ПЦР, вместо Манту у детей, что показывает у человека, почек, посев, как сдавать

Показанием к проведению анализа мочи на туберкулез является подозрение на наличие патологии. Нередко подобная диагностика требуется людям, которым нельзя делать пробу Манту или туберкулиновый тест из-за наличия противопоказаний. Чтобы исследование полимеразной цепной реакции дало правильные результаты, важно подготовиться к сдаче биологической жидкости.

Подготовка к анализам

ПЦР мочи на туберкулез может применяться вместо Манту у детей и взрослых для уточнения диагноза. Важно сдать первую утреннюю порцию урины, полученную до приема пищи, употребления жидкостей. Как и на общий анализ мочи, на бактериоскопию требуется средняя порция (около 50-100 мл). Предварительно важно за 1-2 суток ограничить употребление в пищу моркови, свеклы, черники и прочих красящих продуктов, которые могут придавать моче нехарактерный для нее цвет. Кроме того, запрещено употребление алкогольных напитков, вступление в половое сношение.

Женщинам необходимо дождаться окончания менструации.

Как сдавать мочу

Предварительно следует тщательно промыть половые органы. Кроме того, женщинам при обильных выделениях рекомендуется вставлять во влагалище тампон: это поможет избежать искажения результатов. Емкость для сбора биологической жидкости должна быть чистой. Рекомендуется приобрести специальные стерильные пластиковые контейнеры в аптеке.

Трогать емкость руками изнутри не следует (так можно занести в нее бактерии, из-за которых результаты исследования будут искажены), после сбора мочи сразу закрыть крышкой.

Рекомендуется начать испражняться в унитаз, после чего подставить контейнер, собрать требуемое количество жидкости. Завершать мочеиспускание следует тоже в унитаз. Моча должна быть доставлена в лабораторию не позже, чем через 2 часа после сбора; в противном случае могут начаться реакции, из-за которых исследование будет неточным.

Суть и техника проведения анализа

Если Манту ребенку или взрослому проводить запрещается, в качестве диагностического метода используется ПЦР на туберкулез, анализ крови, флюорография. Анализ мочи на микобактерии туберкулеза помогает обнаружить возбудителей патологического процесса при их наличии, требуется для подтверждения или опровержения диагноза. Обнаружить палочку Коха возможно несколькими способами: бактериоскопическим, бактериологическим и посредством биологической пробы. Каждая из методик имеет преимущества и недостатки; выбор осуществлять должен специалист.

Бактериоскопический анализ мочи по Цилю-Нильсену

Поскольку бактерии погибают в среде с высокой кислотностью, для их обнаружения берутся реактивы, окрашивающие неустойчивые структуры. Первым делом для обесцвечивания применяется серная кислота. После используют раствор метиленового синего. Все структуры синеют; исключение составляют лишь приобретающие малиновый оттенок патогенные микроорганизмы.

Туберкулез — не приговор! Наша постоянная читательница порекомендовала действенный метод! Новое открытие! Ученые выявили лучшее средство, которое моментально избавит вас от туберкулеза. 5 лет исследований!!! Самостоятельное лечение в домашних условиях! Тщательно ознакомившись с ним, мы решили предложить его и вашему вниманию. Читать далее >>

Недостатками подобной методики являются затруднения с очищением мочи от посторонних примесей, которые могут становиться причиной искажения данных. Исследование покажет более точные результаты, если урина будет взята с использованием катетера.

Бактериологическое исследование

Такой способ диагностики туберкулеза представляет собой культивацию на питательной среде выпавшего осадка. Минусом методики является высокая длительность ожидания результатов. Сроки могут варьироваться в зависимости от выбранной среды: при выборе кровяной ожидание составляет примерно 1 неделю, для картофельной увеличивается до 1-1,5 месяцев.

Анализ по Нечипоренко

С помощью данного анализа можно выяснить, имеется ли в организме инфекционно-воспалительный процесс. Не всегда однако он показывает наличие палочек Коха при туберкулеза легких, ПЖ и других внутренних органов. По этой причине исследование дополняют другими. Анализ по Нечипоренко позволяет установить общую численность эритроцитов, лейкоцитов и белковых клеток в сданном образце биологической жидкости.

Биологическая проба

Считается самым достоверным методом. Осадок из мочи вводится в брюшную полость или подкожно животному (чаще крысе либо морской свинке). Затем за грызуном наблюдают на протяжении 1 месяца. Если человек болен, животное также будет заражено, вскоре погибнет. При этом будут наблюдаться очаги инфекции. Выяснить, заразилось ли животное, можно и раньше, сделав ему анализ крови или пункцию из лимфатических узлов. Такой способ применяется нечасто, поскольку часто у лаборатории отсутствует возможность к его проведению.

Эффективность методов

Биологическая проба позволяет определить наличие палочек Коха в урине в 100% случаев.

Общий анализ мочи при туберкулезе не считают информативной методикой, поскольку изменения наблюдаются лишь у 60% больных. Чаще всего таким способом удается обнаружить туберкулез почек. Не слишком информативен и анализ по Нечипоренко: он не позволяет выявить, какие бактерии присутствуют в урине, указывает лишь на наличие воспаления, которое не всегда бывает вызвано туберкулезом.

Бактериоскопическое исследование более информативно, позволяет установить наличие возбудителей в детском или взрослом организме с вероятностью до 80%.

Посев мочи на туберкулез обладает большей информативностью. Из-за слишком долгого ожидания его часто заменяют на ПЦР мочи: эта методика позволяет установить наличие микобактерий даже при отсутствии почечных изменений, при поражениях легких.

ПЦР диагностика туберкулеза — суть метода, плюсы и минусы

Полимеразная цепная реакция (далее ПЦР) — это высокоточный метод молекулярно-генетического исследования материла, который позволяет выявить у человека различные инфекционные заболевания и установить генотип возбудителя.

ПЦР для выявления различных заболеваний стала применяться в самом конце прошлого века. Первооткрывателем этого метода исследования является американский биохимик Кэри Муллис. Свое открытие он сделал в 1983 году. Но еще несколько лет понадобилось, чтобы доработать метод.

