С-реактивный белок (СРБ, CRP), показания к назначению, правила подготовки к сдаче анализа, расшифровка результатов и показатели нормы.
ВАЖНО!
Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.
Напоминаем вам, что самостоятельная интерпретация результатов недопустима, приведенная ниже информация носит исключительно справочный характер.
С-реактивный белок (СРБ, CRP): показания к назначению, правила подготовки к сдаче анализа, расшифровка результатов и показатели нормы.Показания для назначения исследования
С-реактивный белок (СРБ) – наиболее высокочувствительный показатель повреждения тканей при воспалении, некрозе, травме. В крови здорового человека СРБ отсутствует или выявляется в минимальных количествах. Вырабатывается он преимущественно клетками печени (гепатоцитами), как реакция на попадание в организм человека возбудителей инфекций, на травму, а также при системных заболеваниях соединительной ткани (ревматических заболеваниях).
Еще одним показателем острого воспаления является СОЭ (скорость оседания эритроцитов).
Однако СРБ более информативен, поскольку его уровень начинает расти раньше, а снижаться быстрее (при правильном лечении СРБ снижается на 6-10-е сутки, в то время как СОЭ – только на 14-28-е). Кроме того, на результаты СОЭ оказывает влияние пол пациента (у женщин показатель СОЭ выше, чем у мужчин), время суток, число эритроцитов, а на значениях СРБ это никак не отражается. Таким образом, для оценки воспалительного процесса анализ на С-реактивный белок выглядит более оправданным.
Уровень СРБ при вирусных заболеваниях повышается незначительно, поэтому его существенный рост в сочетании с повышенной температурой тела с большой долей вероятности свидетельствует о наличии бактериальной инфекции.
На короткое время С-реактивный белок может повышаться после оперативных вмешательств из-за повреждения тканей, но при отсутствии бактериального воспаления в послеоперационном периоде быстро снижается.
Тогда как присоединение бактериальной инфекции, будь то локальный процесс или сепсис, сопровождается ростом СРБ или отсутствием его снижения.Существует высокочувствительный метод определения СРБ – высокочувствительный С-реактивный белок (кардио). Исследование позволяет выявить повышение СРБ при вялотекущем, низкой степени активности воспалении внутренней поверхности сосудистой стенки, которое чревато образованием атеросклеротических бляшек.
Таким образом, анализ на С-реактивный белок в комплексе с исследованием некоторых показателей клинического анализа крови (уровня лейкоцитов, лейкоцитарной формулы и СОЭ) обычно назначают в случае повышения температуры тела, чтобы по степени их увеличения предположить вирусное или бактериальное воспаление.
СРБ определяют при болях в суставах, не связанных с травмой, для дифференциальной диагностики дегенеративных и воспалительных заболеваний – артроза и артрита. При ревматических заболеваниях СРБ исследуют для оценки активности процесса и контроля эффективности лечения.
Подготовка к процедуре
Сдавать кровь предпочтительно утром натощак, после 8-14-часового перерыва в приеме пищи. Нельзя пить соки, чай и кофе. Воду пить разрешается.
При необходимости можно сдавать анализ на СРБ через 4-6 часов после легкого приема пищи.
За 2-3 дня до исследования следует исключить физические нагрузки.
Не следует курить минимум за 30 минут до забора крови.
Срок исполнения
Анализ выполняется в течение одного рабочего дня.
Что может повлиять на результаты
На результаты исследования может повлиять целый ряд факторов:
- Интенсивные физические нагрузки, которые следует исключить за 2-3 дня до сдачи анализа, так как они могут приводить к повреждению мышечной ткани и, соответственно, повышению СРБ. Особенно это касается спортсменов и людей, регулярно посещающих спортзалы: любая травма мышц ведет к повышению уровня СРБ.
- Прием обезболивающих и жаропонижающих средств из группы нестероидных противовоспалительных препаратов может снижать реально существующий уровень СРБ за счет уменьшения выраженности воспаления. Есть данные, что подобным действием обладают и статины, применяемые для снижения уровня холестерина в крови.
- Наличие имплантов и трансплантатов в организме.
- Употребление алкоголя и/или жирной пищи накануне исследования.
С-реактивный белок (СРБ, CRP)
Для исследования берется кровь из вены. Интерпретация результатов исследования содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.
Нормальные показатели
Единицы измерения: мг/л
Нормальным считается уровень СРБ менее 5 мг/л.
При оценке сердечно-сосудистых рисков уровень высокочувствительного СРБ менее 1,0 мг/л расценивают как низкий, 1-3 мг/л – как средний, более 3 мг/л указывает на повышенный риск развития сердечно-сосудистых заболеваний в будущем.
Расшифровка показателей
Уровень С-реактивного белка в крови не зависит от пола и возраста пациента, а его повышение может быть связано с повреждением различной природы любых органов и систем организма. Конкретный диагноз устанавливается путем комплексной оценки жалоб, данных осмотра, инструментальных и лабораторных методов обследования.
Что значат пониженные показатели
Поскольку в крови здорового человека С-реактивный белок или отсутствует, или выявляется в минимальных количествах, говорить о его понижении некорректно.
Что значат повышенные показатели
Повышение СРБ до 30 мг/л может говорить о вирусных заболеваниях — ОРВИ, ротавирусной инфекции и др., обнаруживается при злокачественных опухолях, ревматических болезнях вне стадии обострения (системная красная волчанка, дерматомиозит, системная склеродермия, ревматоидный артрит и др. ).
Повышение СРБ до 100 мг/л и выше, как правило, сопутствует различным острым бактериальным инфекциям (ангине, пневмонии, аппендициту, острому холециститу, пиелонефриту и др.), обострениям хронических инфекционных заболеваний и ревматических болезней, а также различным повреждениям тканей (оперативное вмешательство, инфаркт миокарда и т.д.).
Самое значимое повышение СРБ – до 300 мг/л и более возможно при обширных ожогах и сепсисе, когда бактерии из очага поражения попадают в кровь и распространяются по всему организму.
Дополнительное обследование при отклонении показателя от нормы
Подъем температуры тела в сочетании с повышением уровня С-реактивного белка может сопутствовать генерализованным (распространенным) и любым локальным поражениям – инфекциям кожи и подкожной жировой клетчатки, респираторным и стоматологическим инфекциям, инфекциям глаз, ЛОР-органов, желудочно-кишечного тракта, сердечно-сосудистой системы, урологическим инфекциям, инфекциям центральной нервной системы, костей и суставов.
В зависимости от клинической картины, обследованием и лечением таких пациентов занимаются врачи разных специальностей – терапевты, хирурги, узкие специалисты, в том числе ЛОРы, стоматологи, гинекологи, урологи, ревматологи.
В качестве дополнительных исследований в каждом конкретном случае может понадобиться самый разнообразный спектр инструментальной и лабораторной диагностики.
Повышение уровня высокочувствительного СРБ влечет за собой определение других факторов риска сердечно-сосудистых заболеваний. Для этого выполняется анализ крови на липидный спектр, фибриноген, гомоцистеин, глюкозу, мочевую кислоту, а также ультразвуковое исследование сосудов шеи и сердца.
Источники
- Ершов А.В. С-реактивный белок в диагностике внебольничной пневмонии. Consilium Medicum, журнал. 2019, 21(3): 15-19 с.
- Хоролец Е.В., и соавт. Диагностическая значимость С-реактивного белка в генезе патологий сердечно-сосудистой системы. Журнал фундаментальной медицины и биологии. № 1. 2013. С. 23-27.
ВАЖНО!
Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.
Информация проверена экспертом
Лишова Екатерина Александровна
Высшее медицинское образование, опыт работы — 19 лет
С-реактивный белок — диагностика коронавирусной инфекции — — Статьи
Здравоохранение во всех странах мира сегодня стоит перед огромной проблемой диагностики и прекращения эпидемии коронавирусной инфекции COVID-19, вызванной вирусом SARS-CoV-2.
Определено, что у взрослых пациентов, у которых был обнаружен коронавирус COVID-19 (до 95%), была значимо повышена концентрация С-реактивного белка (СРБ), как при тяжелой, так и легкой формах заболевания. Исследования пациентов с COVID-19 показали, что уровни СРБ напрямую коррелируют с заболеванием: у тяжелобольных пациентов наблюдалось значительное повышение уровня СРБ. Количественное определение СРБ может служить достоверным диагностическим маркером тяжести, прогрессирования и исхода болезни. Так, например, в одном из исследований, которое было сосредоточено на изучении предикторов (маркеров-предсказателей) летального исхода при COVID-19, было показано, что у выживших пациентов средний уровень СРБ составлял ~ 40 мг/л, в то время как у умерших — в среднем 125 мг/л.
Важнейшее диагностическое преимущество С-реактивного белка заключается в том, что он является очень ранним маркером воспаления, возникающего при инфекции COVID-19: его концентрация повышается уже через 6-8 часов после заражения. При проникновении вируса SARS-CoV-2 в организм запускается иммунный ответ для борьбы с этим патогеном, что и приводит к повышению уровня СРБ. Другие маркеры воспаления, такие как количество лейкоцитов в крови, имеют недостаточную прогностическую способность различать инфекции бактериальной и вирусной природы.
