на гемодиализе. J Am Soc Nephrol (2008) 19 (8): 1483–90.DOI: 10.1681 / ASN.20070

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

8. Кумар Д., Черненко С., Мусса Г., Кобос И., Мануэль О., Прейксайтис Дж. И др. Клеточно-опосредованный иммунитет для прогнозирования цитомегаловирусной болезни у реципиентов солидных органов высокого риска. Am J Transplant (2009) 9 (5): 1214–22. DOI: 10.1111 / j.1600-6143.2009.02618.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

9. Мануэль О., Хусейн С., Кумар Д., Заяс С., Мохортер С., Леви М.Э. и др.Оценка цитомегаловирус-специфического клеточного иммунитета для прогнозирования цитомегаловирусной болезни у реципиентов солидных органов высокого риска: многоцентровое когортное исследование. Clin Infect Dis (2013) 56 (6): 817–24. DOI: 10.1093 / cid / cis993

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

10. Sester M, Gartner BC, Sester U, Girndt M, Mueller-Lantzsch N, Kohler H. Всегда ли точен серологический статус цитомегаловируса? Сравнительный анализ гуморального и клеточного иммунитета. Трансплантация (2003) 76 (8): 1229–30. DOI: 10.1097 / 01.TP.0000083894.61333.56

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

11. Люсия М., Креспо Е., Мелилли Е., Крузадо Дж. М., Луке С., Ллаудо И. и др. Предварительно сформированные частоты специфических для цитомегаловируса (CMV) Т- и В-клеток памяти позволяют идентифицировать защищенных CMV-сенсибилизированных индивидуумов среди серонегативных реципиентов трансплантата почки. Clin Infect Dis (2014) 59 (11): 1537–45. DOI: 10.1093 / cid / ciu589

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

12.Саллюсто Ф., Лангенкамп А., Гегинат Дж., Ланзавеккья А. Функциональные подмножества Т-клеток памяти, идентифицированные по экспрессии CCR7. Curr Top Microbiol Immunol (2000) 251: 167–71.

Google Scholar

14. Litjens NH, de Wit EA, Betjes MG. Дифференциальное влияние возраста, серопозитивности на цитомегаловирус и терминальной стадии почечной недостаточности (ESRD) на субпопуляции циркулирующих Т-лимфоцитов. Иммунное старение (2011) 8 (1): 2. DOI: 10.1186 / 1742-4933-8-2

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

15.Meijers RW, Litjens NH, de Wit EA, Langerak AW, van der Spek A, Baan CC и др. Цитомегаловирус частично вносит вклад в связанное с уремией преждевременное иммунологическое старение компартмента Т-клеток. Clin Exp Immunol (2013) 174 (3): 424–32. DOI: 10.1111 / cei.12188

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

16. Литенс Н.Х., Хьюсман М., Баан С.С., ван Друнинген С.Дж., Бетес М.Г. CD4 (+) T-клетки, специфичные для вакцины против гепатита B, могут быть обнаружены и охарактеризованы на уровне отдельных клеток: ограниченная полезность дендритных клеток в качестве усилителей сигнала. J Immunol Methods (2008) 330 (1-2): 1-11. DOI: 10.1016 / j.jim.2007.10.013

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

17. Litjens NH, de Wit EA, Baan CC, Betjes MG. CD137, индуцированный активацией, представляет собой быстрый анализ для идентификации и многопараметрического проточно-цитометрического анализа аллореактивных Т-клеток. Clin Exp Immunol (2013) 174 (1): 179–191. DOI: 10.1111 / cei.12152

CrossRef Полный текст | Google Scholar

18. Bouvy AP, Kho MM, Klepper M, Litjens NH, Betjes MG, Weimar W, et al.Кинетика гомеостатической пролиферации и тимопоэза после индукционной терапии rATG у пациентов с трансплантатом почки. Трансплантация (2013) 96 (10): 904–13. DOI: 10.1097 / TP.0b013e3182a203e4

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

19. Betjes MG, Langerak AW, van der Spek A, de Wit EA, Litjens NH. Преждевременное старение циркулирующих Т-клеток у пациентов с терминальной стадией почечной недостаточности. Kidney Int. (2011) 80 (2): 208–17. DOI: 10.1038 / ki.2011.110

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

20.Баерлохер GM, Vulto I, de Jong G, Lansdorp PM. Проточная цитометрия и FISH для измерения средней длины теломер (flow FISH). Nat Protoc (2006) 1 (5): 2365–76. DOI: 10.1038 / nprot.2006.263

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

21. Дерхованесиан Э., Ларби А., Павелец Г. Биомаркеры иммунного старения человека: влияние цитомегаловирусной инфекции. Curr Opin Immunol (2009) 21 (4): 440–5. DOI: 10.1016 / j.coi.2009.05.012

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

22.Викби А., Йоханссон Б., Олссон Дж., Лофгрен С., Нильссон Б.О., Фергюсон Ф. Расширение субпопуляций Т-лимфоцитов CD8 периферической крови и связь с серопозитивностью к цитомегаловирусу у пожилых людей: шведское иммунное исследование NONA. Exp Gerontol (2002) 37 (2–3): 445–53. DOI: 10.1016 / S0531-5565 (01) 00212-1

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

23. Crosnier J, Jungers P, Courouce AM, Laplanche A, Benhamou E, Degos F, et al. Рандомизированное плацебо-контролируемое испытание вакцины против гепатита В с поверхностным антигеном во французских отделениях гемодиализа: I, Медицинский персонал. Ланцет (1981) 1 (8218): 455–9.

Google Scholar

24. Стивенс CE, Альтер HJ, Taylor PE, Zang EA, Harley EJ, Szmuness W. Вакцина против гепатита B у пациентов, получающих гемодиализ. Иммуногенность и эффективность. N Engl J Med (1984) 311 (8): 496–501. DOI: 10.1056 / NEJM198408233110803

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

25. Гирндт М., Пич М., Колер Х. Иммунизация против столбняка и ее связь с вакцинацией против гепатита В у пациентов с хронической почечной недостаточностью. Am J Kidney Dis (1995) 26 (3): 454–60.

PubMed Аннотация | Google Scholar

26. Сонг К., Рабин Р.Л., Хилл Б.Дж., Де Роса С.К., Перфетто С.П., Чжан Х.Х. и др. Характеристика подмножеств CD4 + Т-клеток памяти выявляет ранние разветвленные пути дифференцировки Т-клеток у людей. Proc Natl Acad Sci U S. A (2005) 102 (22): 7916–21. DOI: 10.1073 / pnas.0409720102

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

28. Мейерс Р.В., Литдженс Н.Х., Хесселинк Д.А., Лангерак ​​А.В., Баан С.С., Бетйес М.Г.Первичная цитомегаловирусная инфекция значительно влияет на циркулирующие Т-клетки у реципиентов почечного трансплантата. Am J Transplant (2015) 15 (12): 3143–56. DOI: 10.1111 / ajt.13396

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

29. Гамадиа Л. Е., Рентенаар Р. Дж., Баарс П. А., Реммерсваал Э. Б., Сурахно С., Вел Дж. Ф. и др. Дифференциация цитомегаловирус-специфических CD8 (+) Т-клеток у здоровых и иммуносупрессированных вирусоносителей. Кровь (2001) 98 (3): 754–61. DOI: 10.1182 / кровь.V98.3.754

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

30. van Leeuwen EM, Remmerswaal EB, Heemskerk MH, ten Berge IJ, van Lier RA. Сильный отбор вирус-специфичных цитотоксических клонов CD4 + Т-клеток во время первичной цитомегаловирусной инфекции человека. Кровь (2006) 108 (9): 3121–7. DOI: 10.1182 / кровь-2006-03-006809

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

31. van Leeuwen EM, Remmerswaal EB, Vossen MT, Rowshani AT, Wertheim-van Dillen PM, van Lier RA, et al.Появление CD4 + CD28- гранзима B +, субпопуляции цитомегаловирус-специфичных Т-клеток после выздоровления от первичной цитомегаловирусной инфекции. J Immunol (2004) 173 (3): 1834–41. DOI: 10.4049 / jimmunol.173.3.1834