Суть метода

С помощью ПЦР-диагностики можно обнаружить фрагменты чужеродного ДНК в любой жидкой среде организма. На анализ могут быть взяты такие жидкости:

• Кровь.
• Слюна.
• Мокрота.
• Выделения из половых органов.
• Смывная жидкость бронхов.
• Желудочный сок.

Лечащий врач сам определяет, какую биологическую жидкость лучше взять на анализ при конкретном заболевании.

ПЦР-диагностика позволяет не только обнаружить микрофрагменты чужеродной ДНК, но и определить к какому конкретному виду она относится. То есть с помощью ПЦР можно не только точно установить возбудителя заболевания, но и выяснить к какому виду он принадлежит.

Процесс анализа ПЦР — очень сложный. Он состоит из нескольких этапов:

1. Сначала нужно обнаружить фрагменты вредоносной ДНК в предоставленном образце.
2. Копирование фрагмента ДНК. Маленького участка ДНК для анализа недостаточно, поэтому его копируют. Нуклеиновая кислота может копироваться в пробирке с помощью фермента полимеразы (вне живого организма). В пробирке образуется множество клонов, то есть происходит цепная реакция. Весь процесс происходит в три этапа под воздействием различных температур.
3. Когда генетического материала становится достаточно для исследования, тогда возбудитель определяется обычными методами.

Метод ПЦР очень точен и может выявить наличие любого возбудителя по небольшому фрагменту ДНК или РНК.

ПЦР-исследование туберкулеза

ПЦР-анализ на туберкулез является самым информативным методом диагностирования этого заболевания. Относительно туберкулеза этот метод позволяет не только установить наличие микобактерий в организме, но и определить к какому виду они принадлежат.

Результат ПЦР диагностики может быть простой и расширенный. В простом результате указывается только наличие/отсутствие микобактерии. Расширенный результат дает представление о дополнительных параметрах протекания заболевания. Правильно понять, что написано в результате анализа ПЦР может только фтизиатр.

Показания для проведения ПЦР-исследования туберкулеза

ПЦР-диагностика туберкулеза не проводится всем без исключения. Это объясняется дороговизной реактивов и недоступностью проведения исследования в некоторых отдалённых районах (в таких местах пользуются другими методами диагностики).

Показаниями для проведения ПЦР-исследования являются:

• Длительный контакт с больным туберкулезом.
• Беременность. ПЦР крови на туберкулез является самым быстрым и безопасным методом для беременной женщины.
• Экстренная ситуация. Например, необходимость срочного оперативного вмешательства, при котором нужно точно установить наличие/отсутствие туберкулеза в организме.
• Аллергическая реакция на туберкулиновые пробы.
• ВИЧ-инфекция.
• Невозможность диагностирования заболевания другими способами, при наличии явных признаков туберкулеза.
• Неоднозначные симптомы, которые не позволяют создать четкую клиническую картину заболевания (болезни верхних дыхательных путей, сопровождающиеся большим количеством мокроты, кровохарканьем и пр.).

Метод ПЦР, при всей своей сложности и дороговизне, проводится и расшифровывается в течение нескольких часов. Что делает этот метод золотым стандартом при диагностике туберкулезной инфекции.

Забор материала

Забор материала — это первый этап при выполнении ПЦР-исследования. Для того, чтобы выполнить качественный анализ, нужно соблюдать определенные правила по сбору материла:

• Для ПЦР мокроты на туберкулез нужно тщательно провести туалет полости рта. Делать это нужно вечером и утром перед анализом. Все это время не есть. Вечером выпить муколитическое средство для лучшего отхождения мокроты.
• Перед сдачей крови на ПЦР нужно не употреблять пищу в течение 8 часов. Лучше всего производить забор крови утором натощак. Курить перед забором крови также нельзя. Кровь берется из вены на локтевом сгибе руки в стерильную пробирку. В эту же емкость добавляется антикоагулянт, чтобы кровь оставалась жидкой. Смешивать антикоагулянт с кровью нужно очень аккуратно, не делая резких движений. Если кровь была взята не в лабораторных условиях, то она должна быть предоставлена лаборанту до истечения пятичасового срока. Иначе результат может быть не точным.
• Моча собирается в стерильную емкость утром, до приема пищи. Перед сбором мочи необходим тщательный туалет промежности.
• Остальные виды жидкостей (смывы с бронхов, спинномозговая жидкость) может собрать только специалист в условиях стационара.
• Перед забором жидкостей на ПЦР-исследование запрещено принимать некоторые препараты (например, прием некоторых антибиотиков нужно прекратить за две недели до забора материала).
• Требования к лаборатории, в которой проводится забор анализов на ПЦР очень строгие. Лаборатория должна быть стерильна, чтобы не произошло перекрестное загрязнение материала. В этом случае результаты могут быть ложноположительными.

ПЦР-тест на туберкулез — высокоточный информативный анализ. И требования к его проведению крайне строгие. Чтобы анализ получился, нужно соблюдать регламент.

Требования к ПЦР-лаборатории

Для работы в ПЦР-лаборатории приглашаются специально обученные врачи: бактериологи, вирусологи, микробиологи. Все они прошли дополнительное обучение для работы на сложном оборудовании.

Лаборатория должна иметь лицензию на выполнение работ связанных с бактериологически-опасными вирусами и бактериями.

В самой лаборатории должны быть выделены такие рабочие зоны:

• Зона приемки и сортировки проб.
• Зона подготовки проб. В этом помещении выделяются нуклеиновые кислоты из образцов материала.
• Зона проведения реакционных проб.
• Зона для учета результатов и расшифровки анализов.

Все помещения располагают последовательно. Допуск в эти зоны разрешен только работающим там сотрудникам, которые при входе соблюдают правила личной защиты от бактерий и вирусов.

Лучше, если есть возможность расположить лабораторию в отдельно стоящем здании с собственной системой вентиляции.

В лаборатории соблюдаются стерильные условия работы, чтобы избежать перекрестного загрязнения проб. Даже если один фрагмент чужеродной ДНК попадет в исследуемый материал, ПЦР его размножит, и анализ получится ложноположительным.

В каждой зоне лаборатории имеется свой набор оборудования и посуды для проведения исследований. Также имеются свои холодильники, которые не могут быть использованы в других целях, кроме хранения материала конкретной зоны исследований.