В соответствии с Методическими рекомендациями Минздрава РФ по профилактике, диагностике и лечению новой коронавирусной инфекции, при подозрении на COVID-19 диагноз устанавливается на основании комплекса диагностических исследований, в котором СРБ является основным лабораторным маркером активности патологического процесса в легких. Повышение СРБ коррелирует с объемом поражения легочной ткани и является основанием для начала противовоспалительной терапии.
Общий биохимический анализ крови (мочевина, креатинин, электролиты, глюкоза, аланинаминотрансфераза, аспартатаминотрансфераза, билирубин, альбумин, лактат, лактатдегидрогеназа тропонин, ферритин) относится к дополнительной лабораторной диагностике COVID-19. Отклонения биохимических маркеров от нормы имеют определенное прогностическое значение, могут указывать на развитие осложнений и помогают в выборе лекарственных средств, а также в режиме их дозирования. Так, например, еще одной особенностью заболевания COVID-19 стало выраженное повышение уровня печеночных трансаминаз (АЛТ и АСТ), что может отражать вирусное повреждение печени. Показано, что повышение АЛТ и АСТ прямо коррелирует с тяжестью течения COVID-19.
Предлагаем полный перечень тестов для биохимического анализа маркеров COVID-19 в соответствии с Методическими рекомендациями Минздрава РФ по профилактике, диагностике и лечению новой коронавирусной инфекции (COVID-19), том числе наборы для количественного определения:
С- реактивный белок высокой чувствительности, иммунотурбидиметрический метод по конечной точке
Набор для количественного определения С- реактивного белка в сыворотке и плазме
HT-C1122-40 | HT-C1122-100 | |
Реагент 1 | 20 мл | 50 мл |
Реагент 2 | 20 мл | 50 мл |
АЛТ Ферментативный кинетический метод
Набор для количественного определения аланинаминотрансферазы (АЛТ) в сыворотке крови.
HT-A306-120 | HT-A306-240 | HT-A306-600 | |
| 100 мл | 2х100 мл | 500 мл |
| 20 мл | 2х20 мл | 100 мл |
АСТ Ферментативный кинетический метод
Набор для количественного определения аспартатаминотрансферазы (АСТ) в сыворотке крови
HT-A309-120 | HT-A309-240 | HT-A309-600 | |
| 120 мл | 2х120 мл | 500 мл |
| 30 мл | 2х30 мл | 125 мл |
Фотометр лабораторный медицинский модели Вiochem SA — компактный настольный полуавтоматический биохимический анализатор.
Идеальное решение для лаборатории с небольшим потоком проб. Высокая производительность и инновационный дизайн.Автоматические биохимические анализаторы различной производительности серии BioChem для выполнения широкого спектра задач в лабораториях с небольшими и средними объемами биохимических исследований.
Вернуться
Сдать анализ крови на С-реактивный белок (СРБ) в лаборатории KDL
С–реактивный белок (СРБ) — информативный показатель текущего воспалительного процесса в организме. Этот белок синтезируется печенью и является одним из маркеров острой фазы воспаления. Уровень СРБ в крови может повыситься в течение нескольких часов после начала инфекционного заболевания, травмы или в первые часы после операции. СРБ быстро реагирует на изменение динамики болезни, при выздоровлении быстро возвращается к норме.
В каких случаях назначают исследование С- РБ?
Анализ крови на С-реактивный белок обычно назначают, если есть признаки воспаления любой природы (причиной воспаления может быть вирусная или бактериальная инфекция, аутоиммунное заболевание или воспалительное заболевание кишечника). Этот тест обычно используется вместе с клиническим анализом крови. СРБ более специфичный показатель воспаления, чем СОЭ и более подвижный. Обычно при устранении причины повреждения тканей или успешном лечении инфекции он приходит в норму в течение 1-2 суток. В то же время СОЭ (скорость оседания эритроцитов) может оставаться повышенной еще длительное время. Повышение СРБ в течение продолжительного времени может наблюдаться у пациентов с ревматическими и другими аутоиммунными заболеваниями.
Для оценки риска сердечно — сосудистых событий используется тест «С — реактивный белок, ультрачувствительный».
Что именно определяется в процессе анализа?
Определяется концентрация С- реактивного белка с использованием антител к человеческому С- реактивному белку (метод основан на реакции «антиген- антитело»).
Что означают результаты теста?
Повышение концентрации С — РБ в крови может быть признаком бактериальной инфекции. Токсины бактерий – мощный активатор синтеза С- реактивного белка. Также этот маркер повышается при любом повреждении тканей (бытовой травме, операционной травме, ожогах), а также обычно повышен при инфаркте миокарда и при аутоиммунных заболеваниях. Степень повышения СРБ связана с объемом пораженных тканей или активностью воспалительного процесса. Так как это общий маркер воспаления, то оценивать его уровень надо с учетом данных других методов исследования и истории болезни пациента.
Обычный срок выполнения теста
Результат анализа крови на СРБ можно получить в течение 1-2 дней
Нужна ли специальная подготовка к анализу?
Специальной подготовки не требуется. Подробнее в разделе «Подготовка».
🧬 Зачем нужны тесты на воспаление?
Почему их назначают
По словам терапевта GMS Clinic Натальи Поленовой, весь предыдущий год врачи большинства специальностей занимались лечением одной «главной» болезни — новой респираторной вирусной инфекции, COVID-19. Это заболевание принципиально отличается от своих инфекционных предшественников риском развития быстро прогрессирующих осложнений, в том числе, опасных для жизни. И тесты на воспаление, особенно на С-реактивный белок (СРБ) играют в его диагностике очень важную роль.
«Одну из главных опасностей для жизни при Covid представляет так называемый цитокиновый шторм, — рассказывает Наталья Поленова. — Предвестниками этого шторма можно считать стойкую (в течение 5 дней) лихорадку более 38°С, снижение уровня лейкоцитов менее 3 тыс/мл, повышение уровня СРБ более 30 мг/дл, ферритина более 500 нг/мл, интерлейкина-6 более 40 пк/мл. Последний является биологически активным веществом, цитокином, непосредственно ответственным за продукцию белков острой фазы: СРБ, прокальцитонина и ферритина».
Если пациенту с коронавирусной болезнью не становится легче, а лихорадка сохраняется в течение нескольких дней, оценка уровня воспалительных маркеров в крови позволяет заподозрить риск тяжелого течения болезни. В результате врач вовремя понимает, когда нужно госпитализировать пациента, или принимает решение усилить терапию — например, назначить ему глюкокортикостероиды, антибактериальную терапию и другие лечебные мероприятия.
«Оценка параметров системного воспаления позволяет определить тактику лечения, не допустить развития тяжелых осложнений, а также оценить эффективность проводимой терапии при повторном тестировании», — заключает Наталья Поленова.
Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)
Что это такое. Анализ крови, который показывает, с какой скоростью кровяные клетки оседают на дно пробирки в течение часа. Позволяет понять, есть ли у человека скрытое воспаление. СОЭ часто назначают вместе с общим анализов крови — о нем мы писали в предыдущей статье.
Как это работает. Кровь — это клетки: красные эритроциты, белые лейкоциты и лимфоциты. Они плавают в плазме — солоноватой жидкости с растворенными в ней белками. Во время движения по сосудам все это непрерывно перемешивается, поэтому кровь напоминает красную краску. Но если оставить ее стоять в тонкой клинной пробирке-капилляре, кровь расслаивается: эритроциты и лейкоциты под действием силы тяжести опускаются на дно.
В норме клетки спускаются на дно медленно. Но если у человека началось воспаление, в его крови появляются защитные белки-иммуноглобулины и фибриноген — белок, который зашивает раны. Эти два белка прилипают к поверхности эритроцитов, так что они тонут быстрее. Если лаборант видит, что на дне капилляра преждевременно образовался красный осадок, он вправе заподозрить, что у человека скрытое воспаление. Но именно заподозрить: бывает, что СОЭ увеличивается и по другим, не связанным с воспалением причинам.
Зачем назначают. СОЭ — неспецифический анализ. То есть он позволяет сказать, что где-то в организме идет воспаление, но почему оно случилось, не объясняет. Вывод об этом может сделать только врач после осмотра пациента: чтобы понять, в чем причина воспаления, чаще всего нужна дополнительная информация.
Как правило, врачи назначают СОЭ не просто так, а если уже подозревают, что где-то идет воспалительный процесс. Чаще всего такие пациенты жалуются на головную боль, температуру выше 37°С, боль в шее, плечах или в суставах, необъяснимую потерю веса или аппетита.
«СОЭ — показатель очень неспецифический, он может повышаться во многих случаях, — рассказывает терапевт одной из клиник Москвы. — Как правило, СОЭ назначают при ревматических болезнях — это системные заболевания, при которых иммунитет атакует собственные ткани пациента. Это системная красная волчанка, ревматоидный артрит, васкулиты. По степени выраженности процесса можно судить по величине СОЭ. Если норма СОЭ обычно до 25, то при этих заболеваниях показатель может быть 40 — это говорит о средней тяжести процесса. Если СОЭ поднимается до 80, процесс протекает еще тяжелее.»
Врач уточняет, что СОЭ может быть ценным показателем, если сопоставить его результаты с данными общего анализа крови. Если у пациента внезапно, на фоне общего благополучия и «спокойного» общего анализа крови обнаруживается огромный СОЭ в пределах 80-100, это заставляет задуматься о раковой опухоли. В некоторых, достаточно редких случаях, при таком СОЭ речь может идти о воспалительных заболеваниях, нагноении — но в первую очередь врач обязан задуматься именно об онкозаболевании.