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

32. Utzschneider DT, Alfei F, Roelli P, Barras D, Chennupati V, Darbre S, et al. Высокие уровни антигена вызывают истощенный фенотип при хронической инфекции без ухудшения экспансии и выживаемости Т-клеток. J Exp Med (2016) 213 (9): 1819–34.DOI: 10.1084 / jem.20150598

CrossRef Полный текст | Google Scholar

33. Майер Б.Т., Кранц Е.М., Свон Д., Ферренберг Дж., Симмонс К., Селке С. и др. Преходящие оральные цитомегаловирусные инфекции человека указывают на неэффективное распространение вируса от очень небольшого числа первоначально инфицированных клеток. J Virol (2017) 91 (12): e00380–17. DOI: 10.1128 / JVI.00380-17

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

34. Тей С.К., Кеннеди Г.А., Кромер Д., Давенпорт М.П., ​​Уокер С., Джонс Л.И. и др.Клиническая оценка антивирусного мониторинга CD8 + Т-клеток с использованием анализа QuantiFERON-CMV (R) для выявления пациентов с аллогенной трансплантацией гемопоэтических стволовых клеток высокого риска с осложнениями инфекции CMV. PLoS One (2013) 8 (10): e74744. DOI: 10.1371 / journal.pone.0074744

CrossRef Полный текст | Google Scholar

35. Барабас С., Шпиндлер Т., Кинер Р., Тонар С., Люгнер Т., Батзилла Дж. И др. Оптимизированный анализ IFN-gamma ELISpot для чувствительного и стандартизированного мониторинга эффекторных клеток, реагирующих с белками CMV, клеточно-опосредованного иммунитета. BMC Immunol (2017) 18 (1): 14. DOI: 10.1186 / s12865-017-0195-y

CrossRef Полный текст | Google Scholar

KoreaMed Synapse

Первичная инфекция цитомегаловируса человека (ЦМВ) во время беременности является одной из наиболее частых причин врожденных пороков развития [1]. В целом примерно 0,2–2,5% новорожденных во всем мире страдают врожденной ЦМВ-инфекцией [2]. Врожденная ЦМВ-инфекция происходит при внутриутробной передаче вируса. Сообщается, что около 90% новорожденных, инфицированных во время беременности, не имеют симптомов при рождении, в то время как у других наблюдаются различные степени осложнений, от гепатоспленомегалии, петехий и тромбоцитопении до более серьезных симптомов, включая умственную отсталость, нарушение двигательной функции и потерю слуха [3]. .Даже среди новорожденных без явных клинических проявлений при рождении около 5-15% могут развиваться отсроченные последствия [3].

Поскольку у большинства инфицированных беременных женщин наблюдаются только неспецифические симптомы, необходимо разработать лабораторные методы диагностики первичной ЦМВ-инфекции [4]. Полезность проведения серологического исследования материнской сыворотки на наличие ЦМВ-инфекции ограничена из-за наложения признаков первичной и непервичной инфекции, которая не вызывает серьезных врожденных пороков развития и, следовательно, не требует специального вмешательства [5-7].Поэтому важно отличать первичную инфекцию от непервичной инфекции, чтобы обеспечить адресную дородовую помощь женщинам, которые подвергаются высокому риску передачи инфекции ЦМВ своему потомству. Последние достижения в диагностических методах привели к разработке надежных тестов на авидность CMV IgG, которые могут обнаруживать первичную CMV-инфекцию с высокой специфичностью около 98% без снижения чувствительности [8]. Это также позволило разработать метод алгоритмического скрининга, включающий тесты авидности CMV IgG, IgM и IgG для выявления женщин, которые подвергаются высокому риску внутриутробной передачи вируса [4].

Используя эти серологические тесты, стало возможным легко получить важную информацию о первичной ЦМВ-инфекции. В Корее, хотя имеется несколько отчетов о распространенности ЦМВ-серотипа, надежных данных о частоте первичной ЦМВ-инфекции во время беременности нет [9, 10]. Таким образом, мы стремились оценить частоту первичной ЦМВ-инфекции среди беременных корейских женщин с помощью недавно разработанного теста на авидность CMV IgG.

1. Материалы

В течение 2-месячного периода 744 беременных корейских женщины на сроке 10-19 недель гестации были последовательно зарегистрированы для серологического тестирования на ЦМВ.Их образцы сыворотки были проспективно проверены на ЦМВ с ноября по декабрь 2008 года. Эти женщины посещали первичную женскую клинику (Motaean Women’s Hospital и Dana Women Clinic) для регулярной дородовой помощи. Все испытуемые дали письменное информированное согласие. Средний возраст женщин, включенных в это исследование, составлял 21,9 ± 7,2 года (среднее значение ± 2SD).

Сыворотка была отделена от образцов цельной крови, полученных от женщин, в течение 4 часов после сбора. Образцы сыворотки выдерживали при 2-8 ℃ до проведения серологических анализов.Серологические анализы не откладывались более чем на 10 дней после сбора крови.

2. Методы

CMV IgG и IgM были обнаружены в сыворотках всех женщин с помощью коммерческих хемилюминесцентных иммуноанализов (ARCHITECT i 2000 SR ; Abbott Laboratories, Abbott Park, IL, USA). ARCHITECT CMV IgG был полностью автоматизированным полуколичественным двухэтапным иммуноанализом, включающим вирусный лизат. Результаты анализа, равные или более 6,0 условных единиц (AU) / мл, считались реактивными.ARCHITECT CMV IgM представлял собой качественный двухэтапный иммуноанализ, включающий как вирусный лизат, так и рекомбинантный антиген. Значение индекса 0,85-0,99 рассматривалось как серая зона, а индексы, превышающие это значение, интерпретировались как реактивные. Результаты серой зоны обрабатывались таким же образом, как и результаты реакции, как описано ранее [8].

Автоматический анализ авидности IgG (ARCHITECT CMV IgG Avidity; Abbott Laboratories, Abbott Park, IL, USA) был выполнен для различения первичных и непервичных инфекций CMV для случаев, которые показали реактивность как с CMV IgG, так и с IgM, при условии адекватного количества сыворотки были доступны.Анализ авидности CMV IgG включал два двухэтапных иммуноанализа, выполненных с использованием хемилюминесцентной технологии. Для каждого образца одну аликвоту образца предварительно обрабатывали лизатом CMV, что приводило к селективному связыванию и удалению антитела с высокой авидностью, в то время как другую аликвоту предварительно обрабатывали буфером без лизата CMV. После завершения реакции хемилюминесценции авидность CMV IgG в образце рассчитывалась с использованием относительных световых единиц обоих тестов. Вышеупомянутые процедуры выполнялись автоматически после загрузки образца в прибор.Результаты были получены в процентах, а серая зона была установлена ​​на 50,0-59,9% в соответствии с инструкциями производителя. Результаты выше серой зоны указывают на непервичную инфекцию, тогда как результаты ниже верхней границы серой зоны указывают на первичную инфекцию с высоким риском передачи ЦМВ внутриутробно. В течение всего периода исследования серологические анализы CMV проводились в соответствии с обычной практикой контроля качества согласно соответствующим лабораторным руководствам и рекомендациям производителя.

Для женщин с определяемым уровнем сывороточного IgM к ЦМВ исход беременности, связанной с ЦМВ-инфекцией, оценивался на основании наличия серьезных аномалий или задержки роста их новорожденных при рождении.

3. Статистический анализ

Тест Стьюдента t использовался для сравнения между CMV IgM-серопозитивными и CMV IgM-серонегативными женщинами с точки зрения возраста, гестационного возраста на момент серологического тестирования, массы тела и концентрации CMV IgG.Различия были проанализированы с помощью MedCalc (MedCalc Software; Mariakerke, Бельгия), и значение P менее 0,05 считалось статистически значимым.