Использованные расходные материалы и остатки биологического материала уничтожаются специальными способами, в соответствии с инструкциями.

Плюсы ПЦР-диагностики

ПЦР-тест на туберкулез имеет множество плюсов, которые делают этот метод диагностики все более востребованным:

• Срок проведения. Несмотря на сложность проведения анализа, он готовится намного быстрее других лабораторных методов диагностики туберкулеза (около пяти часов). Это свойство анализа ПЦР становится особенно важным, когда анализ необходимо провести экстренно.
• Анализ ПЦР абсолютно безопасен и может проводиться беременным женщинам и детям.
• ПЦР-исследование можно сделать, когда по каким-то причинам нельзя выполнить другие методы диагностики.
• С помощью ПЦР-диагностики можно провести исследование любой биологической жидкости на выбор. В некоторых случаях это имеет большое значение.
• Позволяет обнаружить возбудителя на любой фазе заболевания. Даже после проведенного лечения, сохранившиеся остатки ДНК мертвых микобактерий будут обнаружены.
• Высочайшая чувствительность этого метода позволяет обнаруживать в биологическом материале даже единичные фрагменты ДНК микроорганизмов.
• Метод ПЦР позволяет не только обнаружить присутствие заболевания, но и может определить генотип возбудителя, отличив его от похожих микроорганизмов.
• ПЦР-исследование очень эффективно при рецидивирующем течении заболевания.
• Благодаря высочайшей чувствительности, анализ ПЦР может распознать микобактерии в организме человека, когда он только недавно инфицировался туберкулезом, задолго до появления клинических симптомов.

Казалось бы, метод ПЦР-диагностики содержит в себе только плюсы, но это не так.

Минусы ПЦР-диагностики

Минусы этого метода исследования тоже существенны. При выборе метода исследования туберкулеза это также стоит учитывать:

• Это дорогостоящий метод исследования. Для проведения ПЦР-диагностики нужна специально-оборудованная лаборатория. Оборудование для таких исследований стоит очень дорого, и не во всякой лаборатории оно имеется. В крайнем случае, можно обратиться в платную лабораторию.
• Сразу же после проведенного лечения метод ПЦР применять не рекомендуется. В крови пациента некоторое время сохраняется небольшое количество живых и мертвых микобактерий. Если провести анализ в этот период, он покажет ложноположительный результат.
• При мутациях микобактерий, анализ будет недостоверным, так как нормальная ДНК не сможет синтезироваться.
• Для ПЦР-исследования имеет значение правильный выбор биологической жидкости на анализ.
• Сверхчувствительность. Это тот случай, когда достоинство метода становится его недостатком. Если при проведении анализа в биологический материал каким-то образом попадет даже единичный фрагмент чужеродного ДНК, то ПЦР его размножит, и будет получен ложный результат.

Где пройти ПЦР-исследование на туберкулез

ПЦР-лаборатория имеется только в крупных противотуберкулезных диспансерах и диагностических центрах.

Объясняется это высокой стоимостью оборудования и высокими требованиями к содержанию лаборатории (реактивы, обработка).

Медицинские чиновники не сильно переживают из-за отсутствия ПЦР-лаборатории в каком-то конкретном населенном пункте, поскольку анализы на туберкулёз можно провести другими методами (культивирование микобактерий, микроскопическое исследование).

Если в населённом пункте нет бесплатной ПЦР-лаборатории, пациент по желанию может обратиться в платное учреждение.

В последнее время ПЦР-диагностика занимает все более прочные позиции в диагностике туберкулеза и других заболеваний, отодвигая на задний план другие методы диагностики.

Микобактерии туберкулеза, определение ДНК (Mycobacterium tuberculosis, DNA) в моче

Метод определения ПЦР с детекцией в режиме «реального времени».

Исследуемый материал Моча

Доступен выезд на дом

Определение ДНК возбудителей туберкулеза: комплекса микобактерий: M. tuberculosis, M. bovis, M. bovis BCG, M. microti, M. africanum в моче методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени.

Туберкулёз (от лат. tuberculum — бугорок) – распространённое, социально зависимое заболевание человека. Болеют им и животные. Возбудитель туберкулёза открыт Р. Кохом в 1882 г. Это кислотоустойчивые аэробные бактерии (74 вида) рода mycobacterium, широко распространённые в почве, воде и у животных. У человека чаще всего возбудителем является Mycobacterium tuberculosis. Второй по частоте является Mycobacterium bovis. Оба вида очень очень устойчивы ко многим факторам внешней среды, а в организме очень долго остаются жизнеспособными и могут вызвать заболевание через многие годы после заражения. Очень важно, что микобактерии туберкулёза могут образовывать так называемые L-формы. Сохраняясь в организме, они создают противотуберкулёзный иммунитет. Длительное время туберкулёз может протекать скрыто и обнаруживаться случайно, хотя нередко уже проявляются такие симптомы, как слабость, быстрая утомляемость, субфебрильная температура, ночная потливость, а в крови – анемия и лейкопения. В настоящее время, несмотря на все достижения антимикробной терапии, туберкулёз угрожает будущему нации. Поэтому все методы диагностики, особенно его латентных форм являются крайне важными.

Существует много методов лабораторной диагностики туберкулёза: микроскопия мазка (чаще всего для этого используют мокроту), классический культуральный метод, ИФА. Всем им присущи достоинства, но и определённые недостатки, в частности, обнаружение микобактерий только в случае их достаточного количества.

В последние годы для диагностики используют полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Её высокая чувствительность позволяет обнаружить в исследуемом материале единичные клетки и даже их фрагменты ДНК. Метод исключает перекрёстные реакции и специфичность достигает 100%. ПЦР позволяет дифференцировать ограниченные и диссеминированные формы туберкулёза, особенно у детей даже при отрицательных результатах микробиологических исследований.

Аналитические показатели:

• определяемый фрагмент — специфичные участки ДНК микобактерий;
• специфичность определения — 100%;
• чувствительность определения-100 копий ДНК микобактерии в образце.

Литература

1. Макаревич А.Э. Заболевания органов дыхания – М. Высшая школа, 2000. – 368 с.
2. Jacobs D. et al. Laboratory test handbook/ Lexi-Comp./2002 — pр. 828 — 829.
   

ПЦР, вместо Манту, что показывает, почек, посев, как сдавать, у детей, какого цвета, микобактерии, легких, общий, диагностика

Туберкулезом заражаются независимо от социального статуса, возраста и места проживания. Помимо стандартных методов, таких как туберкулинодиагностика и ФЛГ, для выявления инфекции фтизиатры могут назначить анализ мочи на туберкулез.

Общие сведения

Инфицирование почек занимает второе место по распространенности после легочной формы заболевания. Преимущественно развивается у людей с запущенным поражением легких или костей в результате проникновения инфекции с кровью. Предрасполагает к оседанию бактерий в тканях мочеполового тракта нарушение уродинамики или местного кровообращения.

В норме через здоровые клубочки палочки Коха не проникают. Нахождение этих бактерий в моче становится достоверным признаком туберкулеза, что отличает его от других инфекций, для которых допустимы нижние границы присутствия.

Подготовка к анализам

Требования, которые выполняют перед тем, как сдавать ОАМ (общий анализ мочи):

• используют полученную сразу после пробуждения среднюю порцию мочи;
• материал собирают в чистую емкость в количестве 50-100 мл;
• перед сдачей моют наружные половые органы без использования моющих средств;
• полученный материал доставляют в лабораторию не позднее 10-11 часов утра (менее 2 часов после сдачи анализа).

Сбор мочи на бактериоскопию и посев проводят по тем же правилам, но более жесткие требования предъявляют к контейнерам для мочи. Они должны быть строго стерильны, поэтому не рекомендуют трогать их внутреннюю поверхность и края, а после наполнения сразу закрывать крышку. До доставки в лабораторию собранный материал хранят в холодильнике.

Перед любым анализом мочи рекомендуют в течение 1-2 дней ограничить употребление в пищу красящих продуктов: моркови, свеклы, черники.

Могут изменить показатели мочи и ее цвет: противотуберкулезные (рифампицин), мочегонные, противовирусные препараты, ацетилсалициловая кислота, витаминно-минеральные комплексы и пр.

Женщинам сдавать анализ необходимо в период отсутствия менструальных кровотечений.

В каких случаях назначают анализ

У туберкулезного поражения почек отсутствуют специфические симптомы, поэтому пациенты длительно, но без стойкого эффекта будут проходить лечение с различными урологическими или гинекологическими диагнозами:

• циститом;
• простатитом;
• пиелитом;
• пиелонефритом;
• сальпингоофоритом;
• мочекаменной болезнью.

Если же у человека уже диагностирована легочная инфекция, то при наличии симптомов поражения мочеполовой системы обязательно проводят анализ мочи на туберкулез почек трижды. Признаки заболевания, указывающие на инфицирование палочкой Коха, включают следующие жалобы:

• боль в пояснице;
• дизурия;
• выделение крови или гноя с мочой.

Исследование мочи при туберкулезе легких преимущественно не определяет каких-либо изменений, а при вовлечении в процесс тканей мочеполовой системы в лаборатории находят отклонения в показателях, которые позволяют заподозрить диагноз туберкулеза:

• pH меньше 4,0;
• увеличение количества лейкоцитов и эритроцитов;
• гвоздевидные лейкоциты в моче;
• положительная реакция на белок;
• гной в моче, особенно без бактериовыделения.

По анализу крови также выявляют неспецифичные изменения: анемию, лейкоцитоз. При этих изменениях может понадобиться дополнительное обследование пациента. У мужчин подозрением на туберкулез считают рецидивирующие симптомы поражения простаты, когда затруднено мочеиспускание, железа увеличена или сморщена, длительно выделяется гной или кровь со спермой.

Выявление туберкулеза не исключает его одновременное развитие на фоне других патологий органов мочевыделения.

Определение туберкулезной палочки

При подозрении на инфицирование почек микобактерией специалист назначит комплекс исследований, включая общие анализы крови и мочи, пробу Манту ребенку, рентгенодиагностику, УЗИ, КТ, МРТ. Но безусловным подтверждением наличия инфекции будет положительный анализ мочи на микобактерии туберкулеза.

Для обнаружения возбудителя или его антигенного материала используют следующие способы:

1. Микроскопию по Цилю-Нильсену. После обесцвечивания материала серной кислотой наносят краску метиленовую синь. Микобактерии туберкулеза при окраске приобретают малиновый цвет и выделяются на фоне синих клеток. Это обусловлено устойчивостью палочек Коха к действию кислот. Чтобы повысить точность определения, рекомендуют забор мочи катетером.
2. Люминесцентная микроскопия — при окраске ауромином палочки Коха светятся оранжево-желтым цветом. Чувствительность выше, чем при окраске по Цилю-Нильсену.
3. Бактериологическое исследование — посев мочи на питательную среду (часто используют кровяную или картофельную). Оказавшись в благоприятных условиях палочки начинают размножаться. Но это длительный процесс и может занимать от 20 дней до 3 месяцев. Можно определить резистентность к противотуберкулезным средствам.
4. Биологическая проба — основана на выявлении микобактерий в тканях морской свинки после подкожного введения ей исследуемой мочи. Это исследование требует времени: свинку усыпляют и препарируют примерно через месяц, если она не умерла ранее. Либо для более ранней диагностики животному проводят туберкулиновую пробу.
5. Полимеразная цепная реакция — с помощью чувствительных систем выявляются в моче специфичные участки ДНК палочки Коха.

В некоторых случаях проводят провокационную пробу с подкожным введением туберкулина в дозе 20-100 ТЕ или облучением кожи инфракрасным лазером. В первом случае повторные анализы мочи проводят через 24 и 48 часов и сравнивают с первоначальным, во втором — через 10 дней. Положительным считают результат, характеризующийся увеличением количества эритроцитов и лейкоцитов в моче, выделением микобактерий.

Эффективность метода

При туберкулезном поражении почек изменение общего анализа мочи встречается не более чем у 60% пациентов. Выявление микобактерий при бактериоскопии подтверждает диагноз, но специфичность этого метода не превышает 80% (чувствительность при окраске по Цилю-Нильсену — более 100000 микробных тел в 1 мл, а при люминесцентном исследовании — более 10000 в 1 мл).

Более чувствительный посев на среды, но чересчур длительный. Выигрывает перед ними ПЦР на туберкулез:

• результат получают за 4-5 часов;
• высокая чувствительность;
• определяет ДНК микобактерий в моче даже при легочном туберкулезе и отсутствии специфического процесса в почках;
• возможность определения чувствительности к лекарственным препаратам.

Могут назначить это исследование вместо Манту у детей, если подозревается внелегочной туберкулез, есть аллергия на туберкулин или организм ребенка не вырабатывает антитела на возбудителя при его наличии в организме. Но есть небольшой процент как ложноотрицательных, так и ложноположительных результатов.

Вероятность неверного отрицательного результата возрастает у пациентов, которые длительно лечили заболевания урогенитального тракта антибиотиками. Такие препараты, как фторхинолоны и аминогликозиды, подавляют рост палочек Коха, но не убивают их до конца. Даже если один метод показал отрицательный результат, диагноз туберкулеза остается вероятным, поэтому врачи используют для верификации совокупность анализов и инструментальных исследований.

что это такое за диагностика, возможно ли такое исследование крови, мочи и мокроты вместо Манту, расшифровка результатов теста

Редактор

Мария Богатырева

Врач высшей категории, преподаватель

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это молекулярно-генетическое исследование биологического материала, которое позволяет выявить ДНК возбудителя в образце.

ПЦР диагностика туберкулеза является одним из самых точных методов верификации заболевания. С его помощью можно не только выявить наличие в организме возбудителя, но и определить его типовую принадлежность. Также метод ценен для определения латентных форм болезни.

Данная статья содержит информацию о сути методики, показаниях, подготовке к исследованию и расшифровке результатов.

Показания для диагностики

Несмотря на свои очевидные преимущества (быстрота выполнения, точность) ПЦР анализ крови и других биологических жидкостей не является скрининговым методом. Причина этого – высокая стоимость исследования. Кроме того, некоторые лаборатории не имеют необходимых для проведения теста реактивов и оборудования. Поэтому проводить ПЦР на туберкулез вместо пробы Манту или рентгенографии органов грудной клетки нецелесообразно.

Выделяют следующие показания для проведения исследования:

• длительный контакт с лицом, у которого достоверно выявлен туберкулез;
• беременность;
• аллергические реакции на туберкулин;
• ВИЧ-инфекция или СПИД;
• невозможность верифицировать заболевание другими лабораторными способами (при наличии клинических признаков туберкулеза).

ПЦР является информативным, точным и безопасным методом. Особенно это актуально в случае, когда проведение стандартной диагностики противопоказано (беременность, повышенная чувствительность к туберкулину).

Помимо прочего, исследование помогает дифференцировать туберкулезные и нетуберкулезные микобактерии. Также ПЦР определяет устойчивость возбудителя болезни к различным лекарственным препаратам. В процессе исследования оценивается структура ДНК, определяются мутации, ответственные за возникновение резистентности к лечению.

Материалы, используемые для исследования

Для ПЦР диагностики могут быть использованы любые биологические жидкости.

Чаще всего исследуются:

• кровь;
• слюна;
• мокрота;
• моча;
• спинномозговая жидкость;
• выделения из половых путей;
• промывные воды желудка или бронхов.

Выбор материала зависит от формы заболевания. При подозрении на легочный туберкулез  проводится ПЦР-исследование мокроты или крови. Плевральный выпот используют для установления микобактериальной природы плевритов. Для верификации менингита, вызванного палочками Коха, применяют исследование спинномозговой жидкости. При наличии признаков поражения мочеполовой системы проводится ПЦР мочи на туберкулез.

Объем биологической жидкости зависит от ее вида. Крови требуется 8-10 мл. Для исследования мочи необходимо 50-70 мл жидкости. Для анализа мокроты берется от 10 до 20 мл бронхиальных выделений.

Проблемой ПЦР диагностики является большое количество ложноположительных результатов. Это связано с нарушением правил сбора материала и доставки его в лабораторию. Микобактерии распространены повсеместно, поэтому при нарушении санитарных норм возможна контаминация (смешение, загрязнение) образцов флоры.

Материал должен собираться в стерильную тару. Делать это нужно в специальном помещении. Важно исключить контакт контейнера или пробирки с окружающими предметами. Сразу после завершения сбора материала необходимо герметично закрыть емкость и поместить ее в холодильную установку.

Транспортировка образцов осуществляется в течение нескольких часов. Для улучшения условий хранения и доставки допустимо использование консервантов и антикоагулянтов (для крови).

Подготовка пациента

Для получения достоверных данных важна правильная подготовка к исследованию. Анализ крови сдается утром, натощак. Моча также должна быть собрана утром, в стерильный контейнер, после гигиенических процедур.

Для проведения исследования мокроты необходимо достаточное ее количество. Поэтому допустимо назначение отхаркивающих препаратов.

Памятка по сбору мокроты

Перед исследованием выделений из половых путей необходимо несколько дней воздерживаться от половых контактов. Недопустимо проведение спринцевания в этот период.

Имеют значение и медикаменты, которые употребляет пациент. Некоторые из них могут исказить результаты анализа. Перед проведением исследования необходимо обсудить правила приема и режим дозирования лекарств с врачом.

Расшифровка результатов теста

Расшифровка результатов ПЦР исследования осуществляется в течение нескольких часов. Обнаружение ДНК возбудителя в материале говорит о наличии инфекции в организме. Однако судить об активности процесса, исходя из этих данных, нельзя (исключение составляет проведение количественной ПЦР).

Если следы микобактерий в образце не обнаруживаются, можно говорить об отсутствии инфекции. В отличии от положительного, отрицательный результат следует считать надежным.

Высокая чувствительность и специфичность метода позволяет обнаружить генетический материал микобактерий даже при его низком содержании в образце.

ПЦР анализ расшифровывается автоматически. Это стало возможным благодаря введению в практику ПЦР-анализаторов. С их помощью проводится большое количество исследований в короткие сроки.

Полезное видео

ПЦР: что это такое и как устроено в этом видео:

Заключение

На сегодняшний день ПЦР является самым достоверным способом установления инфицирования туберкулезом. Исследование помогает не только выявить заболевание и провести дифференциальную диагностику, но и подобрать эффективную схему лечения. Недостаточная распространенность метода объясняется его дороговизной, необходимостью специфического оснащения и высокой долей ложноположительных результатов.

диагностика, анализ крови, вместо Манту ребенку, тест мочи, мокроты

В случае подозрения на заболевание лучше сразу сдать анализ ПЦР на туберкулез. Во время этого исследования берется кровь, которая проверяется под микроскопом. Полимерная цепная реакция все чаще стала заменять пробу Манту, чтобы выявить туберкулез.

Преимущества метода

Данный анализ уже через несколько часов определяет наличие возбудителя. Кроме того, если в организме будет присутствовать малое количество бактерий, данный метод все равно сможет их выявить.

Основным достоинством теста ПЦР являются следующие положительные моменты:

1. Болезнь выявляется в 100% случаев.
2. Специфичность ДНК МБТ высока.
3. Анализ выявляет возбудителя за 4-4,5 часа.
4. Успешно диагностируется туберкулез легких, с чем не могут справиться другие методы.
5. Возможность выявления определенного фрагмента, который содержится в данном возбудителе.

Полимерная цепная реакция дает возможность не только своевременно выявить возбудителя и начать лечение больного, она позволяет вовремя изолировать человека от общества в случае заражения. Палочка Коха — возбудитель туберкулеза — может находиться в организме где угодно. И лишь ПЦР анализ позволяет выявить ее в месте нахождения.

Исследование ПЦР также дает возможность подобрать лекарственный препарат в зависимости от чувствительности микроорганизмов.

Описание болезни

В ХIХ веке туберкулез называли чахоткой. Болезнь представляет собой инфекционное поражение внутренних органов, преимущественно легких. Туберкулез передается воздушно-капельным путем при чихании и кашле. Объектом заражения может быть как человек, так и животное.

После проникновения бактерий туберкулеза в организм болезнь длительное время может протекать в скрытой форме.

В зависимости от степени воздействия заболевшего человека на окружающих различают 2 формы заболевания:

1. Закрытая форма туберкулеза. Она не является опасной, т.к. человек не может заразить окружающих. Даже в анализах, в т.ч. и ПЦР, микобактерии заболевания не выявляются. Но все же опасность при данной форме присутствует, т.к. в любой момент закрытая форма может перейти в открытую. Такая активная форма туберкулеза может быть опасна не только для самого больного, но и для окружающих.
2. Открытая форма инфекции. При ней в биологических жидкостях человека выявляется палочка Коха. Больной туберкулезом на этой стадии несет особую угрозу для окружающих. Заразиться можно даже в том случае, если носитель тщательно следит за собой в плане гигиены.

К наиболее распространенным методам исследований, проводимых для выявления болезни, относятся:

1. Флюорография.
2. Томография грудной клетки или других пораженных мест.
3. Рентгенографическое исследование.
4. Исследование биологических материалов больного.
5. Туберкулиновая проба (Манту).

К наиболее эффективным способам выявить палочку Коха относится молекулярно-генетический анализ полимеразной цепной реакции — ПЦР диагностика туберкулеза.

Исследование на туберкулезную инфекцию

Полимеразная цепная реакция — это наиболее точный молекулярно-генетический анализ. Если произошло заражение туберкулезной инфекцией, полимерный тест исследования позволяет точно выявить ДНК или РНК возбудителя болезни. Для этого необходимо сдать кровь или другую биологическую жидкость.

Чтобы определить наличие туберкулеза, достаточно минимального количества бактерий, подойдет даже 1 клетка.

К другим преимуществам ПЦР диагностики относятся следующие:

1. При проведении данного анализа используется особый фермент, благодаря которому выявляется точное присутствие туберкулезной инфекции.
2. Анализ ПЦР особо чувствителен к микобактериям инфекции, поэтому точность диагностики приравнивается почти к 100%.
3. Уже через 3,5-5,5 часов после того, как тест проведен, можно будет узнать результаты анализов.

При таком заболевании, как туберкулез, очень важно выявить патологию на ранних ее стадиях. Поэтому тест на полимеразную цепную реакцию является наиболее информативным в этом случае. Когда бактерии только начинают атаковать, следует выявить их как можно раньше, пока их воздействие не затронуло жизненно важные функции внутренних органов.

Анализ ПЦР имеет еще 1 преимущество перед другими видами исследования: методика определяет чувствительность микроорганизмов к тому или иному лекарственному препарату, что позволяет терапии быть наиболее эффективной.

Подготовка к сдаче анализов на ПЦР

Если сдается слюна, то требуется подготовка к этому. За 12 часов перед процедурой необходимо отказаться от курения, алкоголя, приема лекарств и еды. Чистка зубов, полоскание рта различными освежителями и даже применение зубной нити запрещены. Также нельзя использовать губную помаду и жить половой жизнью. Следует ополаскивать ротовую полость кипяченой водой.

Не только туберкулез выявляется при помощи метода ПЦР. Тем же способом можно обнаружить и такие не менее серьезные недуги, как герпес, хламидии, мононуклеоз, пневмонию, бароллеоз, ВИЧ, гепатит, краснуху.

Чаще всего берется кровь из вены, но в некоторых случаях может понадобиться совершенно другой биологический материал:

1. Слюна.
2. Анализ мочи.
3. Соскоб из любой части тела.
4. Половые выделения.
5. Кал.
6. Спинномозговая жидкость.
7. Взятие мокроты из бронхов при отхаркивании.
8. Анализ слизи.

Но самым информативным методом ПЦР все-таки является анализ крови на туберкулез.

Сбор биоматериала

Несмотря на то что процедура выявления возбудителя по методу ПЦР занимает всего 4-4,5 часа, она относится к наиболее сложным видам диагностики. Многие факторы могут повлиять на точность результатов. Например, собирать образцы на исследование необходимо по определенным правилам. Основным из них является повышенная стерильность при сборе биологического материала. Поэтому данный анализ сложно проводить маленькому ребенку.

Если берется образец в качестве крови из вены, то специалист проводит анализ крови на ПЦР на туберкулез не только стерильным шприцем, но и по всем правилам соблюдения общей гигиены.

Кровь собирается в специальную пробирку и на протяжении всего исследования хранится в таких условиях, которые препятствуют ее свертываемости.

Если это анализ ПЦР мочи на туберкулез, то жидкость собирается рано утром, когда человек только проснулся. Перед походом в туалет больной принимает душ и после этого берет стерильную емкость для сбора урины.

В случае взятия соскоба с половых органов, как у женщин, так и у мужчин, вся процедура проводится в условиях медицинского учреждения.

Существуют и более сложные анализы, например взятие жидкости из спинного мозга. В этом случае все действия проводятся в условиях стационара опытными врачами.

Чаще всего прохождение анализа полимерной цепной реакции назначается в таких случаях:

1. Чтобы диагностировать болезнь в легочной ткани.
2. Чтобы выявить источник заболевания.
3. Чтобы определить болезнь за пределами легких.
4. С целью диагностики рецидивов болезни.

Последовательность выполнения теста

Диагностика туберкулеза у детей и взрослых при помощи полимерной цепной реакции проходит следующие этапы:

1. В определенных ситуациях берется различный материал на исследование. Это может быть кровь, мокрота или промывная жидкость из бронхов.
2. После этого взятый биологический материал в течение определенного времени (чаще всего это несколько минут) подвергают воздействию высоких температур (до +97°С). В результате разрушается первоначальная структура ДНК микроорганизма, которая состоит из 2 цепей.
3. После этого температура начинает снижаться, это действие называется отжигом. В это время праймер соединяется с 1 из разъединенных цепей.
4. В завершение проводится элонгация. Во время нее происходит необходимый биологический синтез существующих молекул.

Понадобится 25-30 циклов, чтобы получилось необходимое количество копий ДНК на микобактерии туберкулеза.

Для процедуры необходимо дорогостоящее оборудование, поэтому не во всех медицинских учреждениях имеется возможность проводить тест ПЦР на туберкулез вместо Манту.

Благодаря прививкам и исследованию ПЦР (вместо Манту) можно предотвратить развитие такого опасного недуга, как туберкулез. Теперь не понадобится дожидаться начала проявления болезни или делать снимки на рентгеновском аппарате. Если появляются подозрения на инфицирование, для исключения страшных последствий болезни всегда можно сделать тест ПЦР, который с максимальной точностью определяет состояние организма. В условиях реального времени такие формы диагностики, как проба Манту и флюорография, постепенно отходят на второй план по сравнению с методом ПЦР.

какие сдавать, методы диагностики, где можно сдать

Эксперты констатируют: туберкулез в России — больше, чем просто болезнь. Это — неприятное социальное клеймо, которое, помимо физических страданий, становится для заболевшего человека источником серьезного психологического дискомфорта, а иногда и вынуждает на долгие месяцы и годы отказаться от привычного образа жизни, карьеры и планов на будущее.

Лечение туберкулеза — процесс сложный и длительный, а успех во многом определяется тем, насколько своевременно было выявлено заболевание. С учетом того, что никто из нас не застрахован от заражения, крайне важно регулярно проходить профилактическое скрининговое обследование, а при малейших подозрениях на недуг — обращаться к уточняющим анализам. Лишь такое ответственное поведение убережет вас от беды.

Когда сдать анализы на туберкулез и почему не стоит с этим медлить

По мнению обывателей, туберкулезом страдают лишь неблагополучные люди, проживающие на грани нищеты, а также выходцы из мест лишения свободы. Однако такой взгляд, как отмечают врачи, не имеет ничего общего с реальностью. Пациентами фтизиатров нередко становятся и учителя, и бизнесмены, и чиновники, и даже сами доктора. Ведь ключевой фактор, приводящий к развитию заболевания, — это отнюдь не финансовое благополучие, а состояние иммунитета. Если по каким-то причинам (стресс, сопутствующее заболевание, беременность, перенесенная операция, погрешности в питании) организм ослаблен — туберкулезная палочка не упустит шанса для атаки.

Важно знать
По статистике в России ежегодно туберкулез выявляют более чем у 80-ти тысяч человек. Каждый третий заболевший погибает от этой болезни. При этом важно понимать, что 90% жителей уже инфицированы — то есть в их легких живет возбудитель заболевания. Но сильный иммунитет не дает болезни развиться, поэтому лишь 1% инфицированных столкнется с какими-либо симптомами туберкулеза.

Болезнь развивается постепенно, начинаясь в лимфатических узлах, а затем распространяясь по органам и тканям организма. Чаще туберкулез поражает легкие, однако в некоторых случаях, а также при отсутствии лечения бактерии размножаются в пищеварительном тракте, органах мочеполовой системы, костях, коже, оболочках головного и спинного мозга и даже в глазах.

Коварная особенность возбудителя заболевания — микобактерии туберкулеза — умение быстро приобретать устойчивость к антибактериальным препаратам, без которых невозможно успешное лечение. Ученые вынуждены разрабатывать все новые и новые лекарства, что в конечном итоге делает терапию дорогой, а также приводит к неизбежным побочным эффектам, таким как поражение печени. Поэтому важным этапом диагностики туберкулеза является определение чувствительности выявленного возбудителя к различным антибиотикам, это помогает врачам подобрать эффективное лечение.

В силу широкого распространения туберкулеза в нашей стране (70% от общего числа российских больных инфекционными и паразитарными заболеваниями умирают именно из-за такого диагноза) выявление зараженных микобактериями среди детей и взрослых организовано достаточно хорошо.

Так, детям и подросткам до 18-ти лет время от времени проводят туберкулиновые пробы, знакомые нам всем как реакция Манту. После достижения совершеннолетия основным методом диагностики становится флюорография, которую каждый гражданин РФ обязан проходить раз в два года, а определенные категории людей — каждый год. Без такого рентгеновского снимка вас, скорее всего, не допустят к работе: результаты флюорографии необходимо предъявлять при трудоустройстве, а в дальнейшем — повторять процедуру в ходе регулярных медосмотров. Таким образом медики стараются минимизировать количество больных туберкулезом, которые не получают лечение и заражают окружающих.

Помимо этих правил, провериться на туберкулез нужно в случаях, если у вас появились симптомы, указывающие на вероятность развития заболевания (слабость, ночное потоотделение, необъяснимая потеря веса, небольшое повышение температуры по вечерам, увеличение лимфоузлов, хронический кашель). Иногда догадка о возможной причине такого недомогания возникает у врача, но вы и сами можете пройти обследование и сдать анализы, чтобы исключить вероятность инфекции.

Какие анализы сдают на выявление микобактерии туберкулеза

Выявить туберкулез можно несколькими путями. Основной задачей диагностики в детском возрасте является определение самого факта инфицирования, ведь в этот период вероятность, что бактерия, попавшая в организм, сразу вызовет патологический процесс, значительно выше, чем у взрослых. По этой причине ведущей методикой первичного скрининга остается туберкулиновая проба.

Оценить признаки поражения легких — наиболее типичное клиническое свидетельство начала заболевания — позволяет флюорография. В случае сомнений для уточняющей диагностики врач назначит рентген — развернутую визуализацию легочной ткани.

Лабораторные анализы крови и мочи помогают «поймать» возбудителя туберкулеза или зафиксировать следы его присутствия в организме. Их назначают для окончательного установления диагноза, а также в целях уточнения степени тяжести заболевания и чувствительности микобактерии к антибиотикам.

Туберкулиновая проба-тест

Туберкулин — это смесь белков, выделенных из погибших возбудителей туберкулеза. Введение небольшого количества такого препарата под кожу вызывает реакцию иммунитета у всех людей, однако в зависимости от состояния их здоровья она проявится по-разному. Так, у пациентов, в организме которых отсутствует микобактерия туберкулеза, через двое суток после пробы останется лишь незначительный след от укола (или его не будет вовсе). Если же размер красной отметины в месте введения туберкулина больше сантиметра или в этой области на коже появился гнойник — высока вероятность, что человек заражен.

Напомним, реакция Манту — метод первичной диагностики, он не может со 100%-ной вероятностью ответить на вопрос, болен ли человек туберкулезом, но позволяет выделить группу риска, которой предстоит пройти дополнительные обследования.

Аппаратные методы диагностики

Поскольку степень инфицирования населения в России микобактериями туберкулеза очень высока, у лиц старше 18-ти лет врачи по умолчанию допускают контакт с инфекцией. Задачей становится поиск больных со скрыто протекающей инфекцией, которые не знают о своем состоянии.

• Флюорография
  Оптимальным методом массовой диагностики в этом случае была и остается флюорография. Это — фотоснимок экрана рентгеновского аппарата, который можно получить очень быстро, не подвергая при этом человека значительной лучевой нагрузке. Поэтому кабинеты флюорографии есть практически во всех населенных пунктах нашей страны, а пройти процедуру можно за считанные минуты.
• Рентген и КТ
  В случае если человек не предъявляет никаких жалоб на самочувствие, а флюорография не выявила признаков изменения легочной ткани, врачи делают заключение, что туберкулеза у пациента нет. Но для более тщательной проверки легких может быть назначено развернутое рентгенографическое исследование (когда снимки делаются не только в прямой, но и в боковой проекции, а специалист лучевой диагностики тщательно изучает каждый сантиметр изображения), а также компьютерная томография (КТ), позволяющая с наибольшей степенью достоверности выявить визуальные признаки туберкулеза и оценить степень распространения патологического процесса.

Типы лабораторных анализов на туберкулез

Некоторые из лабораторных анализов, назначаемых при подозрении на туберкулез, являются специфическими — они проводятся только при этом заболевании. Другие же вы можете пройти в рамках общего медицинского осмотра: это ценный источник информации о вашем состоянии здоровья, который способен указать на наличие инфекционного процесса.

• Общий анализ крови/мочи является диагностическим стандартом при самых разных патологиях. В случае с туберкулезом исследование крови покажет повышение уровня лейкоцитов (сдвиг лейкоцитарной формулы влево) и ускоренную скорость оседания эритроцитов (СОЭ). Изменения в анализе мочи будут наблюдаться при поражении микобактериями почек и мочевыводящих путей — в этом случае в образце обнаружатся признаки амилоидоза.
• Микроскопия мазка подразумевает поиск возбудителя туберкулеза в отделяемой при кашле жидкости — мокроте. Пациенты с подозрением на заболевание особым образом собирают мокроту в стерильную банку, после чего доставляют анализ в лабораторию. Там частицы мокроты переносят на предметное стекло и окрашивают методом по Цилю-Нильсену (при этом микобактерии туберкулеза приобретают хорошо различимый под микроскопом красный цвет, а большинство остальных микроорганизмов — синий).
• Классический культуральный метод . Если в ходе микроскопии лаборант выявил в мокроте микобактерии в достаточном количестве (более 5-ти в поле зрения), то следующим этапом лабораторной диагностики туберкулеза становится бактериологический посев образца в питательную среду. Будучи помещенными в оптимальные температурные условия, микроорганизмы быстро растут, что позволяет уточнить их вид и провести оценку чувствительности к различным типам антибиотиков.
• ИФА (метод иммуноферментного анализа) обнаруживает в крови у пациента антитела к туберкулезу, что указывает на инфицированность (но не обязательно на заболевание). Данный метод подходит в качестве уточняющего шага, а также для диагностики скрыто протекающего и внелегочного туберкулеза.
• ПЦР (метод полимеразной цепной реакции) выявляет ДНК микобактерий в различных средах — в сыворотке крови, моче, мокроте, спинномозговой жидкости и так далее. Это крайне точный метод, который с достоверностью в 100% может дать ответ на вопрос о том, присутствует ли возбудитель в конкретном органе человека. Чувствительность ПЦР так высока, что в некоторых случаях этот анализ позволяет обнаружить туберкулез даже тогда, когда все другие методики показывают отрицательный результат.
• Гистологические анализы (биопсия) подразумевают изъятие маленького фрагмента ткани из тела пациента с целью его обстоятельного микроскопического изучения. Биопсия является важным методом диагностики, особенно в ситуациях, когда исследовать биологические жидкости при помощи других анализов не представляется возможным (например, в случае вялотекущего туберкулеза костей).

Диагностика туберкулеза — сложная и крайне ответственная задача, но благодаря развитию современных медицинских технологий получить точную информацию о состоянии здоровья и ответ на вопрос «болею ли я туберкулезом?» — стало доступно каждому. При наличии малейших подозрений на инфекцию — не откладывайте визит к врачу, ведь от вашей сознательности зависит не только прогноз заболевания — но и благополучие окружающих.