СОЭ повышается и при пневмонии. Если речь о коронавирусной болезни, то этот анализ может отчасти говорить и о степени тяжести коронавирусной пневмонии. Потому что, если СОЭ повышен чуть выше нормы, до 27-30, воспалительный процесс умеренный. Если СОЭ 45-50, воспаление выражено больше. Но СОЭ — анализ неточный, потому что он может повышаться даже при кариесе зубов, беременности и многих других состояниях. Так что при коронавирусной болезни на него ориентироваться не стоит.
На что обратить внимание при выборе лаборатории. В нашей стране и за рубежом анализ СОЭ делают разными методами. Во всем мире принят метод Вестергрена, при котором у пациента забирают 2 мл венозной крови. Этот метод считается самым надежным. В нашей стране СОЭ часто делают по методу Панченкова, когда у пациента забирают примерно 100 мкл капиллярной крови из пальца. Это проще и дешевле, но в капиллярной крови при заборе могут образовываться микросгустки, так что метод считается менее надежным.
Выбирая лабораторию, нужно обратить внимание, чтобы анализ крови на СОЭ делали именно из венозной крови по методу Вестергрена. Некоторые лаборатории пишут, что делают анализ по нему, но из капиллярной крови — скорее всего, это модификация метода Панченкова, а ее надежность никто не проверял.
Как правило, пациентам, которые сдают кровь по ОМС, то есть бесплатно, исследование проводят по методу Панченкова. Поэтому имеет смысл заранее уточнить у доктора, который направил на анализ, устроит ли его такой результат.
Как подготовиться. За рубежом считается, что специально готовиться к анализу не нужно. Но в нашей стране принято сдавать анализ в первой половине дня и натощак, в крайнем случае — как минимум через три часа после последнего приема пищи — считается, что так анализ будет точнее, потому что в крови не будет ничего «лишнего».
Как понять результат. В норме СОЭ отличается у людей разного пола и возраста, а еще зависит от того, каким методом выполнялся анализ. В целом, показатели похожи, но диапазон «нормы», который охватывает метод Вестергрена, шире, чем при методе Панченкова — в основном потому, что пробирка-капилляр, который используют в первом методе, длиннее, чем та, которую применяют во втором.
У здоровых взрослых мужчин моложе 60 лет СОЭ по методу Вестергрена должен находиться в пределах 2-15 мм/час, а у здоровых небеременных взрослых женщин — в пределах 2-20 мм/час. СОЭ повышается на 0,8 мм/ч каждые пять лет: у мужчин до 20, у женщин — до 30 мм/ч. У беременных женщин СОЭ повышается с 4 месяца беременности, а к моменту родов может достигать 40-50 мм/час — и это совершенно нормально.
СОЭ может быть как повышенным, так и пониженным. Высокий СОЭ, то есть 60-100 мм/ч и более — признак серьезных проблем: это может быть что угодно, от тяжелой бактериальной инфекции и ревматизма до опухолей и височного артериита. Умеренное повышение СОЭ, то есть 20-60 мм/ч, тоже может говорить об инфекции, а еще — об анемии, беременности или старении. Выявить точную причину можно только вместе с врачом.
При коронавирусной болезни измерять СОЭ тоже очень важно. Рост этого показателя может свидетельствовать о том, что к вирусу присоединилась бактериальная инфекция. Резкое падение СОЭ при COVID-19 тоже может быть признаком серьезного осложнения. Например, синдрома активации макрофагов — иммунологического нарушения, которое может возникать у больных коронавирусной болезнью детей.
Низкий СОЭ может указывать на повышенную вязкость крови. Такое бывает, например, при полицитемии, когда эритроцитов в крови становится слишком много, у людей, которые принимают нестероидные воспалительные препараты, и у спортсменов с высокими физическими нагрузками. Разбираться с низким СОЭ тоже нужно вместе с врачом.
Анализ на С-реактивный белок (СРБ)
Что это такое. Анализ венозной крови, при котором в образце определяют концентрацию С-реактивного белка. Это исследование точнее указывает на воспаление, чем СОЭ, потому что С-реактивный белок появляется в крови исключительно при воспалении.
Как это работает. Печень вырабатывает С-реактивный белок в ответ на призыв иммунных клеток, которые столкнулись с какой-то проблемой — от бактериальной или вирусной инфекции до раковых клеток. При встрече с мертвыми или умирающими клетками белок связывается с ними и запускает еще один защитные механизм — активирует систему комплемента. Это означает, что в норме в крови СРБ или вообще нет, или очень мало. А если появляется — значит, где-то точно идет воспаление.
Зачем назначают. Хотя СРБ — более надежный маркер воспаления, чем СОЭ, сам факт его наличия в крови ничего не говорит о причинах воспаления, поэтому для диагностики он не подходит. Как правило, анализ назначают для уточнения диагноза или для контроля лечения: например, если у больного COVID-19 уровень СРБ больше 10 мг/л, то это, наряду с другими признаками, может говорить о среднетяжелом течении болезни.
«СРБ — показатель более точный, чем СОЭ, — говорит другой специалист клиники Москвы — он отражает степень выраженности именно бактериального воспаления. Если у пациента высокие лейкоциты и высокий СРБ, это достоверно говорит о том, что у него бактериальная инфекция, которую нужно лечить антибиотиками».
При пневмонии показатель СРБ будет отражать степень поражения легких. Норма — от 0 до 6. Если у человека обычная простуда, он будет в пределах 10-12. Но если СРБ, например, в пределах 100-300, речь, скорее всего, идет о серьезной пневмонии.
«Если у человека подтверждается пневмония на рентгене или КТ, по мере выздоровления СРБ будет падать, — объясняет другой врач. — При этом бывают клинические состояния, когда у человека, который недавно перенес коронавирусную болезнь, сохраняется остаточная температура в пределах 37,1-37,2°С. Если СРБ при этом нормальный, это говорит о том, что на самом деле пациент выздоровел. А если СРБ высокий — человека нужно долечивать».
Как подготовиться. Как к СОЭ
На что обратить внимание при выборе лаборатории. Нормальный уровень СРБ зависит от метода, которым определяли белок. Если метод стандартный, то у всех людей СРБ должен быть в пределах 0-10 мг/л. А если метод высокочувствительный (hs-CRP), то уровень белка должен быть меньше 3 мг/л. Высокочувствительный анализ стоит дороже, но нужен не всегда. Поэтому, если врач назначил это исследование, имеет смысл уточнить, какой именно анализ нужен.
Как понять результат анализа. В норме СРБ не должен быть высоким. Однако понять, почему он повысился, можно только вместе с врачом. Например, СРБ может держаться на уровне от 3 до 10 мг/л при беременности, малоподвижном образе жизни и курении — а может из-за диабета, пародонтита или наследственных заболеваний.
Уровень от 10 до 100 может говорить и об инфаркте миокарда, и о бронхите. А если уровень больше 100 — это могут быть и обширные травмы, и бактериальные и вирусные инфекции.
Однозначно об острых бактериальных инфекциях говорит только очень сильное повышение уровня СРБ — больше 500 мг/л. Но это не означает, что, если уровень СРБ меньше, то бактериальной инфекции нет. Понять, так это, или нет, могут помочь дополнительные обследования: например, бактериальный посев. Без дополнительной информации и консультации с врачом сказать что-то определенное о причине повышения СРБ очень тяжело.
Прокальцитониновый тест
Что это такое. Анализ крови, при котором в образце определяют концентрацию белка прокальцитонина. Это исследование точнее, чем СОЭ и СРБ, потому что с высокой степенью вероятности подтверждает, что воспаление вызвали именно болезнетворные бактерии, а не другие причины. Однако стоит прокальцитониновый тест дороже, чем другие исследования, так что врачи обычно начинают с более простых и бюджетных тестов. При этом тест не позволяет понять, какие именно бактерии вызывают воспалительную реакцию.
Как это работает. В норме прокальцитонина в крови практически нет. Однако в ответ на вторжение бактерий почти все клетки тела начинают усиленно создавать этот белое, так что его уровень в крови резко повышается. Скорее всего, уровень прокальцитонина в крови растет в ответ на бактериальные яды, которые они выделяют в процессе жизнедеятельности — так что при вирусной инфекции, травмах и атаке паразитических грибков уровень прокальцитонина повышается совсем немного.
Пока исследователи не совсем понимают, какую роль играет прокальцитонин в противобактериальной обороне. Но сам факт повышения позволяет использовать уровень прокальцитонина в крови в качестве достаточно надежного маркера бактериальной инфекции.
Зачем назначают. Чтобы надежно отличить бактериальную инфекцию от вирусной. Например. при обычной, неосложненной коронавирусной болезни уровень прокальцитонина в крови находится в пределах нормы.
Если концентрация прокальцитонина вырастает, значит, к вирусной инфекции присоединилась бактериальная, и настала пора назначать антибиотики. Прокальцитониновый тест применяют для контроля за состоянием пациентов, которые лечатся в больнице — например, при тяжелой форме COVID-19.
«Прокальцитонин в амбулаторной практике используют редко, — рассказывает другой специалист. — В моду он вошел недавно, с началом эпидемии коронавирусной болезни. Считается, что он предсказывает ее тяжелое течение. Но на самом деле этот тест пришел из реаниматологии — он указывает на сепсис, то есть на заражение крови. Самостоятельно этот тест делать не нужно».
Как подготовиться. Людям, которые лечатся дома, прокальцитониновый тест практически не назначают. Но в целом правила подготовки такие же, как при СОЭ и СРБ.
Как понять результат анализа. Появление прокальцитонина в крови — всегда недобрый знак, даже если уровень белка поднялся незначительно. Умеренно повышенный уровень прокальцитонина — от 0,15 до 2 нг/мл — у взрослых людей может говорить о местной легкой или среднетяжелой бактериальной инфекции, аутоиммунной реакции или тяжелой почечной недостаточности. Если уровень прокальцитонина поднимается выше 2 нг/мл, речь идет о бактериальном заражении крови, то есть сепсисе, тяжелой бактериальной инфекции вроде менингита, или о раковой опухоли щитовидной железы.
Важно запомнить
- Тесты на воспаление — СОЭ, СРБ и прокальцитониновый тест — помогают определить, есть ли в организме скрытое воспаление
- Самый чувствительный анализ из этой тройки — прокальцитониновый тест — позволяет отличить вирусную инфекцию от бактериальной, но не позволяет выяснить, какие именно бактерии спровоцировали инфекцию. Как правило, его используют в больнице для контроля за состоянием тяжелых пациентов
- Менее чувствительные тесты — СОЭ и СРБ — позволяют понять, есть воспаление или нет. СРБ делает это точнее, чем СОЭ, но обходится дороже, поэтому его редко назначают «на всякий случай». Тем не менее, и СРБ и СОЭ часто назначают пациентам, которые выздоравливают дома
- Делать тесты на воспаление в рамках чек-апа бессмысленно: у здоровых людей они не дадут никакой интересной информации. А если и дадут, самостоятельно разобраться с результатами будет очень тяжело. Назначение тестов на воспаление лучше оставить врачу — он определит, какой именно тест нужен, поможет разобраться с результатами и назначит грамотное лечение.
С-реактивный белок и мочекаменная болезнь
С- реактивный белок является классическим белком острой фазы, который используется в качестве лабораторного маркера при воспалении и повреждении тканей. Концентрация СРБ в крови имеет высокую степень корреляции с активностью воспалительного процесса, поэтому анализ на СРБ часто сравнивают с измерением СОЭ в клиническом анализе крови. Оба показателя резко возрастают в начале заболевания, но СРБ появляется и исчезает раньше, чем меняется СОЭ.
Для определения С-реактивного белка используют метод с нормальной чувствительностью и высокочувствительный метод. Нормальные значения СРБ в крови зависят от чувствительности метода: при использовании метода с нормальной чувствительностью уровень СРБ составляет от 0 до 5 мг/л; при заказе высокочувствительного определения СРБ норма сужается до 0 – 1 мг/л. Метод с нормальной чувствительностью используют для оценки степени воспаления, тогда как высокочувствительный метод применяют кардиологи для оценки риска кардиоосложнений, связанных с повышенным холестерином.
ИМХО, урологи не используют анализ крови на СРБ при обследовании пациентов с почечной патологией. Тем не менее, в литературе есть много данных о применении СРБ при ведении пациентов с мочекаменной болезнью. Анализ крови на СРБ использовали
• для определения вероятности спонтанного отхождения камня мочеточника,
• для определения вероятности развития инфекционных осложнений перкутанной нефролитотрипсии,
• для определения необходимости срочного дренирования почки,
• для научных целей.
Подробнее про каждый из пунктов можно прочитать в карусели. Напишите в комментариях, видите ли вы практическую пользу от измерения уровня СРБ крови у больных с мочекаменной болезнью.
№1. СРБ для определения вероятности спонтанного отхождения камня мочеточника.
Небольшие камни дистального отдела мочеточника отходят самостоятельно, поэтому очень важно разделить пациентов на тех, у кого камень отойдет сам, и тех, кого лучше оперировать, не выжидая месячного срока. В статье 2020 года, опубликованной Jain A. в журнале Urolithiasis, проанализированы результаты ведения 185 пациентов с почечной коликой, обусловленной камнем дистального отдела мочеточника от 4 до 10 мм. За 4 недели наблюдения камни отошли у 122 пациентов. Вероятность спонтанного отхождения камня уменьшалась при размере камня больше 6.7 мм и уровне СРБ больше 4.1 мг/л.
Прогностическая ценность уровня СРБ в определении вероятности отхождения камня объясняется взаимосвязью концентрации СРБ с утолщением стенки мочеточника в месте стояния камня. В статье 2016 года, опубликованной Sarica K. в журнале Urolithiasis, проанализированы истории болезни 80 пациентов с камнями уже проксимального отдела мочеточника. У 42 пациентов был нормальный уровень СРБ, у 38 пациентов – повышенным. При этом повышенные уровни СРБ тесно кореллировали с толщиной стенки мочеточника по результатам КТ
№2. СРБ для определения вероятности развития инфекционных осложнений хирургического лечения мочекаменной болезни.
В 2019 году авторы Hu, Lu и Wei опубликовали статью в журнале J. Endourol., посвященную предикторам лихорадки после перкутанной нефролитотрипсии (ПНЛ). Всего проанализировано 556 пациентов, лихорадка развилась у 123 пациентов. Среди прогностических факторов особо важны положительная культура мочи и соотношение СРБ к альбумину более 0.8. Другое исследование от 2003 года было направлено на изучение риска инфекционных осложнений после ДЛТ (автор Yilmaz E, журнал Eur Urol.) Процедуру ДЛТ получили 75 пациентов со стерильной мочой перед процедурой. Им взяли посев крови через 1 час после операции, а посев мочи сразу после операции, через сутки и через неделю. В итоге, положительный посев крови пришел у 4 из 75 пациентов, а положительный посев мочи у 10 из 75 человек. При этом положительная культура мочи достоверно коррелировала с повышенным уровнем СРБ в крови. Важно отметить, что сама по себе процедура ДЛТ не приводит к повышению уровня СРБ. В этом можно убедиться после прочтения статьи Wolff JM и Mattellaer P в 1997 году.
№3. СРБ для определения необходимости срочного дренирования почки
Весьма сомнительно, что принимать решение о необходимости дренирования почки следует, опираясь на уровень СРБ. Но Angulo JC сделал такую попытку и опубликовал результаты своего исследования в журнале Urology в 2010 году. В исследовании приняли участие 110 пациентов с почечной коликой, 29 из них выполнено экстренное дренирование почки. Средний уровень СРБ у больных, которые потребовали дренирования, составил 140 мг/л. Средний уровень СРБ у больных, которым дренирование не потребовалось, был существенно ниже – 15 мг/л. Точка «отсчеки» составила 28 мг/л. Авторы делают вывод, что определение уровня СРБ у пациентов с почечной коликой является объективным и полезным инструментов для решения вопроса о стентировании мочеточника, даже более ценным, чем выраженность лейкоцита или уровень сывороточного креатинина.
№4. СРБ для научных исследований.
В свое время кардиологии экспроприировали анализ крови на С-реактивный белок для определения кардиориска. Некоторые урологи захотели повторить этот успех и провели свое собственное расследование на тему взаимосвязи между уровнем СРБ и распространенностью мочекаменной болезни. Результаты были опубликованы Shoag J, Eisner BH в журнале J Urol. В 2014 году. Выяснилось, что у людей от 20 до 40 лет распространенность мочекаменной болезни увеличивается по мере увеличения уровня СРБ. Взаимосвязь между камнями в почках и уровнем СРБ отсутствовала для людей других возрастных групп (40 – 60 лет, 60 лет и старше). Другое, не менее интересное исследование, было опубликовано в 2015 году Hasna A. в журнале J. Clin. Diagn. Res. Авторы изучили лабораторные показатели 30 пациентов с сахарным диабетом и мочекаменной болезнью и 30 пациентов с сахарным диабетом и чистыми почками. Были обнаружены значительные повышения уровня СРБ в случае «диабетической мочекаменной болезни», при этом остальные показатели, наподобие уровня кальция или мочевой кислоты, не отличались у обоих групп. Таким образом, сахарный диабет увеличивает вероятность мочекаменной болезни и через воспалительную реакцию.
Спасибо за внимательное чтение мини-обзора о взаимосвязи СРБ и мочекаменной болезни. Напишите в комментариях, есть ли у вас опыт назначения этого показателя при почечной колике, атаке пиелонефрита или после хирургического лечения камней в почках или мочеточнике.
Медицинские анализы — С-реактивный белок
C-reactive protein
— белок острой фазы, является показателем воспаления. Основные показания к применению: различные инфекционные заболевания, аутоиммунные заболевания, постоперационый мониторинг, оценка эффективности лечения, оценка риска развития сердечно-сосудистой патологии.
С-реактивный белок, синтезируется в печени и присутствует в крови в норме практически у всех здоровых лиц (около 1 мкг/мл) при отсутствии воспалительного процесса. Свое название белок получил еще в 1930 году благодаря тому, что он способен связывать С-полисахарид пневмококков. Состоит он из 5 субъединиц. Основным стимулятором/регулятором его синтеза являются интерлейкин-6, фактор некроза опухоли, интерлейкин-1. Обычно его концентрация повышается в крови через 6 часов после начала воспалительной реакции или повреждения тканей. При воспалении, практически любого генеза, некротическом процессе, опухолевом росте содержание СРБ в сыворотке крови значительно увеличивается. Поэтому СРБ относят к неспецифическим показателям острой фазы.
Повышение содержания СРБ является ранним признаком инфекции. Повышение содержания СРБ наиболее выражено при бактериальных, а не вирусных инфекциях. Увеличение содержания отмечается при активном ревматическом процессе, ревматоидном артрите, инфаркте миокарда, остром панкреатите и панкреонекрозе, сепсисе. Определение концентрации СРБ применяется для оценки длительности назначения антибиотиков при антибактериальной терапии. Существует корреляция между повышением СОЭ и СРБ, однако СРБ появляется и исчезает раньше, чем изменяется СОЭ.
В последнее время показана прогностическая значимость СРБ (в зависимости от его содержания в крови даже в пределах нормальных значений) в оценке риска развития сердечно-сосудистых заболеваний и связанных с ними осложнений. Для этих целей применяется метод (см. «С-реактивный белок ультрачувствительный»), который способен определять даже небольшие концентрации данного белка в сыворотке крови.
РЕФЕРЕНТНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
В сыворотке крови: до 5 мг/л.
Факторы, маскирующие повышение содержания
Стероиды, Салицилаты.
Факторы, вызывающие ложное повышение содержания
Пероральные контрацептивы.
Факторы, вызывающие повышение содержания
Беременность (III триместр), Пользование внутриматочными средствами.
Увеличение содержания
Воспаление, некроз ткани, травма. В отличие от других белков острой фазы, таких как альфа 1 — антитрипсин и гаптоглобин, СРБ не подвержен влиянию гормонов (как эндогенных, в том числе при беременности, так и экзогенных). Лечение стероидами и нестероидными противовоспалительными препаратами может значительно снижать концентрацию СРБ. По сравнению с другими белками острой фазы содержание СРБ возрастает более резко. Поэтому в клинической практике определение СРБ наиболее часто применяется в качестве белка острой фазы. Реакция СРБ на воспаление наблюдается даже у новорожденных, когда его содержание может быть особенно важны для диагностики бактериального сепсиса.
Содержание СРБ существенно не возрастает при вирусной и спирохетной инфекции. Поэтому в отсутствие травмы очень высокие значения могут указывать на наличие бактериальной инфекции. У пациентов с бактериальным менингитом очень высокие первоначальные уровни могут служить предсказанием неврологических осложнений.
Последовательное определение концентрации СРБ может быть использовано для наблюдения за эффектом антимикробного лечения. После хирургических вмешательств СРБ повышен в остром периоде, однако начинают быстро снижаться в отсутствие бактериальной инфекции. Поэтому последовательное определение СРБ в послеоперационном периоде может применяться для контроля за опасностью возникновения такой инфекции. Исследование СРБ также находит клиническое применение при таких заболеваниях, как ревматоидный артрит, системная красная волчанка, синдром васкулита, воспалительные заболевания кишечника, инфаркт миокарда.
Уменьшение содержания
Состояния с дефицитом СРБ неизвестны. Содержание у детей ниже по сравнению со взрослыми.
При интерпретации полученных данных по содержанию СРБ можно придерживаться следующих алгоритмов:
1. Для вирусных инфекций, метастазов опухолей, вялотекущих хронических и некоторых системных ревматических заболеваний характерно увеличение концентрации СРБ до 10-30 мг/л.
2. Бактериальные инфекции, обострение некоторых хронических воспалительных заболеваний,например, ревматоидного артрита, повреждение тканей (хирургическая операция, острый инфаркт миокарда) сопровождаются увеличением концентрации СРБ до 40-100 мг/л, а ряде случаев и до 200 мг/л.
3. Тяжелые генерализованные инфекции, ожоги сепсис приводят к увеличению концентрации СРБ до 300 мг/л и более.
Анализ на с реактивный белок
При наличии воспалений, инфекций, травм в организме вырабатываются белки острой фазы. Это вещества, которые «мобилизуют» защитные силы организма. К ним относится и С-реактивный белок. Он вырабатывается печенью для заживления повреждений или борьбы с инфекциями. C-реактивный белок СРБ позволяет выявить повышенный уровень этого вещества в крови и определить, что в организме развивается воспаление. Хроническое вялотекущее воспаление считается главной причиной возникновения атеросклероза, а тот, в свою очередь, способен приводить к инсульту, инфаркту, перемежающейся хромоте и прочим серьезным патологиям. Таким образом, анализ позволяет точно предсказать риск развития вышеупомянутых заболеваний.
Это недорогое исследование, доступное каждому пациенту. Поэтому даже если вы считаете себя абсолютно здоровым человеком, вы можете пройти исследование для оценки риска развития у вас сердечно-сосудистых заболеваний. Это позволит вам быть в курсе того, что происходит в вашем организме и своевременно принять меры, чтобы предотвратить возникновение патологий.
В каких случаях повышается С-реактивный белок?
В небольшом количестве С-реактивный белок вырабатывается и в организме здорового человека. Однако при наличии патологических процессов его концентрация обязательно увеличивается.
При развитии воспаления уровень С-реактивного белка в крови начинает повышаться уже через несколько часов. В ближайшие 48 часов он продолжает стремительно расти. По мере уменьшения воспаления снижается и концентрация данного вещества (это происходит также при перетекании заболевания из острой фазы с хроническую). Анализ C-реактивный белок СРБ показывает даже незначительное повышение этого вещества в крови.
Повышенный уровень С-реактивного белка бывает при
- острых или хронических инфекциях;
- сепсисе;
- сахарном диабете;
- травмах;
- обострении хронических заболеваний;
- некрозе тканей;
- нехватке витаминов или кислот Омега-3;
- наличии злокачественных новообразований;
- ожирении;
- артериальной гипертензии;
- остром панкреатите;
- нарушении гормонального фона;
- курении.
Также концентрация этого вещества в крови обязательно увеличивается после операций. При отсутствии осложнений в виде воспалительных процессов она достаточно быстро снижается. Если же развиваются осложнения, с помощью анализов их можно выявить и следить за динамикой.
Когда необходим анализ на C-реактивный белок?
Исследование назначается для выявления
- риска развития сердечно-сосудистых заболеваний;
- активности воспалительного процесса;
- риска развития осложнений у пациентов с гипертонической или ишемической болезнью;
- осложнений в послеоперационный период;
- отторжения после трансплантации органов/тканей.
Также анализ крови на с-реактивный белок необходим для оценки
- эффективности профилактики сердечно-сосудистых заболеваний;
- масштаба некроза тканей при остром инфаркте.
Как сдавать анализ на с-реактивный белок?
Исследование, как и многие другие, требует предварительной подготовки:
- За день до сдачи анализа из рациона исключают жирную и жареную пищу, отказываются от спиртного;
- Исследование проводится через 1-2 недели после прекращения приема медикаментов или до начала курса лечения. Если отказаться от употребления тех или иных лекарств нельзя, в направлении указывают названия препаратов и порядок их приема (включая дозировку).
- Примерно за день до сдачи анализов следует отказаться от тяжелых физических нагрузок.
Исследование проводится натощак, с последнего приема пищи должно пройти не менее 8 часов. Также следует отказаться от любых напитков, помимо чистой негазированной воды. Перед сдачей крови нельзя курить.
Непосредственно перед анализом не рекомендуется проходить физиотерапевтические процедуры и следующие исследования:
- УЗИ;
- ректальное;
- рентгенологическое;
- флюорография.
Исследование занимает около 1 дня. В Немецкой семейной клинике есть собственная экспресс-лаборатория. Воспользовавшись ее услугами, при необходимости вы можете получить результаты более оперативно.
Анализ сульфородамина B (SRB) в культуре клеток для исследования пролиферации клеток
96-луночные прозрачные планшеты из полистирола с плоским дном для культивирования ткани (Corning, каталожный номер: 3596)
384-луночные прозрачные полистирольные ткани с плоским дном -планшеты для культивирования (Corning, номер по каталогу: 3701)
96-луночные планшеты для ПЦР (Corning, Axygen ® , номер по каталогу: PCR-96-FS-C)
Планшеты для тканевых культур 100 мм ( Corning, каталожный номер: 430167)
1.Пробирки Eppendorf 5 мл (VWR, номер по каталогу: 89000-028)
Пробирки Falcon 15 мл (Corning, Falcon ® , номер по каталогу: 352097)
Наконечники для пипеток (Mettler-Toledo International, каталожные номера: RT-L10FLR)
Наконечники для дозаторов (Mettler-Toledo International, каталожные номера: RT-L200F)
Наконечники для дозаторов (Mettler-Toledo International, каталожные номера: RT-L1000F)
Наконечники для пипеток Matrix ™ (125 мкл) (Thermo Fisher Scientific, Thermo Scientific ™ , каталожные номера: 7445)
Интересующая линия адгезивных клеток
Соответствующая питательная среда
Стерильный резервуар для реагента (Corning, Costar ® , номер по каталогу: 4870)
Резервуар для реагента нестерильный (VWR, каталожный номер: 89094-684)
Opti-MEM ® (Thermo Fisher Scientific, Gibco ™ , каталожный номер: 31985070) или бессывороточная среда (SFM, соответствующая культура) среды перед добавлением фетальной бычьей сыворотки)
Фосфатный буферный раствор (PBS) (GE Healthcare, номер по каталогу: Sh40256)
Раствор трипсина (2.5%, вес / объем) (GE Healthcare, номер по каталогу: Sh40042.01)
Фатальная бычья сыворотка (FBS) (Sigma-Aldrich, номер по каталогу: F2442)
Трипановый синий (Sigma-Aldrich, каталог номер: T9154)
Трихлоруксусная кислота (TCA) (Sigma-Aldrich, номер по каталогу: 91228)
Натриевая соль сульфородамина B (SRB) (Sigma-Aldrich, номер по каталогу: S1402) в 1% (об. / об.) уксусная кислота
Уксусная кислота (Thermo Fisher Scientific, Fisher Scientific, каталожный номер: S25118)
10 мМ небуферированный раствор основания Трис (Sigma-Aldrich)
Вода, свободная от ДНКазы / РНКазы (Термо Scientific, Ambion ™ , номер по каталогу: AM9932)
Липофектамин RNAimax (Thermo Fisher Scientific, Invitrogen ™ , номер по каталогу: 13778150)
Миметики miRNA Mirvana (Thermo Fisher , Ambion )
молекул-предшественников miRNA — отрицательный контроль # 2 (не нацеливающая scramble miRNA) (Thermo Fisher Scientific, Ambion ™ , номер по каталогу: AM17111)
Анализ сульфородамина B (SRB) в культуре клеток для исследования пролиферации клеток
96-луночные прозрачные планшеты из полистирола с плоским дном для культивирования ткани (Corning, каталожный номер: 3596)
384-луночные прозрачные планшеты из полистирола с плоским дном для культивирования ткани (Corning, каталожный номер: 3701)
96 ПЦР-планшеты с лунками (Corning, Axygen ® , номер по каталогу: PCR-96-FS-C)
Планшеты для культивирования тканей 100 мм (Corning, номер по каталогу: 430167)
1.Пробирки Eppendorf 5 мл (VWR, номер по каталогу: 89000-028)
Пробирки Falcon 15 мл (Corning, Falcon ® , номер по каталогу: 352097)
Наконечники для пипеток (Mettler-Toledo International, каталожные номера: RT-L10FLR)
Наконечники для дозаторов (Mettler-Toledo International, каталожные номера: RT-L200F)
Наконечники для дозаторов (Mettler-Toledo International, каталожные номера: RT-L1000F)
Наконечники для пипеток Matrix ™ (125 мкл) (Thermo Fisher Scientific, Thermo Scientific ™ , каталожные номера: 7445)
Интересующая линия адгезивных клеток
Соответствующая питательная среда
Стерильный резервуар для реагента (Corning, Costar ® , номер по каталогу: 4870)
Резервуар для реагента нестерильный (VWR, каталожный номер: 89094-684)
Opti-MEM ® (Thermo Fisher Scientific, Gibco ™ , каталожный номер: 31985070) или бессывороточная среда (SFM, соответствующая культура) среды перед добавлением фетальной бычьей сыворотки)
Фосфатный буферный раствор (PBS) (GE Healthcare, номер по каталогу: Sh40256)
Раствор трипсина (2.5%, вес / объем) (GE Healthcare, номер по каталогу: Sh40042.01)
Фатальная бычья сыворотка (FBS) (Sigma-Aldrich, номер по каталогу: F2442)
Трипановый синий (Sigma-Aldrich, каталог номер: T9154)
Трихлоруксусная кислота (TCA) (Sigma-Aldrich, номер по каталогу: 91228)
Натриевая соль сульфородамина B (SRB) (Sigma-Aldrich, номер по каталогу: S1402) в 1% (об. / об.) уксусная кислота
Уксусная кислота (Thermo Fisher Scientific, Fisher Scientific, каталожный номер: S25118)
10 мМ небуферированный раствор основания Трис (Sigma-Aldrich)
Вода, свободная от ДНКазы / РНКазы (Термо Scientific, Ambion ™ , номер по каталогу: AM9932)
Липофектамин RNAimax (Thermo Fisher Scientific, Invitrogen ™ , номер по каталогу: 13778150)
Миметики miRNA Mirvana (Thermo Fisher , Ambion )
молекул-предшественников miRNA — отрицательный контроль # 2 (не нацеливающая scramble miRNA) (Thermo Fisher Scientific, Ambion ™ , номер по каталогу: AM17111)
Анализ сульфородамина B (SRB) в культуре клеток для исследования пролиферации клеток
96-луночные прозрачные планшеты из полистирола с плоским дном для культивирования ткани (Corning, каталожный номер: 3596)
384-луночные прозрачные планшеты из полистирола с плоским дном для культивирования ткани (Corning, каталожный номер: 3701)
96 ПЦР-планшеты с лунками (Corning, Axygen ® , номер по каталогу: PCR-96-FS-C)
Планшеты для культивирования тканей 100 мм (Corning, номер по каталогу: 430167)
1.Пробирки Eppendorf 5 мл (VWR, номер по каталогу: 89000-028)
Пробирки Falcon 15 мл (Corning, Falcon ® , номер по каталогу: 352097)
Наконечники для пипеток (Mettler-Toledo International, каталожные номера: RT-L10FLR)
Наконечники для дозаторов (Mettler-Toledo International, каталожные номера: RT-L200F)
Наконечники для дозаторов (Mettler-Toledo International, каталожные номера: RT-L1000F)
Наконечники для пипеток Matrix ™ (125 мкл) (Thermo Fisher Scientific, Thermo Scientific ™ , каталожные номера: 7445)
Интересующая линия адгезивных клеток
Соответствующая питательная среда
Стерильный резервуар для реагента (Corning, Costar ® , номер по каталогу: 4870)
Резервуар для реагента нестерильный (VWR, каталожный номер: 89094-684)
Opti-MEM ® (Thermo Fisher Scientific, Gibco ™ , каталожный номер: 31985070) или бессывороточная среда (SFM, соответствующая культура) среды перед добавлением фетальной бычьей сыворотки)
Фосфатный буферный раствор (PBS) (GE Healthcare, номер по каталогу: Sh40256)
Раствор трипсина (2.5%, вес / объем) (GE Healthcare, номер по каталогу: Sh40042.01)
Фатальная бычья сыворотка (FBS) (Sigma-Aldrich, номер по каталогу: F2442)
Трипановый синий (Sigma-Aldrich, каталог номер: T9154)
Трихлоруксусная кислота (TCA) (Sigma-Aldrich, номер по каталогу: 91228)
Натриевая соль сульфородамина B (SRB) (Sigma-Aldrich, номер по каталогу: S1402) в 1% (об. / об.) уксусная кислота
Уксусная кислота (Thermo Fisher Scientific, Fisher Scientific, каталожный номер: S25118)
10 мМ небуферированный раствор основания Трис (Sigma-Aldrich)
Вода, свободная от ДНКазы / РНКазы (Термо Scientific, Ambion ™ , номер по каталогу: AM9932)
Липофектамин RNAimax (Thermo Fisher Scientific, Invitrogen ™ , номер по каталогу: 13778150)
Миметики miRNA Mirvana (Thermo Fisher , Ambion )
молекул-предшественников miRNA — отрицательный контроль # 2 (не нацеливающая scramble miRNA) (Thermo Fisher Scientific, Ambion ™ , номер по каталогу: AM17111)
Анализ сульфородамина B (SRB) в культуре клеток для исследования пролиферации клеток
96-луночные прозрачные планшеты из полистирола с плоским дном для культивирования ткани (Corning, каталожный номер: 3596)
384-луночные прозрачные планшеты из полистирола с плоским дном для культивирования ткани (Corning, каталожный номер: 3701)
96 ПЦР-планшеты с лунками (Corning, Axygen ® , номер по каталогу: PCR-96-FS-C)
Планшеты для культивирования тканей 100 мм (Corning, номер по каталогу: 430167)
1.Пробирки Eppendorf 5 мл (VWR, номер по каталогу: 89000-028)
Пробирки Falcon 15 мл (Corning, Falcon ® , номер по каталогу: 352097)
Наконечники для пипеток (Mettler-Toledo International, каталожные номера: RT-L10FLR)
Наконечники для дозаторов (Mettler-Toledo International, каталожные номера: RT-L200F)
Наконечники для дозаторов (Mettler-Toledo International, каталожные номера: RT-L1000F)
Наконечники для пипеток Matrix ™ (125 мкл) (Thermo Fisher Scientific, Thermo Scientific ™ , каталожные номера: 7445)
Интересующая линия адгезивных клеток
Соответствующая питательная среда
Стерильный резервуар для реагента (Corning, Costar ® , номер по каталогу: 4870)
Резервуар для реагента нестерильный (VWR, каталожный номер: 89094-684)
Opti-MEM ® (Thermo Fisher Scientific, Gibco ™ , каталожный номер: 31985070) или бессывороточная среда (SFM, соответствующая культура) среды перед добавлением фетальной бычьей сыворотки)
Фосфатный буферный раствор (PBS) (GE Healthcare, номер по каталогу: Sh40256)
Раствор трипсина (2.5%, вес / объем) (GE Healthcare, номер по каталогу: Sh40042.01)
Фатальная бычья сыворотка (FBS) (Sigma-Aldrich, номер по каталогу: F2442)
Трипановый синий (Sigma-Aldrich, каталог номер: T9154)
Трихлоруксусная кислота (TCA) (Sigma-Aldrich, номер по каталогу: 91228)
Натриевая соль сульфородамина B (SRB) (Sigma-Aldrich, номер по каталогу: S1402) в 1% (об. / об.) уксусная кислота
Уксусная кислота (Thermo Fisher Scientific, Fisher Scientific, каталожный номер: S25118)
10 мМ небуферированный раствор основания Трис (Sigma-Aldrich)
Вода, свободная от ДНКазы / РНКазы (Термо Scientific, Ambion ™ , номер по каталогу: AM9932)
Липофектамин RNAimax (Thermo Fisher Scientific, Invitrogen ™ , номер по каталогу: 13778150)
Миметики miRNA Mirvana (Thermo Fisher , Ambion )
молекул-предшественников миРНК — отрицательный контроль # 2 (не нацеливающая скремблирующая миРНК) (Thermo Fisher Scientific, Ambion ™ , номер по каталогу: AM17111)
Сульфородамин B — обзор
Настройка и оптимизация первичных экранов
В зависимости от используемой платформы визуализации или ридера и от типа клеток первым шагом является изучение того, насколько хорошо клетки растут на различных типах многолуночных планшетов, включая время удвоения, и насколько они переносят условия анализа, а также качество. изображения или считывания, полученного с разных пластин.Цель состоит в том, чтобы создать наилучшие условия как для роста клеток, так и для качества изображения / считывания. Используя систему визуализации Discovery-1 от Molecular Devices, мы обнаружили, что оптимальная адгезия клеток и качество изображения были получены на 96-луночных планшетах Nunc со стеклянным дном. Эти планшеты были выбраны для использования на экране из-за четкости полученных изображений и способности клеток расти на стекле и оставаться прикрепленными после многократных промывок. Клетки культивировали в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM), содержащей 4 мкл M L-глутамина, 1 мкл M пирувата натрия, 1% пенициллин / стрептомицин, 1 мг / мл G418 и 10% фетальной бычьей сыворотки для полнота анализа.Для каждого типа клеток может потребоваться установить оптимальные условия роста для анализа.
Прежде чем продолжить, клетки следует протестировать на их толерантность к стандартному носителю, в котором растворены соединения из библиотеки. Обычно это диметилсульфоксид (ДМСО). Толерантность к ДМСО можно оценить в формате 96-луночного планшета, используя протокол окрашивания сульфородамином для определения жизнеспособности клеток. Порог толерантности к ДМСО имеет решающее значение при определении протоколов разведения соединений и при принятии решения о конечных концентрациях, которые следует тестировать на скрининге.Клетки обрабатывают возрастающими дозами ДМСО в течение 48 часов. Затем клетки фиксируют, окрашивают и количественно определяют с помощью окрашивания сульфородамином B, как подробно описано ниже.
- 1.
Перенесите клетки в 96-луночные пластиковые планшеты Nunc из расчета 60 000 клеток / лунку в полной среде из расчета 100 мкл мкл / лунку. Добавьте увеличивающиеся дозы ДМСО, разведенного в питательной среде, в общем объеме 50- мкл л в каждую лунку для конечных концентраций 0, 0,05, 0,1, 0,25, 0,5, 1, 2, 5 и 10% (повторите каждую концентрацию в не менее 3–4 скважин).Позвольте клеткам расти в течение 48 часов в присутствии ДМСО в стандартных условиях. На данный момент каждая лунка содержит 150- мкл объема л.
- 2.
Зафиксируйте клетки, добавив 50 мкл мкл / лунку 40% холодной трихлоруксусной кислоты (TCA) в течение 30 минут при комнатной температуре (для конечной концентрации 10% TCA).
- 3.
Декантировать среду, содержащую TCA, и промыть чашки пять раз водой. Высушите пластины на воздухе.
- 4.
Добавьте 100 мкл л SRB (0,4% сульфородамина B [SRB], 1% уксусная кислота) на лунку и окрашивайте в течение 1 часа при комнатной температуре.
- 5.
Промойте чашки пять раз 1% уксусной кислотой. Высушите пластины на воздухе (они должны быть полностью сухими).
- 6.
Экстракт SRB с 100 мк л из 10 м M Трис-основы на лунку.
- 7.
Встряхните и считайте при 520 нм с помощью планшет-ридера SpectraMax 250 от Molecular Devices или аналогичного оборудования.
Как видно на рис. 3, наши клетки были способны выжить в течение 48 часов в до 1% ДМСО. Следовательно, анализ был разработан таким образом, что соединения добавляли до конечной концентрации ДМСО 0,5%.
Рис. 3. Определение толерантности к ДМСО. Клетки, полученные из C127, обрабатывали возрастающими количествами ДМСО в течение 48 часов, и жизнеспособность клеток измеряли путем окрашивания SRB. Эти клетки способны переносить 1% ДМСО в течение 48 часов.
Среди известных ингибиторов эпигенетических путей, активных в нашей системе, бутират натрия был выбран в качестве соединения положительного контроля для скрининга из-за его стабильности в культуре клеток, низкой цитотоксичности и доступности.Различные дозы в миллимолярном диапазоне были протестированы и исследованы на экспрессию GFP в системе визуализации. Доза 25 мкл бутирата натрия M в течение 24 часов обычно использовалась в анализе (см. Рис. 2). В нашем случае, поскольку сигнал GFP не был достаточно ярким для надежного измерения на флюоресцентном ридере планшетов, изображения были получены с помощью системы визуализации Discovery-1, которая имеет более высокую чувствительность. Каждая система должна быть оптимизирована для получения сильных положительных контрольных сигналов и большого динамического диапазона обнаружения флуоресценции.Чтобы облегчить определение фокальной плоскости на системе визуализации, ядра окрашивают с помощью Hoechst 33342 (2 мк г / мл). Попадания могут быть идентифицированы путем визуального осмотра изображений на предмет экспрессии GFP или с помощью автоматических измерений интенсивности, в зависимости от надежности анализа и степени используемой автоматизации.
Мы предлагаем начать с небольших валидационных библиотек, таких как Библиотека фармакологически активных соединений (Sigma), прежде чем другие библиотеки химических и природных продуктов будут проверены в анализе.Библиотеки могут быть выбраны на основе обоснования проверки. Например, наличие химического разнообразия способствует открытию новых соединений, тогда как библиотеки структурно родственных соединений могут помочь в поиске аналогов существующих лекарств с улучшенной фармакокинетикой. Соединения добавляются в планшеты, содержащие клетки, с использованием систем обработки жидкостей, таких как Biomek FX (Beckman Coulter). Программа FX может нуждаться в модификации для прикрепленных клеток, чтобы гарантировать, что монослой не разрушается во время добавления соединений.Высота наконечника пипетки над дном лунки, скорость добавления, объем перемешивания и скорость перемешивания, возможно, потребуется оптимизировать для сохранения целостности клеточного монослоя во время добавления соединения.
Скрининг эпигенетических модуляторов осуществляется следующим образом.
- 1.
В первый день посев клеток в количестве 70000 клеток на лунку в 96-луночные планшеты со стеклянным дном Nunc (100 мкл мкл на лунку) в полной среде. Выращивайте клетки в течение ночи при 37 °, 5% CO 2 , 95% воздуха в увлажненном инкубаторе.Примечание: номер ячейки, возможно, потребуется скорректировать в соответствии с типом ячейки и временем удвоения.
- 2.
На следующее утро обработайте 96-луночный планшет в течение 24 часов следующим образом.
- а.
Колонка 1 (отрицательный контроль): добавить 50 мкл мкл 1,5% раствора ДМСО в полную среду для получения конечной концентрации ДМСО 0,5%.
- б.
Колонка 12 (положительный контроль): добавить 50 мкл л бутирата 75 мкл M на 25 мкл конечной концентрации M .
- г.
Колонки 2–11: добавьте 30 мкл л полной среды + 20 мкл мкл соединений из библиотеки химических или природных продуктов для конечной концентрации ДМСО 0,5% и 5 мкл мкл концентрации соединения. Соединения добавляются в планшеты с помощью системы обработки жидкости Biomek FX от Beckman Coulter или аналогичного устройства.
- 3.
На третий день, после 24 часов обработки лекарством, зафиксируйте клетки в среде, содержащей соединения, и окрашивайте ядра, добавляя 4% конечный формальдегид и 2 мкг г / мл конечного Hoechst 33342 для 1 ч.Промойте планшеты три раза 200 мкл л физиологического раствора с фосфатным буфером и добавьте конечный объем 100 мкл мкл / лунку для визуализации. Получите изображения или прочитайте на планшет-ридере. Для системы визуализации Discovery-1 мы рекомендуем использовать объектив Nikon Plan Fluor 20x и экспонировать в течение 600 мс по каналу флуоресцеина изотиоцианата (FITC) и 30 мс по каналу DAPI. Для каждого сигнала GFP и Hoechst можно получить четыре участка на лунку для тщательного исследования каждой лунки. Лучше всего сначала выполнить автофокусировку по каналу DAPI, получить эти изображения, а затем изображение в канале FITC без перефокусировки.Примечание: фиксация клеток и окрашивание ядер необязательны. В зависимости от используемой системы визуализации эти шаги могут значительно улучшить качество изображения.
Ряд соединений может проявлять автофлуоресценцию, что может приводить к ложноположительным результатам на экране. Чтобы обойти эту проблему, соединения должны быть скринингованы параллельно с нетрансфицированной родительской клеточной линией. Хиты, идентифицированные в анализе, можно сравнить с родительской линией клеток, чтобы определить, было ли соединение хитом или ложноположительным флуоресцентным соединением.
Сбор вишни используется для подтверждения попаданий соединений путем выбора совпадений из исходной чашки с составом и переноса на чашку, содержащую только совпадения с первичного скрининга, для повторного тестирования. Попадания на первичном экране можно отбирать с помощью роботизированной системы обработки Multiprobe от Packard и повторно оценивать в анализе для подтверждения активности. После того, как удачные соединения подтверждены экспериментами по сбору вишен, соединения тестируются во вторичных и третичных анализах. Мы рекомендуем провести повторные эксперименты по крайней мере дважды для проверки основных совпадений.
Анализ цитотоксичности клеток сульфородамина B (SRB) — Creative Bioarray
Введение
Сульфородамин B (SRB) представляет собой ярко-розовый аминоксантеновый краситель с двумя сульфоновыми группами, который может образовывать электростатический комплекс с основными аминокислотными остатками в слабокислой среде, но может диссоциировать в основных условиях. Поскольку связывание SRB является стехиометрическим, включенный краситель, высвобождаемый из окрашенных клеток после промывки, прямо пропорционален клеточной массе и может быть измерен при 565 нм.
Анализ цитотоксичности клеток сульфородамина B (SRB) широко используется для скрининга лекарственной токсичности и обнаружения пролиферации клеток в отношении различных типов злокачественных и незлокачественных клеточных линий. Кроме того, этот анализ не зависит от метаболической активности клеток и, следовательно, показывает меньшее влияние на тестируемые соединения. Описанный здесь протокол был оптимизирован для скрининга токсичности соединений по отношению к адгезивным клеткам в 96-луночном формате.
Характеристики
- Чувствительный
- Простой в использовании
- Воспроизводимый
- Отличная линейность
- Стабильная конечная точка
- Хорошее отношение сигнал / шум
Применение
Высокая производительность скрининг лекарствМатериалы
- Соответствующая питательная среда
- Трипсиновый раствор
- Диметилсульфоксид (DMSO)
- 000
- 000 Раствор для фиксации Раствор красителя SRB
- Доксорубицин
- Раствор фосфатного буфера (PBS)
- 96-луночный планшет
- Многолуночный спектрофотометр
Процедура анализа цитотоксичности клеток SRB
- 15 Процедура промывки клеток 1 клетки один раз со стерилизацией изд PBS.
2) Трипсинизируйте и вращайте клетки.
3) Добавьте 5 мл ростовой среды для диспергирования клеток и определите плотность клеток с помощью гемоцитометра.
4) Добавьте среду для роста, чтобы отрегулировать концентрацию клеток для получения подходящей плотности посева.
5) Добавьте 200 мкл клеток с рекомендуемой плотностью от 5 000 до 20 000 клеток / лунку в 96-луночный планшет. - Обработка соединения
1) Подготовьте серийные разведения ваших тестируемых соединений соответствующим образом, используя ДМСО в качестве растворителя, и добавьте соединения в экспериментальные лунки.
2) Подготовьте лунку, содержащую только ДМСО, в качестве контроля и другую лунку, содержащую только культуральную среду, в качестве фонового контроля. Кроме того, добавьте 1 мкл 20 мМ доксорубицина в лунку, содержащую клетки в качестве контроля ингибитора.
3) Инкубируйте планшет при 37 ° C в увлажненном инкубаторе с 5% CO 2 в течение 72 часов. - Фиксация клеток
1) Не удаляя культуральный супернатант, добавьте по 50 мкл раствора фиксации в каждую лунку.
2) Инкубируйте планшет в течение 1 часа при 4 ° C, затем удалите раствор и промойте лунки 3 раза.
Примечание. Промывание должно быть как можно более щадящим, чтобы не повредить монослой клеток.
3) Удалите как можно больше промывочного раствора с помощью пипетки.
Примечание. После завершения этапов фиксации клеток, промывки и сушки планшет при желании можно хранить при комнатной температуре в течение месяца. - Окрашивание SRB
1) Добавьте 45 мкл раствора SRB в каждую лунку и окрашивайте в течение 15 минут при комнатной температуре в темноте.
Примечание: SRB следует защищать от света, так как он светочувствителен.
2) После инкубации удалите окрашивающий раствор и добавьте 200 мкл промывочного раствора для промывки 4 раза.
Примечание. Стирать нужно как можно быстрее, чтобы избежать обесцвечивания.
3) Удалите как можно больше промывочного раствора с помощью пипетки и при необходимости просушите планшет на воздухе. - Солюбилизация
1) Добавьте 200 мкл солюбилизирующего раствора в каждую лунку.
2) Встряхните планшет или поместите его на шейкер на 10 мин при комнатной температуре. - Измерение
1) Измерьте OD при 565 нм.
2) Если наблюдается интенсивный цвет (> OD 3,5), вы можете использовать субоптимальную длину волны (, например, 490-530 нм), чтобы понизить показания до линейного диапазона вашего прибора. - Расчет
1) Правильный расчет путем вычитания ОП контроля, содержащего только культуральную среду (лунка фонового контроля), из показаний всех образцов.
2) Рассчитайте процент цитотоксичности, используя формулу ниже:
Ссылки
- Orellana E.A. et al. ; Анализ сульфородамина B (SRB) в культуре клеток для исследования пролиферации клеток. Bio Protoc , 2016, 6 (21).
- Vichai V. et al .; Колориметрический анализ сульфородамина B для скрининга цитотоксичности. Nat Protoc , 2006, 1 (3): 1112-1116.
Связанные разделы
Услуги сотовой связи:
Тестирование и анализы клеточной линии:
Только для исследовательских целей.Ни для каких других целей.
Sed rate (скорость оседания эритроцитов)
Обзор
Скорость седиментации или скорость оседания эритроцитов (СОЭ) — это анализ крови, который может выявить воспалительную активность в организме. Тест уровня седативности не является отдельным диагностическим инструментом, но он может помочь вашему врачу диагностировать или отслеживать развитие воспалительного заболевания.
Когда ваша кровь помещается в высокую тонкую трубку, красные кровяные тельца (эритроциты) постепенно оседают на дно.Воспаление может привести к слипанию клеток. Поскольку эти сгустки более плотные, чем отдельные клетки, они быстрее оседают на дно.
Тест уровня седативности измеряет расстояние, на которое эритроциты падают в пробирку за один час. Чем дальше спустились эритроциты, тем сильнее воспалительный ответ вашей иммунной системы.
Товары и услуги
Показать больше товаров от Mayo ClinicЗачем это нужно
Тесты на уровень седиментации могут быть полезны при оценке необъяснимой лихорадки, некоторых типов артрита и симптомов, влияющих на ваши мышцы.Кроме того, они могут помочь подтвердить диагноз определенных состояний, в том числе:
- Гигантоклеточный артериит
- Ревматическая полимиалгия
- Ревматоидный артрит
Тест уровня седативности также может помочь определить тяжесть воспалительной реакции и контролировать эффект лечения.
Поскольку тест на уровень седативного эффекта не может точно определить проблему, вызывающую воспаление в вашем теле, он обычно сопровождается другими анализами крови, такими как тест на С-реактивный белок (СРБ).
Дополнительная информация
Показать дополнительную информациюКак вы готовитесь
Показатель седативной нагрузки — это простой анализ крови. Перед обследованием голодать не нужно.
Что вы можете ожидать
Флеботомист, медсестра или фельдшер будет использовать иглу для забора крови из вены, скорее всего, из вены на вашей руке. После теста участок на вашей руке может быть болезненным в течение нескольких часов, но вы сможете вернуться к нормальной деятельности.
Результаты
Результаты вашего теста на скорость седативного воздействия будут представлены в виде расстояния в миллиметрах (мм), на которое эритроциты опустились за один час (час). Нормальный диапазон составляет от 0 до 22 мм / час для мужчин и от 0 до 29 мм / час для женщин. Верхний порог нормального значения скорости седативного воздействия может несколько отличаться от одной медицинской практики к другой.
Показатель СЭД — это одна часть информации, которая поможет врачу проверить ваше здоровье.Поговорите со своим врачом о том, что означают результаты вашего седативного эффекта в свете ваших симптомов и результатов других диагностических тестов.
Точность результатов теста
Ряд условий может повлиять на свойства крови, тем самым влияя на то, как быстро эритроциты погружаются в образец крови. Таким образом, информация о воспалительном заболевании — то, что ваш врач хочет узнать из теста на уровень седативного эффекта — может быть скрыта под влиянием других состояний.Эти усложняющие факторы включают:
- Пожилой возраст
- Анемия
- Беременность
- Проблемы с почками
- Болезнь щитовидной железы
- Некоторые виды рака, например множественная миелома
- Инфекция
Ваш врач примет во внимание возможные осложняющие факторы при интерпретации результатов вашего теста на уровень седативного эффекта.