Хотя ARCHITECT CMV IgM является качественным анализом, для этого анализа может быть получено отношение сигнала к пороговому значению. Для оценки вероятности ложноположительного результата анализа, отрицательное значение δ рассчитывалось как логарифмическое среднее значение отношения сигнала к пороговому значению, деленное на логарифмическое стандартное отклонение отношения сигнала к пороговому значению [11].Результаты для женщин, у которых была обнаружена реактивность серой зоны на IgM к ЦМВ, не использовались для расчета отрицательного значения δ, поскольку в данном исследовании этих женщин рассматривали как серопозитивных.

Из 744 беременных женщин, включенных в это исследование, 730 (98,1%) были серопозитивными по IgG к CMV.

Медиана и 95% доверительный интервал концентрации IgG у серонегативных по CMV IgG лиц составляли 0,3 и 0,10–0,58 AU / мл соответственно, а у серопозитивных — 183,8 и 165.7-191,9 ЕД / мл соответственно (рис. 1). Все 14 образцов, которые дали отрицательные результаты в тесте CMV IgG, также были отрицательными в тесте CMV IgM.

Распределение сигнала до пороговых значений теста CMV IgM было нанесено на график (рис. 2). В тесте CMV IgM образцы от 10 женщин показали положительные результаты, а еще 3 образца показали результаты в серой зоне. Все CMV IgM-положительные образцы имели отношение сигнала к отсечке менее 2,0. Для образцов от людей с отрицательными результатами теста CMV IgM среднее значение сигнала до порогового значения было равно 0.2, а отрицательное значение δ составило -3,1. Все женщины с положительными результатами или результатами серой зоны по CMV IgM также показали положительные результаты по CMV IgG (87,9 ~> 250 AU / мл), и их демографические и серологические характеристики суммированы в таблице 1. По сравнению с женщинами, которые показали исключительно положительные результаты. в отношении IgG к CMV те, у кого были положительные результаты как по IgG к CMV, так и по IgM к CMV, не показали статистически значимых различий в отношении возраста, гестационного возраста на момент серологического тестирования, массы тела и концентрации IgG к CMV.Тест на авидность CMV IgG был проведен на образцах, взятых у 12 женщин, которые показали положительные результаты как на CMV IgG, так и на CMV IgM. Все 12 образцов показали высокий индекс авидности CMV IgG (65,2–98,2%), и было установлено, что эти женщины имеют низкий риск передачи инфекции CMV (Таблица 1). Тест на авидность IgG не проводился у 1 пациента из-за отсутствия достаточного количества образца. Из 12 женщин, для которых были доступны результаты авидности IgG к CMV, у 7 можно было оценить исходы беременности (случаи 1–5, 8 и 12).Ни у одного из новорожденных из 7 женщин не было доказательств врожденной ЦМВ-инфекции при обычном неонатальном обследовании. Из-за отсутствия явных показаний специальные тесты для исключения врожденной ЦМВ-инфекции не проводились.

Известно, что первичная ЦМВ-инфекция во время беременности связана с развитием врожденного порока с вероятностью 15-25% [3]. Хотя нельзя игнорировать риск, связанный с рецидивирующими материнскими инфекциями ЦМВ, вероятность серьезных последствий, таких как неврологические проявления, считается очень низкой [12].Таким образом, считалось, что риск врожденной ЦМВ-инфекции тесно связан с историей инфекции у матери, что приводит к существованию антител против ЦМВ до беременности [1]. В этом исследовании 98,1% беременных имели IgG к ЦМВ. Распространенность CMV IgM составила 1,7% при условии включения серой зоны. По сравнению с результатами предыдущих исследований, распространенность антител против ЦМВ среди беременных кореянок существенно не изменилась: она составила 98.9% в 1984 г. и 96,0% в 1992 г. [9, 10]. Распространенность CMV IgG, полученная в этом исследовании, была аналогична таковой в Японии (94%), но была выше, чем в США (50-88%), Великобритании (56-60%) и Италии (70%). [13].

На основании рекомендованного порогового значения отрицательное значение δ -3,1 в анализе CMV IgM было сочтено приемлемым, чтобы отличить серонегативных индивидуумов от серопозитивных. Положительные значения δ не могли быть рассчитаны из-за ограниченного числа положительных образцов.

До сих пор не было данных о частоте первичной ЦМВ-инфекции во время беременности в Корее из-за отсутствия доступного метода выявления первичной ЦМВ-инфекции. ПЦР ЦМВ, выделенного из околоплодных вод, может быть подходящим подходом. Однако было показано, что его полезность значительно ограничена низкой диагностической чувствительностью 30-45% до 21 недели беременности и его врожденной инвазивностью [4].

В настоящее время анализ авидности CMV IgG, по-видимому, является одним из наиболее доступных инструментов для дифференциации первичной и непервичной инфекции CMV со значительной надежностью у пациентов с CMV IgG- и IgM-положительными сыворотками.Клиническое исследование 31 беременной женщины с недавней первичной инфекцией CMV показало, что оба доступных в настоящее время автоматизированных анализа авидности IgG CMV, включая анализ ARCHITECT CMV IgG Avidity, могут идентифицировать всех беременных женщин, у которых IgG к CMV была сероконверсией в течение последних 4 месяцев [8 ]. В частности, в своем исследовании ARCHITECT CMV IgG Avidity показал низкий уровень во всех 25 случаях, у которых CMV IgG был преобразован с отрицательного на положительный в течение последних 4 месяцев, но изменился на высокий уровень через 40 недель, что подразумевает его применимость для выявления первичных ЦМВ-инфекция у беременных [8].

Из-за высокой чувствительности для выявления первичной ЦМВ-инфекции в прошлом иногда использовались тесты на авидность CMV IgG. Однако широкий диапазон серой зоны (до 60%) и включение ручных шагов в ранее доступные тесты препятствовали их широкому применению в клинических лабораториях [8]. Кроме того, критерии интерпретации, рекомендованные производителями, не всегда были приемлемыми для оценки первичной инфекции [4]. Тем не менее, ARCHITECT CMV IgG Avidity в значительной степени решил эти проблемы.Согласно ранее опубликованному отчету, из 100 пациентов с не первичной ЦМВ-инфекцией 24% не смогли показать высокий уровень авидности CMV IgG с помощью ранее доступного альтернативного иммуноанализа, в то время как 98% показали высокую авидность CMV IgG с помощью ARCHITECT [8]. Поскольку ARCHITECT CMV IgG Avidity имеет полностью автоматизированную процедуру анализа и узкую серую зону всего 10%, авторы могли надежно идентифицировать женщин с первичной инфекцией в зависимости от времени, используя неизмененные критерии интерпретации, предоставленные производителем [8].В этом исследовании низкая авидность или авидность в «серой зоне» не наблюдалась среди 12 беременных женщин, положительных по CMV IgG и IgM, которые были протестированы с помощью теста на авидность IgG CMV. Считалось, что все женщины, чьи образцы были протестированы на авидность IgG к CMV, имели низкий риск передачи инфекции CMV их потомству, о чем свидетельствуют в целом нормальные новорожденные 7 женщин, которые прошли последующее наблюдение до родов.

Включение теста на авидность CMV IgG было полезным для определения инфекционного статуса CMV без необходимости проведения дополнительных инвазивных диагностических процедур.Это может снизить расходы на здравоохранение. Более того, женщины с высоким индексом авидности IgG к ЦМВ могут сохранить беременность, не опасаясь передачи инфекции ЦМВ своему потомству.

В этом исследовании новорожденных женщин с положительным результатом на вирус обследовали неспецифически для оценки врожденной ЦМВ-инфекции из-за минимального уровня предполагаемого риска. Среди 7 случаев, которые наблюдались до родов, не было обнаружено видимых последствий внутриутробной ЦМВ-инфекции.

В Корее, хотя национальная система эпиднадзора или утвержденные рекомендации по скринингу среди населения еще не были выполнены, врожденные ЦМВ-инфекции с серьезными последствиями представляют собой серьезную проблему [14, 15]. Хотя краснуха считалась наиболее значительным патогеном, вызывающим врожденные пороки развития, растущие доказательства всеобщей вакцинации позволят исключить большинство случаев врожденных пороков развития, вызванных краснухой. Напротив, врожденная ЦМВ-инфекция остается серьезной проблемой из-за относительно низкого уровня осведомленности и отсутствия вакцинации.В Корее серологический скрининг на ЦМВ-инфекцию матери не используется широко, и пока не установлены согласованные стандарты дородовой помощи. Наше исследование показывает, что скрининг на ЦМВ у беременных женщин, вероятно, будет иметь большее значение в будущей дородовой помощи, а диагностическая ценность надежных и легкодоступных серологических тестов будет признана в будущем. Это исследование также показало, что автоматизированный серологический скрининг, включающий тест авидности IgG к ЦМВ, позволяет легко идентифицировать лиц с не первичной ЦМВ-инфекцией и может эффективно дифференцировать беременных женщин с более низким риском внутриутробной передачи ЦМВ от женщин с повышенным риском.

Трансплантация пуповинной крови и цитомегаловирус: посттрансплантационная инфекция и скрининг доноров | Кровь

Несмотря на эффективную противовирусную терапию, цитомегаловирус (ЦМВ) остается одной из ведущих причин заболеваемости и смертности после трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ГСК). 1,2 ЦМВ-инфекция у реципиентов трансплантата может возникать в результате реактивации латентной инфекции или в результате вновь приобретенных инфекций с донорской кровью, тканью или органами в качестве источника вируса. 3,4 Таким образом, правила Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA) о соответствии критериям отбора доноров требуют тестирования доноров жизнеспособной, богатой лейкоцитами крови и HSC на «доказательства инфекции, вызванной цитомегаловирусом». 5 Для доноров стволовых клеток костного мозга или периферической крови скрининг основывается на традиционных серологических методах обнаружения ЦМВ-полных антител, поскольку их присутствие (обнаруживается у более чем половины взрослых доноров костного мозга в США) указывает на активное или латентная инфекция, любая из которых может передаваться реципиентам трансплантата. 6,7 Пуповинная кровь (CB), все более широко распространенная альтернатива трансплантатам костного мозга, имеет низкий риск передачи ЦМВ из-за низкой частоты врожденной ЦМВ-инфекции (сообщается в 0,2–2,5% США). рождений). 8-10 Тем не менее, на сегодняшний день ни в одном исследовании не проводилась систематическая оценка риска ЦМВ-инфекции у реципиентов трансплантата ХБ или оценивалась эффективность методов скрининга доноров ХБ в этом контексте.

Варианты скрининга на ЦМВ для доноров ХБ включают (1) серологическое тестирование матери младенца-донора для выявления риска инфекции у младенца, (2) серологическое тестирование ХБ ребенка, (3) обнаружение инфекции у младенца вирусным культура или ДНК-специфическая полимеразная цепная реакция (ПЦР) ЦМВ для обнаружения последовательностей нуклеиновых кислот ЦМВ или (4) комбинация серологического тестирования и выявления инфекции у младенца.Интерпретация данных, полученных только серологическими методами, у доноров ХБ затруднена из-за активного транспорта материнских антител IgG через плаценту. Таким образом, положительный результат на ЦМВ – общие антитела у матери или при ХБ обычно отражает воздействие ЦМВ на всю жизнь матери и потенциальный риск, но не обязательно инфицирование младенца. Антитела CMV – IgM (IgM anti-CMV) у матери во время рождения ребенка, как маркер недавней активной инфекции CMV, должны указывать на повышенный риск инфицирования младенца.В некоторых исследованиях сообщается, например, что до одной трети матерей с первичной инфекцией ЦМВ во время беременности передают вирус плоду. 11 IgM anti-CMV остается обнаруживаемым только в течение 4–6 месяцев, поэтому тестирование матери во время родов обычно позволяет пропустить инфекции, которые произошли на ранних сроках беременности. Более того, младенцы могут заразиться ЦМВ, когда латентная материнская инфекция реактивируется во время беременности, и анти-ЦМВ IgM у этих матерей могут оставаться отрицательными или быть положительными только на короткое время.Учитывая эти ограничения, может быть неоправдано, что некоторые банки CB принимают или исключают единицы CB на основании статуса матери по CMV-IgM. 12 Выявление ЦМВ-инфекции у младенца может быть предпринято более непосредственно, путем тестирования крови ребенка на антитела IgM, культивирования мочи или слюны на наличие вируса или тестирования крови, мочи или слюны на ДНК ЦМВ путем амплификации нуклеиновых кислот. Однако антитела IgM не обнаруживаются у большинства инфицированных младенцев. 10 Хотя выделение вируса путем посева мочи или слюны считается золотым стандартом для выявления врожденной ЦМВ-инфекции, культивирование вируса может быть обременительным и дорогостоящим и поэтому может оказаться непрактичным для широкомасштабного скрининга. 13 Полимеразная цепная реакция (ПЦР) может обнаруживать ДНК ЦМВ у врожденно инфицированных младенцев, но не была широко оценена для скрининга CB. 14,15

Мы провели текущее исследование для оценки частоты посттрансплантационной ЦМВ-инфекции у реципиентов ХБ, сданных в Национальную программу пуповинной крови (NCBP) Нью-Йоркского центра крови (NYBC), и актуальности серологических тестов доноров матери как показателей риска ЦМВ передачи реципиентам, а также для оценки возможных стратегий выявления доноров ХБ, инфицированных ЦМВ.

Антитело

IgM к CMV (IgM anti-CMV) было обнаружено с помощью иммуноферментного анализа микрочастиц (MEIA, система IMx; Abbott Laboratories, Abbott Park, IL). В соответствии с инструкциями производителя результаты были разделены на отрицательные, сомнительные или положительные. Материнская плазма, собранная до марта 2002 г., регулярно тестировалась на IgM анти-CMV (n = 11 726). Общие антитела к ЦМВ (общие анти-ЦМВ) в материнской плазме определяли с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) на IgG, IgM и IgA (ABBOTT CMV TOTAL AB EIA; Abbott Laboratories).Все матери, родившие в период с февраля 1993 г. по ноябрь 1997 г. и с июня 2001 г. по сентябрь 2005 г., были протестированы на общий анти-ЦМВ (n = 19 757). В дополнение к рутинному анализу образцы от матерей, чьи младенцы были положительными или были отобраны в качестве контроля в исследованиях случай-контроль, а также от матерей младенцев, чей CB был использован для трансплантации, были ретроспективно протестированы на IgM и общий анти-CMV, если еще не регулярно тестируется. Предполагалось, что матери, которые были положительными по общему анти-CMV, но отрицательными по IgM анти-CMV, имели преимущественно антитела IgG и в дальнейшем называются «положительными по IgG».«Те, у кого были обнаружены IgM анти-CMV, назывались« IgM-положительными ». Титр анти-ЦМВ определяли на основании положительности конечной точки при 2-кратных серийных разведениях. Единицы CB от матерей с IgM или IgG анти-CMV не исключались из инвентаризации.

В период с августа 1993 г. по декабрь 2004 г. 1564 пациентам была проведена трансплантация с использованием отдельных аппаратов CB, предоставленных NCBP. Центры трансплантации сообщили характеристики пациентов и данные об исходах для 1490 (95%), из которых 1279 имели данные как о предтрансплантационном статусе анти-ЦМВ, так и о посттрансплантационной ЦМВ-инфекции.Отчеты о результатах, включая информацию о посттрансплантационной инфекции, обычно получают через 3, 6 и 12 месяцев после трансплантации, а затем ежегодно. Среди них 1221 имели результаты материнского анти-CMV донора и были оценены на предмет доказательства их связи с частотой посттрансплантационной инфекции CMV у реципиентов CB. Анти-ЦМВ-статус реципиента до трансплантации был классифицирован как положительный, отрицательный или неоценимый. В последнюю категорию вошли пациенты с наследственными иммунодефицитными заболеваниями или перенесшие трансплантацию в первые месяцы жизни, когда положительные антитела, скорее всего, имели материнское происхождение.Предполагалось, что пациенты, чьи антитела к ЦМВ не были оценены до трансплантации, ранее не были инфицированы ЦМВ, и были сгруппированы вместе с пациентами с отрицательными антителами при анализе результатов трансплантации. Большинство центров трансплантации проводят мониторинг ЦМВ-инфекции путем еженедельного тестирования реципиентов на антигенемию или, в последнее время, на наличие ДНК ЦМВ с помощью ПЦР до дня +100 и дольше, если у реципиента была диагностирована острая болезнь трансплантат против хозяина (РТПХ). В этом исследовании посттрансплантационная инфекция ЦМВ определялась как любой положительный тест на антигенемию или ДНК ЦМВ с началом в качестве даты первого обнаружения (зарегистрировано в 90% случаев).ЦМВ-инфекция была далее классифицирована как легкая при обнаружении только в крови или как более тяжелая при обнаружении в других тканях или органах или связанная с заболеванием.

Отобранные праймеры для «собственной» ПЦР были направлены в область гликопротеина B (GlyB) из генома CMV человека длиной 280 п.н. 19 Экстрагированную ДНК (10 мкл) добавляли к смеси для ПЦР (25 пмоль каждого праймера, 1 × буфер для ПЦР [10 мМ Трис-HCl, pH = 8; 50 мМ KCl; 10 мМ NaCl], 6 мМ MgCl. 2 , Taq Gold, 5U [Perkin Elmer, Norwalk, CT], dUTP 1 × [Sigma, St Louis, MO], бычий сывороточный альбумин [BSA; 0.2 мг / мл; Roche, Indianapolis, IN] и ДНК-гликозилазы урацила [0,25 ед.]), Чтобы получить конечный объем 50 мкл. Амплификацию проводили в термоциклере Gene Amp 9600 (Perkin Elmer, Shelton, CT) следующим образом: выдержка при 25 ° C и 94 ° C в течение 10 минут, соответственно, с последующими 40 циклами при 94 ° C, 56 ° C, и 72 ° C в течение 40 секунд каждый. В конце реакции проводили цикл выдержки при 72 ° C в течение 5 минут.

Отрицательный, положительный и холостой контроль были включены в каждую реакцию.Отрицательным контролем были здоровые взрослые, у которых была отрицательная серология на ЦМВ, а пустой контроль состоял из стандартных реагентов ПЦР без образца ДНК. CMV-положительные контроли с высоким и низким уровнем копий (vc) получали из исходного материала (10000 vc / мкл; Advanced Biotechnologies; Columbia, MD). Продукты ПЦР визуализировали электрофорезом в геле бромистого этидия через 2% агарозу в буфере 1 × TBE (1 М Трис, 0,9 М борная кислота, 0,01 М ЭДТА; Invitrogen, Карлсбад, Калифорния) и подтверждали гибридизацией со специфическими зондами.Для обнаружения образцов, содержащих ингибиторы ПЦР, последовательность ДНК (общий HLA-DRB1; 240 п.н.), которая не имеет гомологии с CMV, была коамплифицирована в качестве контрольной мишени с использованием мультиплексной ПЦР вместе с праймерами для CMV. Чтобы прогон считался действительным, должен присутствовать контрольный диапазон DRB1. Образец без амплификации праймеров CMV в допустимом опыте был интерпретирован как отрицательный CMV-PCR.

Для вложенной ПЦР 2 мкл продукта ПЦР добавляли к смеси, содержащей 0.36 мкМ каждого праймера, 1 × буфер для ПЦР, 6 мМ MgCl 2 , Taq Gold, 5U (Perkin Elmer, Norwalk, CT), BSA (0,2 мг / мл; Roche) и dUTP 1 × (Sigma) в 50 Конечный объем мкл. Конкретные последовательности праймеров, внутренние по отношению к исходным последовательностям GlyB длиной 280 п.н., были следующими: прямой 5’aggtgctgcgtgatatgaacg3 ‘и обратный 5′-gacaacgaaatcctgttgggc-3’. Амплификацию ДНК проводили следующим образом: выдержка при 94 ° C в течение 10 минут, затем 25 циклов при 94 ° C, 56 ° C и 72 ° C в течение 30 секунд и цикл выдержки при 72 ° C в течение 5 минут.

Продукт ПЦР

оценивали гибридизацией с использованием 5′-биотинилированных специфических зондов (Qiagen, Бостон, Массачусетс) с сигналом, полученным с использованием хемилюминесцентной системы (ECL; Amersham Pharmacia Biotech, Бакингемшир, Англия). Каждая мембрана содержала 10-кратные разведения коммерческого положительного контроля ДНК ЦМВ (диапазон 1-5000 об.), А также отрицательного и холостого контролей, как описано выше.

Характеристики реципиентов трансплантата вместе с их серологическим статусом по ЦМВ до трансплантации показаны в таблице 1.Распространенность ЦМВ-антител увеличивалась с возрастом пациентов и чаще встречалась у реципиентов, которые не были белыми, и у пациентов, перенесших трансплантацию в центрах за пределами США или недавно перенесших трансплантацию. Более низкая распространенность среди пациентов с генетическими заболеваниями отражает их более молодой возраст, тогда как более высокая распространенность антител среди пациентов, недавно перенесших трансплантацию, отражает увеличение доли пожилых реципиентов в последние годы. Не было никакой связи между серологией CMV пациента перед трансплантацией и серологией CMV матери донора CB (данные не показаны).Всего в первый год после трансплантации было зарегистрировано 221 инфекцию ЦМВ. Частота ЦМВ-инфекции составила 23% в целом, 8% среди пациентов, у которых не было обнаружено антител против ЦМВ или которые не были оценены до трансплантации, и 41% среди пациентов с положительным результатом на антитела ( P <0,001). В пределах этих 2 категорий пациентов не было никакой связи между статусом материнских антител к ЦМВ у донора ХБ и частотой посттрансплантационной инфекции ЦМВ (рис. 2A-B). Заболеваемость ЦМВ-инфекцией после трансплантации была связана с серологией ЦМВ перед трансплантацией реципиента, этнической принадлежностью, возрастом, HLA-несоответствием, центром трансплантации и годом трансплантации, но не с серологией доноров по материнской ЦМВ.В многофакторном анализе возраст реципиента больше не был значимым, а серологические данные по материнскому ЦМВ донора оставались незначительными (таблица 2). Из трансплантированных единиц CB 2 были положительными с помощью CMV-PCR: в 1 случае у донора была положительная культура слюны, и общий анти-CMV у матери был положительным, но IgM был отрицательным. Серонегативный реципиент имел инфекцию ЦМВ на +45 день после трансплантации, которая разрешилась после лечения ганцикловиром. Во втором случае материнский IgM анти-CMV был положительным, но посев слюны не проводился.В этом случае реципиент был серопозитивным до трансплантации и умер от бактериального сепсиса на 52-й день, не выявив инфекции ЦМВ до момента смерти. Все другие единицы CB, предоставленные для трансплантации исследуемым реципиентам, были отрицательными по результатам ПЦР. Удаление 2 реципиентов, получивших CB, который был положительным по CMV-PCR, не повлиял существенно на результат многомерного анализа (данные не показаны).

Таблица 1.

Характеристики реципиента пуповинной крови и серология на ЦМВ перед трансплантацией

9147 9142 5 лет1412 9227 9142.001 трансплантация
.
.
Серология перед трансплантацией
.		 . .
.
Характеристики пациента
.		 № всего
.		 Отрицательно,%
.		 Не подлежит оценке,%
.		 Положительно,%
.		 п.
.
Возраст <.001
0–1 год 247 5214 1412 5214 275 55,6 3.6 40,7
6-11 лет 296 50,0 1,7 48,3
12-17 лет14 14814 148
18 и старше 255 38,8 0,8 60,4
Диагностика 001
Лейкемия / лимфома 809 47,2 0,5 52,3
Генетический 304 52,614 52,614 89 43,8 1,1 55,1
Прочие 19 63.2 0,0 36,8
Этническая принадлежность * <.001
9022
Другое 525 42,1 5,3 52,6
Расположение центра трансплантологии
США 965 51,4 4,0 44,6
За пределами США 256 37,9 256 37,9 4,3 4,3 0,01
1993-1999 784 51.4 4,5 44,1
2000-2004 437 43,5 3,4 53,1
9147 914		 47,3
9147 9142 5 лет 6022001 9227

9

9227 9147 9147 9 0,01

.
.
Серология перед трансплантацией
.		 . .
.
Характеристики пациента
.		 № всего
.		 Отрицательно,%
.		 Не подлежит оценке,%
.		 Положительно,%
.		 п.
.
Возраст <.001
0–1 год 247 5214 1412 5214 275 55,6 3,6 40,7
6-11 лет 296 50.0 1,7 48,3
12-17 лет 148 42,6 0,7 56,8
18 или старше,4
Диагноз <0,001
Лейкемия / лимфома 809 47.2 0,5 52,3
Генетический 304 52,6 14,8 32,6
MDS / SAA14 9147 9147 9147 9147 9147 9147
Другое 19 63,2 0,0 36,8
Этническая принадлежность *
Белый 679 53,8 3,2 43,0
Прочее 525 42,1 525 5,3

9142 914 центр		 .001
США 965 51.4 4,0 44,6
За пределами США 256 37,9 4,3 57,8
4127
1993-1999 784 51,4 4,5 44,1
2000-2004 437 43.5 3,4 53,1
Всего
 1221
 48,6
 4,1
 47,3
Таблица 2.

Многомерный анализ заболеваемости ЦМВ после трансплантации ХБ

914 9149 9140-8,5)2 за пределами США14
Характеристика
.
№
.
ОР (95% ДИ)
.
п.
.
Реципиент перед трансплантацией ЦМВ-антитело
Отрицательный 634 Ссылка
<.001
Возраст получателя
0–1 год 246 Ссылка
1,0 (0,7-1,5),9
12 лет и старше 392 1,2 (0,8-1,8),5
Этническая принадлежность получателя 70004 *
Белый 678 Артикул
Не белый 524 1.4 (1.06-1.9) .017
Расположение центра трансплантологии
США 954 Справочная информация
1,6 (1,2-2,1) .004
Год трансплантации
1993-1999 775 427 1.5 (1.1-2.0) .004
Несоответствие HLA †
0 6714 3,0 (1,3-6,9) 0,011
2-3 714 2,8 (1,2-6,3) 0,017
Материнские антитела к ЦМВ донора пуповинной крови
IgG 668 0.96 (0,7-1,3),8
IgM 42 1,4 (0,7-2,8),3
Эквивокальный 7 0,8 (0,2-3,2).
Отрицательный
 485
 Каталожный номер
914 9149 9140-8,5)2 за пределами США14
Характеристика
.
№
.
ОР (95% ДИ)
.
п.
.
Реципиент перед трансплантацией ЦМВ-антитело
Отрицательный 634 Ссылка
<.001
Возраст получателя
0–1 год 246 Ссылка
1,0 (0,7-1,5),9
12 лет и старше 392 1,2 (0,8-1,8),5
Этническая принадлежность получателя 70004 *
Белый 678 Артикул
Не белый 524 1.4 (1.06-1.9) .017
Расположение центра трансплантологии
США 954 Справочная информация
1,6 (1,2-2,1) .004
Год трансплантации
1993-1999 775 427 1.5 (1.1-2.0) .004
Несоответствие HLA †
0 6714 3,0 (1,3-6,9) 0,011
2-3 714 2,8 (1,2-6,3) 0,017
Материнские антитела к ЦМВ донора пуповинной крови
IgG 668 0.96 (0,7-1,3),8
IgM 42 1,4 (0,7-2,8),3
Эквивокальный 7 0,8 (0,2-3,2).
Отрицательный
 485
 Каталожный

Рисунок 2.

Заболеваемость ЦМВ-инфекцией после трансплантации. Кумулятивная частота посттрансплантационной ЦМВ-инфекции у реципиентов, которые были отрицательными или неоцененными (А) или положительными по ЦМВ-антителам (В) до трансплантации: взаимосвязь со статусом материнских антител донора пуповинной крови к ЦМВ. Относительный риск (ОР) и значимость (Р) оценивались с помощью регрессии Кокса.

Рисунок 2.

Заболеваемость ЦМВ-инфекцией после трансплантации. Кумулятивная частота посттрансплантационной ЦМВ-инфекции у реципиентов, которые были отрицательными или неоцененными (А) или положительными по ЦМВ-антителам (В) до трансплантации: взаимосвязь со статусом материнских антител донора пуповинной крови к ЦМВ. Относительный риск (ОР) и значимость (Р) оценивались с помощью регрессии Кокса.

ЦМВ-инфекция после трансплантации была связана с тяжелой (3-4 степень) острой РТПХ (ОР = 1.7, 95% доверительный интервал [CI] = 1,3-2,2; P <0,001). Кроме того, среди пациентов, перенесших трансплантацию (n = 855), пациенты с посттрансплантационной ЦМВ-инфекцией (n = 194) имели более высокий риск вторичной несостоятельности трансплантата, чем пациенты без ЦМВ-инфекции (7,2% против 2,2%, соответственно; P = 0,002). Среди зарегистрированных ЦМВ-инфекций 63% проявились только при обнаружении вируса в крови. В целом, ЦМВ был зарегистрирован как причина или способствующая причина смерти у 6,3% из 693 реципиентов, которые умерли и имели зарегистрированную причину смерти (38 не сообщаются).

Тридцать три из 47 младенцев с положительным результатом посева слюны имели ПЦР-положительный CB с помощью внутренней ПЦР (случаи 1-33, Таблица 3), все подтверждены повторным тестированием (20, также протестированные с помощью ПЦР-анализа Roche, подтвердили положительный результат. ). ДНК ЦМВ обычно обнаруживалась как в плазме, так и в ДНК, полученной из лейкоцитов. Внутренняя ПЦР (включая вложенную ПЦР) дала отрицательный результат у 14 младенцев с положительным посевом (случаи 34-47; 9 случаев также были протестированы и оказались отрицательными с помощью анализа Roche).Один образец, который изначально был положительным только при анализе ПЦР в плазме, не мог быть повторно протестирован для подтверждения. Трое из новорожденных с положительным посевом и отрицательным результатом ПЦР родились от матерей с отрицательными антителами к ЦМВ (случаи 35–37). У одного ребенка с отрицательным результатом ПЦР (случай 40) был однояйцевый близнец (одна плацента), у которого посев слюны и CB-PCR были отрицательными. Таким образом, всего 33 младенца были признаны имеющими врожденную ЦМВ-инфекцию, подтвержденную CB-ПЦР (0,12% младенцев, участвовавших в исследовании). ЦМВ-инфекция, подтвержденная ПЦР, была обнаружена у 22 из 11 649 младенцев в период планового тестирования, матери которых были положительными по общему количеству антител (0.19%) и 7 из 184 младенцев, прошедших рутинное тестирование на антитела IgM, матери которых были положительными по IgM анти-CMV (3,8%, P <0,001). CB-ПЦР (включая вложенные) дала отрицательный результат как в лейкоцитах, так и в плазме у всех 94 контрольных младенцев с отрицательным посевом.

Таблица 3.

Младенцы с положительной культурой на ЦМВ: ПЦР-ПЦР пуповинной крови и материнские антитела против ЦМВ

914 920 9020 90 201 914 P 914 9141 2-пол. 91474 P 9022 P 914 914 912 ND 914 912 ND 914 912 ND 40 9122 1:80 P2 1:8022 9142 N 90222 N 9022 914 914 914 N 914 N141214 9227 43 91 412 1: 160 9227 9227 9227 9227 9227

471412
.
Пуповинная кровь CMV-PCR
.		 . . .
.
Серология матери
.		 .
. Внутренний PCR
.		 . Рош ПЦР
.		 . . Суммарные антитела против CMV . Общий титр антител против ЦМВ .
№ дела.
.		 WBC
.		 Плазма
.		 WBC
.		 Плазма
.		 IgM
.
.
.
1 P P P P P P 1:80
2 P P P P P P P P 1:20
3 P P P P P P 1: 160
P P P P P P P 1: 160
5 P P P P N P P P P N P 1: 160
7 P P P P P P 1:80
8 P P P P P P P 1: 320
9 P P P P N P 1: 160
10 P P P 1: 160
11 P P P P N P 1:80
P п. п. п. п. 1:40
13 P P P N P 1: 640
14 P P P N N 9022
15 P P N P N P 1: 640
16 P14 N P P P P P 1: 160
17 P N P P P P 1: 160
18 N P 1:80
19 P P P P N P 1: 320
20 P N P N N 902 P P ND ND N P 1: 320
22 P P ND
23 P N ND ND N P 1: 160
24 P

27		 ND P 9022 P 1:40
25 P P ND ND N P 1: 320
26 P P ND ND N P P P P ND ND N P 1:80
28 P P ND ND P P P
29 P N / P * ND ND P P 1:10
30 P ND ND P 1:40
31 P P ND ND P P 1: 160
32 P P ND ND N P P ND ND P P 1:40
34 N N N P N 35 N N N N N N 0
36 N N N
37 N N ND ND N N 0
38 N N N N P P 1:20
14 3912 N N P 1:20
40 N N N N N P 1:40
N N N N P 1:40
42 N N N N N 92 N N N N N P
44 N N ND ND N P 1: 320
45 N N P 1:80
46 N N ND ND N P 1:80 N
 ND
 ND
 N
 P
 1:20
914 920 9020 90 201 914 P 914 9141 2-пол. 91474 P 9022 P 914 914 912 ND 914 912 ND 914 912 ND 40 9122 1:80 P2 1:8022 9142 N 90222 N 9022 914 914 914 N 914 N141214 9227 43 91 412 1: 160 9227 9227 9227 9227 9227 9227

471412

.
Пуповинная кровь CMV-PCR
.		 . . .
.
Серология матери
.		 .
. Внутренний PCR
.		 . Рош ПЦР
.		 . . Суммарные антитела против CMV . Общий титр антител против ЦМВ .
№ дела.
.		 WBC
.		 Плазма
.		 WBC
.		 Плазма
.		 IgM
.
.
.
1 P P P P P P 1:80
2 P P P P P P P P 1:20
3 P P P P P P 1: 160
P P P P P P P 1: 160
5 P P P P N P P P P N P 1: 160
7 P P P P P P 1:80
8 P P P P P P P 1: 320
9 P P P P N P 1: 160
10 P P P 1: 160
11 P P P P N P 1:80
P п. п. п. п. 1:40
13 P P P N P 1: 640
14 P P P N N 9022
15 P P N P N P 1: 640
16 P14 N P P P P P 1: 160
17 P N P P P P 1: 160
18 N P 1:80
19 P P P P N P 1: 320
20 P N P N N 902 P P ND ND N P 1: 320
22 P P ND
23 P N ND ND N P 1: 160
24 P

27		 ND P 9022 P 1:40
25 P P ND ND N P 1: 320
26 P P ND ND N P P P P ND ND N P 1:80
28 P P ND ND P P P
29 P N / P * ND ND P P 1:10
30 P ND ND P 1:40
31 P P ND ND P P 1: 160
32 P P ND ND N P P ND ND P P 1:40
34 N N N P N 35 N N N N N N 0
36 N N N
37 N N ND ND N N 0
38 N N N N P P 1:20
14 3912 N N P 1:20
40 N N N N N P 1:40
N N N N P 1:40
42 N N N N N 92 N N N N N P
44 N N ND ND N P 1: 320
45 N N P 1:80
46 N N ND ND N P 1:80 N
 ND
 ND
 N
 P
 1:20

Все матери 33 младенцев с подтвержденной ПЦР инфекцией ЦМВ были положительными по общему анти-ЦМВ, 79% — с высоким титром (≥ 1:80).Только 11 из них были положительными по IgM анти-ЦМВ. Среди контрольных матерей, напротив, 63 (67%) были анти-CMV-положительными ( P <0,001), только 30% имели высокие титры ( P <0,001) и только одна с IgM ( P ). <0,001). 14 матерей, у которых инфекция ЦМВ у младенцев не была подтверждена с помощью ПЦР, были подобны матерям контрольной группы по распространенности антител к ЦМВ, титру и распространенности анти-ЦМВ IgM. Все матери в этом исследовании были протестированы на ДНК ЦМВ с помощью собственного ПЦР-анализа.ДНК ЦМВ была обнаружена (только с помощью вложенной ПЦР) в ДНК, полученной из лейкоцитов от 6 матерей: у 5 был ребенок с подтвержденной ПЦР инфекцией ЦМВ, а шестой был положительным по культуре, но отрицательным по данным CB-PCR.

Среди 184 матерей с IgM анти-CMV у 176 были младенцы с отрицательным посевом слюны, а среди 76 матерей с сомнительной реактивностью на IgM все младенцы имели отрицательный посев. CB был протестирован на ДНК ЦМВ с помощью ПЦР в 246 из этих отрицательных по культуре случаев (170 из них 176 с IgM-положительной матерью и все 76 с сомнительным IgM) и 492 контрольных (246 от матерей с IgG, но без анти- IgM антител). CMV и 246 от матерей без обнаруженных антител).ДНК ЦМВ была обнаружена с помощью ПЦР в 5 образцах CB, 2 — с помощью собственной ПЦР и анализов Roche и 3 — только с помощью анализа Roche (все подтверждено повторным тестированием). Все 5 ПЦР-положительных образцов были взяты от новорожденных, рожденных от матерей с антителами IgM к ЦМВ, 4 — с высоким общим титром антител к ЦМВ (≥ 1:80). Если у этих ПЦР-положительных младенцев была врожденная ЦМВ-инфекция, несмотря на их отрицательный результат посева слюны, то у младенцев, рожденных от IgM-положительных матерей, действительно произошло до 13 инфекций, 7 из которых были обнаружены посевом и ПЦР, от 2 до 5 — только ПЦР (для всего 9-12 обнаружено с помощью ПЦР), и 1 — только с помощью культивирования.Если это так, то от 22% до 42% ПЦР-положительных инфекций среди младенцев от IgM-положительных матерей в этом исследовании были пропущены при посеве слюны.

Это первое исследование, в котором оценивалась связь между серологией доноров ХБ на антитела против ЦМВ и посттрансплантационной инфекцией ЦМВ у реципиента, а также оценивались альтернативные стратегии скрининга доноров ХБ на ЦМВ. Как и в предыдущих исследованиях реципиентов костного мозга (КМ) или ГСК периферической крови, инфекция ЦМВ была значительной причиной посттрансплантационной заболеваемости и смертности.У пациентов с ЦМВ-инфекцией, например, была повышенная частота вторичной недостаточности трансплантата, возможно, по крайней мере частично из-за миелосупрессии, связанной с противовирусной терапией. 20,21 Также, как сообщалось в предыдущих исследованиях, ЦМВ-инфекция была тесно связана со статусом ЦМВ-антител перед трансплантацией реципиента. Этническая принадлежность реципиента и несоответствие HLA были независимо связаны с риском ЦМВ-инфекции после трансплантации, как и центр трансплантации и год трансплантации.Связь с несоответствием HLA может быть связана с более высокой частотой острой GVHD у реципиентов несоответствующих единиц CB. 10 Связь с годом трансплантации может отражать улучшенный диагноз с недавно внедренными анализами на основе ПЦР.

В отличие от исследований трансплантации костного мозга, посттрансплантационная ЦМВ-инфекция у реципиентов ХБ не имела обнаруженной связи с донорской серологией (т. Е. Статусом антител к ЦМВ у матери-донора). 22,23 Даже когда мать донора была IgM-положительной по анти-ЦМВ (те, кто подвергался наибольшему риску рождения ЦМВ-инфицированного ребенка на основании посева слюны и CB-ПЦР), не было обнаружено связи с посттрансплантационным ЦМВ, хотя эта группа был относительно небольшим в нашем исследовании. Таким образом, серологические данные донора по материнскому ЦМВ были плохим предиктором передачи ЦМВ реципиентам при трансплантации CB, поддерживая мнение о том, что единицы CB не нужно исключать для трансплантации на основании только серологических результатов донора по материнскому CMV.

Наше исследование выявило ожидаемую низкую частоту врожденной ЦМВ-инфекции у доноров ХБ (0,12% при положительном посеве слюны и подтвержденной CB-ПЦР), что находится в нижней части ранее сообщенных диапазонов. Низкая частота врожденной ЦМВ-инфекции может предсказывать более низкую общую частоту посттрансплантационной ЦМВ-инфекции у реципиентов ХБ, чем у реципиентов трансплантатов ВМ / периферической крови. Действительно, частота встречаемости у реципиентов без антител составляла всего 8% (предположительно, почти все были получены из какого-либо источника, кроме трансплантата CB).Заболеваемость среди реципиентов с положительной реакцией на CMV (41%) также была ниже, чем сообщалось в некоторых предыдущих исследованиях реципиентов трансплантата BM. 1,20,23 Однако сравнение с историческими показателями должно проводиться с осторожностью из-за возможных различий в диагностических методах, профилактике ЦМВ или из-за того, что трансплантаты костного мозга были истощены Т-клетками. В недавнем исследовании, например, Chalandon и его коллеги 23 сообщили о высокой частоте посттрансплантационного CMV у CMV-антител-положительных реципиентов неманипулированных трансплантатов BM от анти-CMV-отрицательных доноров (81%).Напротив, частота встречаемости была только 33% у реципиентов истощенных Т-лимфоцитами трансплантатов от отрицательных доноров. Однако количество реципиентов в их исследовании было относительно небольшим, и они были отобраны из-за отсутствия серьезных посттрансплантационных осложнений. Тем не менее, их наблюдение неспособности передать ЦМВ-специфические Т-клетки памяти от этих доноров и, как следствие, трудности с установлением первичного иммунного ответа, необходимого для защиты пациента, поднимает вопрос о том, как функция Т-клеток при ХБ может повлиять на риск посттрансплантационной ЦМВ-инфекции. .На такие вопросы лучше всего ответят параллельные проспективные исследования со стандартизованными определениями случаев.

У большинства младенцев-доноров ХБ в этом исследовании, имевших положительный посев слюны, была подтверждена инфекция путем обнаружения ДНК ЦМВ в ХБ с помощью ПЦР. Однако некоторые предполагаемые инфекции не были подтверждены с помощью ПЦР, и наши данные предполагают, что у младенцев с положительным посевом с отрицательным ПЦР CB, скорее всего, был ложноположительный посев слюны.У одного такого младенца, например, был однояйцевый близнец, у которого был посев слюны и отрицательный результат CB-PCR. В 3 других случаях у матери не было обнаруживаемых анти-CMV. Более того, тот факт, что материнская серология (распространенность IgM и общий титр антител) для этой группы младенцев была аналогична таковой для контрольных животных с отрицательным посевом, подтверждает этот вывод. Ложноположительный посев слюны мог произойти при загрязнении образца слюны вагинальными выделениями матери или по более тривиальным причинам, таким как маркировка, технические или канцелярские ошибки. 24 Посев слюны также мог пропустить некоторые врожденные ЦМВ-инфекции. Среди младенцев с отрицательной культурой, которые предположительно относятся к группе высокого риска (мать с положительной реакцией на анти-CMV IgM), мы обнаружили от 2 до 5 возможных инфекций, обнаруженных с помощью ПЦР (в зависимости от анализа), и, как и младенцы с подтвержденными инфекциями, все, кроме одного имел высокий титр материнских антител. Ложноотрицательный посев может произойти по техническим причинам, таким как неадекватный сбор образцов, недавнее кормление ребенка, потеря жизнеспособности ЦМВ во время хранения или транспортировки, или по тривиальным причинам, таким как маркировка, технические или канцелярские ошибки. 25 Возможность дополнительных ложноотрицательных культур среди младенцев, матери которых были положительными по антителам, но отрицательными по IgM, не может быть исключена, даже если они не были обнаружены с помощью ПЦР, из любой контрольной группы из исследования 2. Даже если целых 40% врожденные инфекции были пропущены при посеве (как это могло произойти у младенцев с IgM-положительными матерями), прогнозируемая распространенность ложноотрицательных посевов у исследуемых младенцев, матери которых IgG-положительны, оценивается ниже 0.1%. Однако размер выборки в нашей контрольной группе с положительным IgG / отрицательным иммунитетом был достаточен только для определения уровня положительности ПЦР 1,5% или выше с достоверностью 95%.

Положительная прогностическая ценность врожденных ЦМВ-инфекций, подтвержденная CB-ПЦР, составила 3,8% (7/184) для младенцев, рожденных от IgM-положительных матерей, что несколько ниже, чем показатель 8,3%, сообщенный Roback et al, 12 и только 0,2 %, когда мать была полностью положительной по анти-ЦМВ (независимо от статуса IgM).Эти данные согласуются с нашим наблюдением о том, что материнская общая и / или IgM-положительная реакция сами по себе также были плохими предикторами передачи ЦМВ от CB к реципиентам трансплантата. Таким образом, стратегия скрининга, основанная на положительности антител у матери донора, неоправданно исключает большое количество единиц CB, подавляющее большинство из которых не имеет риска передачи ЦМВ реципиентам. Важно отметить, что хотя у младенцев от матерей с положительным IgM-антителом к ​​цитомегаловирусу распространенность ЦМВ-инфекции выше, чем у младенцев от матерей с положительным IgG-статусом, наши данные демонстрируют, что при скрининге только на анти-CMV материнские IgM можно пропустить две трети инфекций.Этот результат неудивителен, поскольку IgM является только временно положительным после острой ЦМВ-инфекции, а ЦМВ также может передаваться от матери к младенцу, когда латентная инфекция реактивируется во время беременности, часто без выработки анти-ЦМВ IgM. 10,26-28

Если тестирование доноров ХБ на наличие ЦМВ-инфекции остается обязательным для FDA, несмотря на его низкую распространенность у новорожденных и несмотря на то, что традиционные серологические методы скрининга не очень информативны при ХБ, потребуется практическая стратегия обнаружения вируса, которая требует учитывать специфичность и чувствительность, а также стоимость и логистику.Хотя посев ЦМВ слюны или мочи младенца считается «золотым стандартом» для выявления врожденной ЦМВ-инфекции, он требует сбора образца, отдельного от продукта CB, что увеличивает риск ошибок при сборе образцов, что является возможным объяснением причин. некоторые из ложноположительных и ложноотрицательных культур в нашем исследовании. Само тестирование трансплантата CB устраняет этот источник ошибки. Обнаружение ДНК ЦМВ в ХБ методами на основе нуклеиновых кислот, как показано в этом исследовании, может быть надежным, чувствительным и специфичным с тем преимуществом, что они используют ДНК, относительно стабильную молекулу, а не зависят от сбора образца, который точно получает и сохраняет жизнеспособный вирус.Кроме того, ПЦР может быть проведена ретроспективно на хранящихся образцах до выпуска блока CB для трансплантации. Тот факт, что подтвержденные врожденные ЦМВ-инфекции были ограничены младенцами от матерей с положительными антителами, предполагает потенциальную стратегию скрининга, основанную на тестировании матерей на антитела к ЦМВ с последующим предварительным тестированием единиц CB на ДНК ЦМВ с помощью ПЦР, когда мать является положительной на антитела, независимо от ее статус IgM анти-CMV. В настоящее время любая стратегия выявления инфекции как таковой у донора ХБ, будь то посевы или анализы на основе ДНК, однако, затруднена из-за отсутствия одобренного FDA анализа для скрининга доноров ХБ.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *