Что такое эозинофилы в крови повышены: Ваш браузер устарел

Содержание

Подсчет эозинофилов может помочь в раннем выявлении COVID-19 у пациентов

Текущее тестирование, основанное на диагностике COVID-19 с помощью ПЦР мазка из носоглотки, остается проблемным из-за длительного времени обработки и высокого уровня ложноотрицательных результатов.

«Мы обнаружили, что отсутствие эозинофилов при исследовании крови может помочь в ранней диагностике — стойкое их снижение хорошо коррелировало с неблагоприятным прогнозом для пациента. Анализ количества эозинофилов может быть полезным инструментом при принятии решения о том, следует ли незамедлительно изолировать пациента и начинать конкретную терапию в ожидании подтверждающих результатов теста».

Muhammad M. Zaman, доктор медицины, специалист по инфекционным заболеваниям, работающий в больнице Кони-Айленда в Бруклине (Coney Island Hospital).

Исследователи сравнили результаты рутинного общего анализа крови на эозинофилы у первых 50 госпитализированных пациентов с положительным результатом на COVID-19 с результатами на эозинофилы 50 пациентов с подтвержденной инфекцией гриппа во время их обращения в отделение неотложной помощи больницы Кони-Айленд в Бруклине.

В исследовании эозинопения коррелировала с диагнозом COVID-19, а устойчивость этого снижения соотносилось с высокой степенью тяжести заболевания и низкими темпами выздоровления. Низкое количество эозинофилов (эозинопения) определяется как наличие <100 кл./мкл. Референсный диапазон обычно составляет от 100 до 400 кл./мкл.

«Известно, что количество эозинофилов обусловливается вирусными инфекциями, но мы не знали, что эта корреляция настолько значима в случае COVID-19», — говорит Dr. Zaman.

Практическая клиническая информация

Больница Кони-Айленд, входит в систему здравоохранения и больниц Нью-Йорка, обслуживает население Бруклина, штат Нью-Йорк. Был отмечен резкий рост случаев COVID-19 в марте и апреле 2020 года, тогда и были собраны данные для этого исследования.

У 60% пациентов с COVID-19 при поступлении не были обнаружены эозинофилы в периферической крови, в отличие от 16% пациентов с подтвержденным диагнозом грипп. Еще у 28% пациентов с COVID-19 не было обнаружено эозинофилов в течение 48 часов после госпитализации, у 88% не было выявлено эозинофилов во время всей госпитализации.

«При COVID-19, заболевании, у которого есть существенное совпадение симптомов с гриппом, выявление эозинопении может помочь определиться с вероятным диагнозом COVID-19», — сказал Dr. Zaman.

В общей сложности 23 из 50 пациентов в группе COVID-19 (46%) скончались. У 86% умерших пациентов (18 из 21) в группе COVID-19, с обнаруженной исходной эозинопенией, так и сохранили ее до конца, в отличии от 50% (13 из 26) выживших, у которых снижение эозинофилов было выявлено только в момент поступления, но потом благополучно нормализовалось.

«Как вы можете видеть из данных, сохраняющийся длительное время низкий уровень эозинофилов отражает тенденцию к смертности», — сказал Dr. Zaman. «Пациенты, у которых количество эозинофилов в дальнейшем повышалось, имели более благоприятные исходы болезни».

Мнение специалиста: Клинический диагноз COVID-19 подтверждается лабораторным тестированием с помощью анализа ПЦР, который остается проблемой из-за ограниченной доступности тестов, различного времени проведения и низкой чувствительности теста. Во многих больницах получение результатов анализов может занять несколько дней.

«Если пациент обращается за помощью медиков в первый день появления симптомов (обычно это пятый день после заражения), количество ложноотрицательных результатов достигает 38%», — говорит Dr. Zaman. «Это означает, что большое количество потенциально заразных пациентов не подозревают о своем истинном диагнозе, а простой анализ крови может значительно снизить число таких пациентов, а значит, и последующее распространение болезни».

У собаки повышены эозинофилы, причины появления эозинофилии

Содержание статьи

Если домашний любимец заболел, хороший хозяин сразу отвезет его в ветеринарную клинику, чтобы исключить опасные заболевания. По внешним признакам далеко не всегда можно сказать, что приключилось с собакой. Более точные данные выдает анализ крови.

Иногда он показывает повышенное количество эозинофилов. Такое состояние называется эозинофилией.

Причины заболевания

Эозинофилы — это особые лейкоцитарные клетки крови, которые способны выходить за пределы кровеносной системы и накапливаться в пораженных органах, например, в пищеварительных органах, в дыхательной системе и коже, мягких тканях.

Эти клетки вырабатываются в кроветворной системе организма, большей частью концентрируются в периферической системе кровообращения и выполняют защитную функцию, борясь с паразитарными инфекциями и другими проблемами. Но слишком высокая концентрация эозинофилов зачастую провоцирует развитие гастритов и миозитов.

Причинами развития эозинофилии служат следующие заболевания и состояния:

Сильный стресс.
Физическое воздействие: травма, ожог, обморожение и так далее.
Отравление.
Гельминтозы.
Аллергическая реакция.
Бронхиальная астма и другие болезни органов дыхания.
Сильные воспалительные процессы с образованием гноя.

Болезнь Аддисона.
Опухолевые процессы, особенно злокачественные новообразования.
Рецидивирующие болезни.

Так как причин, вызывающих изменение уровня эозинофилов, много, то установить истинное заболевание можно только при тщательном обследовании.

Основные симптомы

Признаки эозинофилии напрямую связаны с заболеванием, ее спровоцировавшим. В основном выделяются следующие симптомы:

увеличение печени и селезенки;
анемии;
увеличение лимфатических узлов;
гастриты;
расстройства пищеварения, диарея;
тошнота, рвота;
повышение температуры тела;
признаки общей интоксикации — слабость, вялость, апатичное состояние;
ухудшение аппетита;
снижение массы тела;
воспалительные состояния кровеносных сосудов;
сухость и шелушение кожи;
признаки кожных аллергических реакций;
кашель;
синюшность слизистых оболочек;

признаки глистной инвазии и многое другое.

При обнаружении подобных признаков заболевшее животное нужно отвезти к ветеринару для постановки точного диагноза и начала лечения.

Диагностика в ветеринарной клинике

Чтобы установить уровень эозинофилов, в ветеринарной клинике животному сделают полный анализ крови. Но он только лишь укажет на наличие неблагополучия, а затем нужно будет пройти комплексное обследование для выявления основной причины изменения картины крови.

Методика лечения и прогноз

Чаще всего при эозинофилии у собаки развивается специфическая форма гастрита. Больше других этому заболеванию подвержены шарпеи и немецкие овчарки. Склонность к развитию такого заболевания усиливает неправильное питание с большим количеством синтетических продуктов, наличие гельминтозов, опухолевые процессы и наличие других проблем с пищеварительными органами.

Характерными признаками эозинофильного гастрита является сильная тошнота и постоянная рвота, которые при переходе в хроническое состояние приводят к сильнейшему ослаблению и истощению животного. В результате страдает и кожный покров, шерсть пса — они становятся сухими, хрупкими, поврежденными.

Собака не просто выглядит худой — у нее плохая, тусклая и выпадающая шерсть, явно нездоровый вид.

В тяжелых случаях и при истощении пса переводят на искусственное кормление в клинике, используют специальные препараты.

При наличии заболевания важную роль играет диетическое питание. Необходимо исключить аллергию на корма. При своевременной реакции и правильной терапии прогноз положительный.

Если же меры приняты поздно или лечение велось неправильно, без консультаций с опытным ветеринаром, риск развития осложнений и перехода болезни в хроническое состояние резко увеличивается. Болезнь ослабляет пса, в результате чего он становится мишенью для множества других заболеваний, особенно инфекционной природы.

Что делать в домашних условиях

Когда питомцу становится лучше, и его разрешают забрать домой, как любому выздоравливающему, ему необходимо обеспечить спокойные условия, тепло и уют. Животное будет ослабленным, возможно, истощенным, поэтому его нужно беречь от стрессов, сквозняков и переохлаждения.

Важную роль в выздоровлении играет правильное питание и любовь хозяев. Псу нужно обеспечить легкое, но калорийное питание, натуральные продукты, покой, достаточное количество чистой питьевой воды.

Полное выздоровление и нормализация картины крови может занять много времени.

Возможные осложнения

Вид осложнения зависит от основного заболевания. При нарушениях в органах дыхания собаке грозит тяжелая пневмония, бронхиальная астма и другие болезни. Аллергические реакции могут стать причиной выпадения шерсти, воспаления кожных покровов.

Проблемы с пищеварительной системой особенно неприятны, так как собака теряет вес, слабеет, не может нормально питаться, а на этом фоне может развиться множество опаснейших заболеваний.

Наибольшую угрозу несет эозинофилия на фоне злокачественных новообразований. Раковая опухоль может давать метастазы, что способно быстро стать причиной гибели домашнего любимца.

Меры профилактики (диета)

Избежать заболевания можно, если постараться обеспечить питомцу максимально здоровые условия жизни. В первую очередь это правильное питание натуральными продуктами. Чтобы не развился гастрит, спровоцированный пищевыми аллергиями, необходимо применять только качественные корма.

Если нет опыта составления собачьего меню, владельцам животного стоит обратиться за помощью к опытному ветеринару. Он составит оптимальный рацион с учетом породы, возраста собаки и наличия у нее тех или иных заболеваний.

Псу нужно обеспечивать регулярные прогулки и физическую активность. Важно вовремя проводить дегельминтизацию, так как глисты зачастую становятся причиной роста числа эозинофилов.

Полностью защититься от изменения картины крови невозможно, но уменьшить риск в силах хозяина пса.

Интересные темы

У взрослого повышены эозинофилы – все причины и способы коррекции важного показателя крови

Одним из видов лейкоцитов у человека являются эозинофилы. Концентрация данных клеток в кровяном русле играет важное диагностическое значение. В большинстве случаев, если в крови у взрослого повышены эозинофилы, это свидетельствует о наличии аллергической реакции.

Что такое эозинофилы в анализе крови?

Эозинофилы в крови – это гранулоцитарные лейкоциты, которые формируются в клетках костного мозга. Эти клетки поглощают иммунный комплекс, который формируется при аллергии. Перемещаясь к очагу воспаления, они нейтрализуют воспалительную реакцию, препятствуя дальнейшему развитию. В кровяном русле эозинофилы после синтеза находятся не больше 1 часа, после чего переходят в ткани. Появление и повышение их концентрации в кровяном русле свидетельствует об активном процессе аллергии.

За что отвечают эозинофилы?

Эозинофилы у взрослого человека в организме выполняют множество разнообразных функций.

Среди важнейших стоит выделить:

Поглощение чужеродных клеток – активное участие в иммунных процессах обеспечивает защиту организма от патогенов.
Формирование противоправного иммунитета.
Поглощение и связывание гистаминов, иных медиаторов воспаления.

Усиленное производство спинным мозгом эозинофилов приводит к развитию немедленных аллергических реакций (анафилаксии). В результате эозинофилы выполняют антиаллергенную и проаллергенную функции. Непосредственно поэтому, когда у взрослого повышены эозинофилы, врачи сперва стараются исключить развитие аллергической реакции в организме.

Что показывают эозинофилы?

Изменение концентрации данного типа кровяных клеток свидетельствует о наличии активного аллергического процесса. При этом чем выразительнее и продолжительнее воздействие аллергена, тем выше эозинофилы при аллергии. Покидая ткани, они выходят в кровяное русло и направляются к очагу воспалительного процесса. Если анализ крови регистрирует высокую концентрацию эозинофилов в крови, это означает, что организм находится в процессе борьбы с аллергенами.

Эозинофилы – норма

Абсолютное количество эозинофилов в крови не постоянно, оно изменяется в течение суток. В вечернее время наблюдается повышение концентрации данных клеток на 16%, а ночью – на все 30%. Кроме того, как показали исследования, концентрация эозинофилов подвержена влиянию гормонального фона у женщин. Так, эстрогены повышают концентрацию эозинофилов в крови, а прогестерон способствует ее понижению. На протяжении всей первой фазы цикла у взрослой девушки повышены эозинофилы в сравнении со второй половиной цикла, после овуляции.

Учитывая подобные колебания и частые изменения уровня эозинофилов, врачи не могут однозначно назвать цифру, которая была бы принята за норму. При оценке результатов анализа считается нормальным, если концентрация этих клеток у взрослых – в пределах 0,4*109/л. У детей данный показатель несколько повышен. Концентрация в норме может составлять 0,7*109/л. В целом относительное количество эозинофилов не должно превышать 1–5% от всего общего объема лейкоцитов.

Эозинофилы в крови повышены у взрослого – причины

Врачи в большинстве случаев сразу не могут однозначно ответить, чем в конкретном случае спровоцирована эозинофилия: причины патологии настолько разнообразны и многочисленны, что зачастую требуется комплексное обследование организма. Однако сильное превышение показателей нормы всегда указывает на наличие очагов воспаления.

Спровоцировать эозинофилию могут и острый ринит, отек гортани, фарингит. При подобных нарушениях повышенные эозинофилы присутствуют не только в крови, но и способны обнаруживаться в моче, мокроте, жидкости, отделяемой из носоглотки.

Подобное может фиксироваться при:

Непатологические причины эозинофилии

Стоит отметить, что не во всех случаях, когда эозинофилы повышены у взрослого, причины данного явления связаны с развитием заболевания или патологического состояния. Известны случаи, когда изменение концентрации клеток крови происходит в результате физиологических процессов или при воздействии на организм некоторых факторов.

Так, неблагоприятно на концентрации эозинофилов может сказаться нехватка в организме магния. Специалисты неоднократно фиксировали такие случаи. При этом восполнение недостающего микроэлемента приводит к самостоятельной нормализации уровня эозинофилов. Кроме того, повышенные эозинофилы в крови могут быть спровоцированы приемом антибактериальных средств, Аспирина, Димедрола.

Патологические причины эозинофилии

В большинстве случаев, когда повышены эозинофилы в крови у взрослого, это признак заболевания. При этом не всегда эозинофилия связана с развитием аллергической реакции.

Среди возможных факторов, провоцирующих увеличение количества этого вида лейкоцитов в крови, стоит выделить:

заболевания кожных покровов: дерматит, лишай, экзема;
аллергические реакции: сенная лихорадка, аллергический ринит, астма;
тяжелые инфекционные заболевания: туберкулез, пневмония;
половые инфекции: герпес, хламидиоз, токсоплазмоз;
болезни органов ЖКТ: язвенная болезнь желудка, цирроз печени;
аутоиммунные заболевания: ревматоидный артрит, волчанка;
онкология;
злокачественные заболевания крови: лейкоз;
гипотиреоз.

Степени эозинофилии

В зависимости от того, насколько повышены эозинофилы в крови, врачи выделяют степени заболевания.

При данной классификации придерживаются следующих показателей:

Легкая степень – превышение концентрации эозинофилов менее, чем на 10 % от нормы.
Средняя степень – повышение концентрации на 10–15 %.
Тяжелая степень – общее число эозинофилов на 15 % и больше превышает норму.

Легкая эозинофилия в большинстве случаев никак не проявляется. Однако когда у взрослого повышены эозинофилы в пределах 1500/мкл и выше, это может привести к поражению внутренних органов.

Чаще в таких случаях страдают:

селезенка;
сердце;
легкие;
нервная система;
кожные покровы.

Эозинофилия – лечение

Высокие эозинофилы требуют отдельного внимания со стороны врачей. Для начала медики проводят диагностические мероприятия, направленные на установление причины увеличения концентрации этих клеток.

Алгоритм действий и терапевтических мероприятий полностью зависит от характера причины эозинофилии:

Если повышение спровоцировано приемом лекарств – отменяют препараты и подбирают аналоги.
При аллергии – назначают прием антигистаминов и гормональных препаратов в тяжёлых случаях.
При онкологии – назначают лучевую и химиотерапию.

Эозинофилы у собаки в общем клиническом анализе крови

(с) Ветеринарный центр лечения и реабилитации животных «Зоостатус».

Варшавское шоссе, 125 стр.1.

тел. 8 (495) 241 64 96

Главный врач, эндокринолог, нефролог

Эозинофилы – это клетки крови, относящиеся к лейкоцитам. В своей цитоплазме эозинофилы содержат гранулы, которые при окраске мазка крови эозином приобретают ярко-красный цвет.

Эозинофилы производятся костным мозгом и недолго содержатся в периферической крови: они могут покидать кровеносные сосуды и мигрировать в ткани (преимущественно в легкие, желудочно-кишечный тракт и кожу). Эозинофилы обладают способностью к хемотаксису – находят очаг воспаления и устремляются к нему.

Эозинофилы могут поглощать и инактивировать такие вещества, как гепарин, гистамин, лейкотриены и т.д. Таким образом, эозинофилы регулируют аллергические реакции.

Содержащиеся в эозинофилах вещества токсичны для некоторых клеток организма, поэтому длительная инфильтрация тканей эозинофилами может провоцировать повреждение тканей и приводить к заболеваниям (эозинофильный гастрит, эозинофильный миозит, эозинофильный менингоэнцефаломиелит и т.д.).

Доказано, что в лабораторных условиях эозинофилы способны уничтожать паразитов.

В организме эозинофилы фагоцитируют («поедают») вредные агенты, проникшие в ткани, и «отмеченные» соответствующими антителами (комплексы антиген-антитело).

Причины повышения содержания эозинофилов

Причины повышения процентного содержания эозинофилов в анализе крови у собак:

физиологические суточные колебания (ночью в периферической крови эозинофилов на треть больше, чем днем)
аллергические реакции (особенно бронхиальная астма и кожные проявления)
паразитозы (гельминты, простейшие)
некоторые злокачественные новообразования
гнойные и воспалительные заболевания
интоксикации
гипоадренокортицизм (болезнь Аддисона)
гиперэозинофильный синдром.

Причин для эозинофилии множество, поэтому только на основании количества эозинофилов в мазке крови поставить диагноз не представляется возможным. Необходимо учитывать данные анамнеза, осмотра и дополнительных диагностических исследований.

Коротенко Любовь Дмитриевна

Главный врач, эндокринолог, нефролог

Статья помогла Вам?

(Голосов: 1, Рейтинг: 3. 3)

(с) Ветеринарный центр лечения и реабилитации животных «Зоостатус».

Варшавское шоссе, 125 стр.1.

тел. 8 (495) 241 64 96

Эозинофилия: причины, лечение

Обзор

Что такое эозинофилия?

Эозинофилия относится к состоянию повышенного количества эозинофилов в периферической крови. Лейкоциты — важный компонент клеточной иммунной системы. Эозинофилы — это специфические белые кровяные тельца, которые являются нормальной частью клеточной иммунной системы, играют роль в нормальных физиологических процессах и защите хозяина, а также участвуют в аллергических реакциях и защите от паразитарных инфекций.

Считается, что эозинофилия возникает, когда количество эозинофилов превышает 500 на микролитр, хотя точное пороговое значение зависит от лаборатории. Эозинофилию можно назвать легкой, средней или тяжелой. Обычно эозинофилы составляют менее 5% циркулирующих лейкоцитов в организме человека.

Симптомы и причины

Что вызывает эозинофилию?

Причины варьируются от менее серьезных, но очень распространенных состояний, таких как назальная аллергия и астма, до более серьезных гематологических состояний, в том числе:

Аллергия и астма
Лекарственная аллергия
Инфекции (в основном от паразитов)
Заболевания крови и рак
Аутоиммунное заболевание
Эндокринные расстройства
Заболевания органов и систем, в том числе:
- Кожа
- Легкие
- Желудочно-кишечный тракт
- Неврологическая система
- Суставы, мышцы и соединительная ткань
- Сердце

Эозинофильные расстройства часто называют названиями, которые отражают локализацию проблемы.К ним относятся:

Эозинофильный цистит, заболевание мочевого пузыря
Эозинофильный фасциит, заболевание фасции или соединительной ткани по всему телу
Эозинофильная пневмония, заболевание легких
Эозинофильный колит, заболевание толстой кишки
Эозинофильный эзофагит, заболевание пищевода
Эозинофильный гастрит, заболевание желудка
Эозинофильный гастроэнтерит, заболевание желудка и тонкого кишечника

Последние четыре типа в списке известны как эозинофильные желудочно-кишечные расстройства (EGID).Эта категория болезней увеличивается. Эозинофильный гранулематоз с полиангиитом поражает легкие, сердце, носовые пазухи и другие органы. Он также известен как синдром Черга-Стросса. Другое состояние — гиперэозинофильный синдром, который представляет собой первичное гематологическое заболевание, поражающее кровь и другие органы.

Диагностика и тесты

Как диагностируется эозинофилия?

Повышенные эозинофилы периферической крови могут быть обнаружены во время анализа крови.В зависимости от того, в чем может быть причина, ваш врач может назначить дополнительные анализы. Другие тесты могут включать:

Функциональные пробы печени
Рентген грудной клетки
Анализы мочи
Дополнительные анализы крови
Биопсия тканей и костного мозга
Испытание образцов стула

Ведение и лечение

Как лечится эозинофилия?

Лечение зависит от причины заболевания.Лечение может включать прекращение приема некоторых лекарств (в случае лекарственной реакции), отказ от определенных продуктов (в случае эзофагита) или прием противоинфекционных или противовоспалительных препаратов. Лечение, направленное на эозинофилы при астме, было одобрено Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA) и используется в клинике, в то время как методы лечения других состояний, опосредованных эозинофилами, находятся в стадии дальнейшего изучения.

Перспективы / Прогноз

Каковы перспективы эозинофилии?

Лечение причины высокого количества эозинофилов влияет на результат.В более серьезных случаях результаты также зависят от размера органа-мишени и от того, как человек реагирует на лечение.

Эозинофилия: причины, лечение

Обзор

Что такое эозинофилия?

Эозинофилия относится к состоянию повышенного количества эозинофилов в периферической крови.Лейкоциты — важный компонент клеточной иммунной системы. Эозинофилы — это специфические белые кровяные тельца, которые являются нормальной частью клеточной иммунной системы, играют роль в нормальных физиологических процессах и защите хозяина, а также участвуют в аллергических реакциях и защите от паразитарных инфекций.

Считается, что эозинофилия возникает, когда количество эозинофилов превышает 500 на микролитр, хотя точное пороговое значение зависит от лаборатории. Эозинофилию можно назвать легкой, средней или тяжелой.Обычно эозинофилы составляют менее 5% циркулирующих лейкоцитов в организме человека.

Симптомы и причины

Что вызывает эозинофилию?

Аллергия и астма
Лекарственная аллергия
Инфекции (в основном от паразитов)
Заболевания крови и рак
Аутоиммунное заболевание
Эндокринные расстройства
Заболевания органов и систем, в том числе:
- Кожа
- Легкие
- Желудочно-кишечный тракт
- Неврологическая система
- Суставы, мышцы и соединительная ткань
- Сердце

Эозинофильный цистит, заболевание мочевого пузыря
Эозинофильный фасциит, заболевание фасции или соединительной ткани по всему телу
Эозинофильная пневмония, заболевание легких
Эозинофильный колит, заболевание толстой кишки
Эозинофильный эзофагит, заболевание пищевода
Эозинофильный гастрит, заболевание желудка
Эозинофильный гастроэнтерит, заболевание желудка и тонкого кишечника

Диагностика и тесты

Как диагностируется эозинофилия?

Функциональные пробы печени
Рентген грудной клетки
Анализы мочи
Дополнительные анализы крови
Биопсия тканей и костного мозга
Испытание образцов стула

Ведение и лечение

Как лечится эозинофилия?

Перспективы / Прогноз

Каковы перспективы эозинофилии?

Эозинофильные расстройства — заболевания крови

Гиперэозинофильный синдром — это необычное заболевание, при котором количество эозинофилов увеличивается до более чем 1500 клеток на микролитр крови (более 1,5 × 10 ⁹ на литр) в течение более 6 месяцев без очевидной причины. У некоторых людей редкое хромосомное заболевание.

У людей любого возраста может развиться гиперэозинофильный синдром, но он чаще встречается у мужчин старше 50. Повышенное количество эозинофилов может повредить сердце, легкие, печень, кожу и нервную систему. Например, сердце может воспаляться при состоянии, называемом эндокардитом Леффлера, что приводит к образованию тромбов, сердечной недостаточности, сердечным приступам или нарушению работы сердечных клапанов.

Симптомы могут включать потерю веса, лихорадку, ночную потливость, усталость, кашель, боль в груди, отек, боль в животе, сыпь, боль, слабость, спутанность сознания и кому.Дополнительные симптомы этого синдрома зависят от того, какие органы повреждены.

Синдром подозревается, когда повторные анализы крови показывают, что количество эозинофилов постоянно увеличивается у людей с этими симптомами. Диагноз подтверждается, когда врачи определяют, что эозинофилия не вызвана паразитарной инфекцией, аллергической реакцией или другим диагностируемым заболеванием, и когда биопсия показывает эозинофилы внутри органов.

Без лечения обычно более 80% людей с этим синдромом умирают в течение 2 лет, но после лечения выживают более 80%.Повреждение сердца — основная причина смерти. Некоторым людям не требуется никакого лечения, кроме тщательного наблюдения в течение 3–6 месяцев, но большинству требуется медикаментозное лечение преднизоном, гидроксимочевиной или химиотерапевтическими препаратами.

У некоторых людей с гиперэозинофильным синдромом имеется приобретенная аномалия гена, регулирующего рост клеток. Этот тип гиперэозинофилии может поддаваться лечению иматинибом, лекарством, используемым для лечения рака. Если лечение этими препаратами не принесло успеха, можно использовать различные другие препараты, и их можно комбинировать с процедурой удаления эозинофилов из крови (лейкаферез).

Определение

, аномальные диапазоны и причины

Определение эозинофилов
Абсолютное количество эозинофилов
Причины аномального количества эозинофилов
Что такое лечение высоких эозинофилов?
Что такое эозинофилия?
Причины эозинофилии

Определение эозинофилов

Эозинофил

Эозинофил — это тип лейкоцитов. Это гранулоцит, что означает, что он выделяет гранулы ферментов для борьбы с чужеродными веществами и инфекциями.Практически каждая система организма тем или иным образом использует эозинофилы.

Две из их наиболее важных функций связаны с иммунной системой. Первый — это уничтожение вторгающихся микробов, таких как паразиты, бактерии или вирусы. Второй способствует воспалению. Этот процесс помогает организму изолировать и контролировать заболевание или аллергическую реакцию.

Абсолютное количество эозинофилов

Эозинофилы обычно составляют 0-6% лейкоцитов . Абсолютное количество клеток крови является выражением в анализах крови и означает, что количество клеток крови дается как абсолютное число, а не в процентах.

Абсолютное количество эозинофилов может быть вычислено путем умножения общего количества лейкоцитов на процент этого количества, которые также являются эозинофилами. Это означает, что если количество лейкоцитов составляет 8000 / мкл, а 5% лейкоцитов являются эозинофилами, абсолютное количество эозинофилов будет 400 / мкл (8000 x 0,05).

Причины аномального количества эозинофилов

A Высокое количество эозинофилов может указывать на то, что организм вырабатывает много новых эозинофилов, чтобы бороться с бактериями, вирусом или паразитом.Следовательно, высокое количество эозинофилов может указывать на инфекцию.

Высокое количество эозинофилов может быть вызвано эозинофильным гранулематозом с полиангиитом, также называемым синдромом Чарджа Штрауса . Это состояние характеризуется астмой, высоким содержанием эозинофилов и воспалением кровеносных сосудов малого и среднего размера (васкулит).

Высокое количество также может быть вызвано аллергическим заболеванием, таким как астма, экзема, сенная лихорадка, или аллергией на вещества или определенные лекарства.Высокое количество эозинофилов может указывать на определенные аутоиммунные заболевания, болезнь Кушинга (состояние, вызванное повышенным уровнем кортизола) или заболевания крови, такие как лейкемия.

Что такое лечение высоких эозинофилов?

Лечение высоких эозинофилов зависит от причины состояния. Если эозинофилия связана с аллергической реакцией, самое простое решение — избегать лекарств, продуктов питания или других веществ, вызывающих эту реакцию.

Когда лекарства забирают работу эозинофилов, это помогает организму перестать их производить.Иногда лекарства, такие как противоинфекционные, противовоспалительные или кортикостероиды, могут уменьшить высокое количество эозинофилов.

Что такое эозинофилия?

Эозинофилия — это состояние слишком большого количества эозинофилов в крови. Обычно пациенту ставят диагноз эозинофилия, если его абсолютное количество эозинофилов выше 500 / мкл.

Эозинофилия может быть тканевой эозинофилией, то есть аномально высокими уровнями эозинофилов в определенном месте инфекции или воспаления, но уровни кровотока в норме.С другой стороны, эозинофилия крови — это высокий уровень эозинофилии во всем кровотоке.

Эозинофилию обычно можно обнаружить с помощью анализа крови, хотя тканевую эозинофилию можно обнаружить в слизи, жидкости или образцах тканей.

Абсолютное количество выше 1500 / мкл, которое сохраняется в течение нескольких месяцев, называется гиперэозинофилией.

Причины эозинофилии

Есть несколько заболеваний, которые могут быть причиной эозинофилии крови или тканей. Эозинофилия развивается, когда слишком много эозинофилов продуцируется в костном мозге , или слишком много эозинофилов направляется в определенное место инфекции.

Состояния, которые могут вызывать эти явления, включают аллергии, паразиты, грибковые инфекции, заболевания надпочечников, кожные заболевания, аутоиммунные нарушения, эндокринные нарушения или опухоли.

Конкретные нарушения, которые могут лежать в основе, включают инфекцию аскариды, аллергию на определенные лекарства или продукты питания, астму, сенную лихорадку, экзему, эзофагит, болезнь Крона, эозинофильный гранулематоз с полиангиитом, лейкоз и лимфому Ходжкина.

Основные причины эозинофилии могут широко варьироваться.Лечение будет значительно отличаться в зависимости от основного состояния, которое вызвало развитие эозинофилии.

Эозинофилия | Здоровье беженцев TA

Кристалл Шарко-Лейдена. Распад эозинофильных клеток может быть обнаружен в стуле или мокроте. Фото любезно предоставлено Бобби Приттом, доктором медицины

Что такое эозинофилия и что она означает?
Эозинофилы представляют собой разновидность миелоидных гранулоцитарных клеток (лейкоцитов). Термин «эозинофилия» — это клинический термин, который указывает на повышенное количество или процентное содержание периферических (циркулирующих) эозинофилов.Под «повышенным» понимается абсолютное количество периферических эозинофилов, превышающее 400-600 клеток на микролитр. Это абсолютное количество эозинофилов (AEC) предпочтительнее процентиля, потому что AEC может быть повышенным, даже если процент эозинофилов считается нормальным. Если результаты лабораторных тестов показывают только процент эозинофилов, AEC можно рассчитать, умножив общий показатель лейкоцитов на процент эозинофилов.

Повышенный AEC может быть первичного типа (например,грамм. из-за клональной экспансии, например, при лейкемии) или вторичного типа. Вторичная эозинофилия возникает, когда эозинофилы мобилизуются в периферическую кровь в качестве реакции для защиты от антигена (обычно белка), который иммунная система организма считает чужеродным. Наиболее частыми причинами повышенного AEC являются аллергены и инфекции, особенно паразитарные инфекции. Однако имейте в виду, что дифференциальная диагностика вторичной эозинофилии довольно обширна. См. Таблицу 1: Причины эозинофилии.

Беженцы и эозинофилия
Большинство экспертов по вопросам здоровья беженцев считают повышенным уровень эозинофилов, превышающий 400 клеток на микролитр. Используется более низкий порог, поскольку он увеличивает чувствительность теста, поскольку у беженцев высока вероятность заражения паразитами.

Наиболее распространенными паразитарными инфекциями, связанными с эозинофилией у беженцев, являются гельминты, передаваемые через почву (трихуриды, аскариды и анкилостомы), стронгилоиды и шистосомы, а также многие тканевоинвазивные паразиты (например,грамм. паразиты, которые мигрируют через ткани человека в рамках их жизненного цикла). Повышенная АЭК, обнаруженная у беженцев, скорее всего, связана с тканевоинвазивным паразитом. Дополнительную информацию о кишечных паразитах можно найти на веб-сайте отдела паразитологии CDC, а также в рекомендациях CDC по охране здоровья беженцев внутри страны.

В то время как наличие повышенного AEC у беженца с большой вероятностью указывает на текущую или недавнюю инфекцию тканевоинвазивным паразитом, отсутствие эозинофилии не указывает на отсутствие паразитарной инфекции [1, 2].Не все паразитарные инфекции вызывают эозинофилию. Например, человек-хозяин не всегда вызывает эозинофильный ответ на тканевоинвазивных паразитов. Неинвазивные паразиты, не являющиеся тканевыми, такие как простейшие (например, лямблии и амебы), как правило, не вызывают эозинофильный ответ.

Кроме того, многие тканевоинвазивные паразиты обитают в кишечнике и мигрируют через ткани, вызывая эозинофилию, только в определенные периоды их жизненного цикла. Кроме того, эозинофилия имеет тенденцию уменьшаться у людей с хронической инфекцией, поскольку хозяин приспосабливается к присутствию паразитов.Отрицательная прогностическая ценность нормального количества эозинофилов низка для обычных паразитов (например, стронгилоидов, анкилостомы). В результате нормальное количество эозинофилов не обязательно исключает паразитарную инфекцию.

Скрининг на АЭК и лечение
Первоначальная оценка повышенного АЭК у вновь прибывшего беженца осложняется предполагаемым лечением от паразитов перед отъездом. Это связано с тем, что многие из распространенных паразитов, вызывающих усиление AEC, часто лечатся до прибытия в США.Поскольку большинство беженцев наблюдаются в течение нескольких недель после прибытия, может потребоваться несколько месяцев для нормализации повышенного AEC после предполагаемого лечения. Многие беженцы, у которых было обнаружено повышенное количество эозинофилов во время оценки состояния здоровья в домашних условиях, уже прошли предварительное лечение от возбудителя эозинофилии еще до прибытия в США [1]. Таким образом, CDC рекомендует первоначальную оценку повышенного AEC на основании предыдущего предполагаемого антипаразитарного лечения:

Беженцам, получившим полный пакет предполагаемого лечения *, следует повторить подсчет эозинофилов через 3–6 месяцев, так как это может занять много времени, чтобы эозинофилия исчезла после соответствующего лечения.Бессимптомным беженцам дальнейшее тестирование не показано.
Если беженец не получил полный пакет предполагаемого лечения *, разумно предоставить недостающие компоненты полного пакета лечения и перепроверить количество эозинофилов через 3-6 месяцев после получения лечения и до начала диагностического обследования.
Если беженец не получил полный пакет предполагаемого лечения * и врач выбирает скрининг на паразитарные инфекции вместо предполагаемого лечения, следует использовать оценку, предложенную на рис. 2 или рис. 3 руководящих принципов CDC. следовать.

* Полный пакет предполагаемого лечения включает лечение гельминтов, передающихся через почву (разовая доза альбендазола) ПЛЮС лечение стронгилоидоза (ивермектин или высокие дозы альбендазола) ПЛЮС, для африканских беженцев к югу от Сахары лечение шистосомоза (празиквантел). Информацию о текущих схемах лечения перед отъездом, получаемых конкретными группами беженцев, можно получить в Центре контроля заболеваний.

Если повышенный AEC не разрешается с помощью превентивного или направленного лечения, следует провести тщательную оценку.Поскольку предполагаемое лечение не является полностью эффективным первоначально для обычных паразитов, переоценка для обычных гельминтов, передаваемых через почву, стронгилоидов и, при необходимости, шистосомоза должна быть первоначальной оценкой [1, 2, 3]. Другие распространенные паразитарные причины стойкой эозинофилии сильно зависят от факторов риска, таких как географический регион и история воздействия (например, диета). Шистосомоз и филяриатоз особенно распространены среди африканских беженцев. Инфекция ленточного червя обнаруживается примерно у 2% беженцев в целом, а инфекция от других сосальщиков (например,грамм. Офисторохиаз, парагонимоз) преимущественно встречаются у беженцев из Юго-Восточной Азии [1].

Если общий патоген или другая этиология не идентифицирована, может потребоваться направление к специалисту по инфекционным заболеваниям с опытом работы в тропической медицине. Стероидов или других иммуномодуляторов, которые иногда используются для лечения эозинофилии у населения США, следует избегать до тех пор, пока тщательная оценка окончательно не исключит тканевоинвазивного паразита, особенно Strongyloides .

Таблица 1: Причины эозинофилии

Паразиты	Angiostrongylus cantonesis и A. costaricensis Anisakiasis Ascaris lumbricoides (инвазивная личиночная стадия) Capillaria phillippinensis Echinococcus Fasciolopsis buski Filariasis instinctvormus 5 инф.и аутоинф.) Виды Toxocara Трихинеллез Тропическая эозинофилия (Неопознанные микрофилярии)
Другие инфекции / инвазии	Легочный аспергиллез Чесотка тяжелая
Аллергические / атопические расстройства	Астма Сенная лихорадка Лекарственные реакции Синдром эозинофильной миалгии — триптофан, синдром токсического масла Атопический дерматит
Аутоиммунные и родственные расстройства	Синдром гиперэозинофилии (неизвестная этиология) Узелковый полиартериит Некротический фасциит Эозинофильный васкулит Пемфигус Муцин-секретирующие аденокарциномы
Иммунодефицитные состояния	Гипериммуноглобулин Е при рецидивирующей инфекции Синдром Вискотта-Олдрича
Новообразования	Болезнь Ходжкина Грибовидный микоз Хронический миелоцитарный лейкоз Эозинофильный лейкоз Истинная полицитемия
Прочие	Болезнь Аддисона Воспалительное заболевание кишечника Герпетиформный дерматит Токсический / химический синдром

Предоставлено William Stauffer M.D., M.S.P.H., Университет Миннесоты

Ссылки
1. Seybolt LM, Christiansen D, Barnett ED. Диагностическая оценка вновь прибывших бессимптомных беженцев с эозинофилией. Clin Infect Dis. 2006: 42 (3): 363-7.
2. Госвами Н.Д., Шах Дж. Дж., Кори Г. Р., Стаут Дж. Э. Стойкая эозинофилия и инфекция Strongyloides у беженцев из горцев после предполагаемой терапии альбендазолом. Am J Trop Med Hyg 2009; 81 (2): 302-4.
3. Хортон Дж. Альбендазол: обзор антигельминтной эффективности и безопасности у людей.Паразитология 2000; 121 Приложение: С113-32.

Эозинофилия — обзор | ScienceDirect Topics

Иммунобиология

Эозинофилы — это главным образом тканевые лейкоциты, которых обычно в несколько сотен раз больше в тканях, чем в крови. Количество эозинофилов является наибольшим в тканях с эпителиальным контактом слизистой оболочки с окружающей средой, включая желудочно-кишечный (GI) и нижний мочеполовой тракты (GU). Продолжительность жизни эозинофилов больше, чем у нейтрофилов.Эозинофилы, вероятно, выживают в тканях в течение нескольких недель.

Иммунологические функции эозинофилов остаются предметом интенсивных исследований. Помимо функционирования в качестве эффекторных лейкоцитов конечной стадии, эозинофилы, вероятно, играют дополнительную роль во взаимодействии с лимфоцитами и другими клетками. ¹⁸

В качестве эффекторных клеток эозинофилы способны высвобождать специфические липидные медиаторы, такие как лейкотриен C ₄, и являются источником ряда предварительно сформированных цитокинов, хранящихся в гранулах.Кроме того, эозинофилы уникально содержат специфические, высоко положительно заряженные («катионные») белки в своих цитоплазматических гранулах. Эти катионные белки эозинофильных гранул включают основной основной белок и катионный белок эозинофилов. Высвобождение этих белков в виде гранул может повредить ткани хозяина и, что более важно, может способствовать уничтожению гельминтозных паразитов. Степень, в которой эозинофилы участвуют в иммунных ответах на гельминтозных паразитов, и особенно на их ранние личиночные формы, чтобы помочь убить этих паразитов in vivo , все еще не определена.^17,19

У пациентов с выраженной эозинофилией эозинофилы могут вызывать повреждение органов, особенно сердца. Повреждение сердца, от раннего некроза до последующего эндомиокардиального тромбоза и фиброза, одинаково при различных эозинофильных состояниях. Таким образом, эндомиокардиальный тромбоз и фиброз развиваются при эозинофилии, связанной с гиперэозинофильными синдромами, ²⁰ карциномами и лимфомами и паразитарными инфекциями, включая иногда трихинеллез, мигрирующую висцеральную личинку, лоаз или другие филяриатные инфекции.^21–25 Патологически эозинофильный эндомиокардиальный фиброз ²⁶ идентичен тропическому эндомиокардиальному фиброзу. ^27,28 В то время как различные эозинофильные заболевания могут вызывать идентичные формы сердечных заболеваний, у многих пациентов с устойчивой эозинофилией сердечные заболевания никогда не развиваются. Таким образом, патогенез поражения сердца, опосредованного эозинофилами, включает как присутствие повышенных эозинофилов, так и других, пока еще недостаточно определенных, стимулов для набора или активации этих лейкоцитов.

Факторы-хозяева, влияющие на реакцию эозинофилов

Эозинофилия крови явно присутствует, когда количество эозинофилов превышает 450 клеток / мкл крови. В опубликованных исследованиях используются пороговые значения от 350 до 500 клеток / мкл крови. Повышенное процентное, но не абсолютное количество эозинофилов в крови (псевдоэозинофилия) из-за лейкопении в других линиях лейкоцитов может вводить в заблуждение.

Многие факторы хозяина и другие стимулы влияют на уровни эозинофилов периферической крови ( Box 131.4 ). Количество эозинофилов в крови меняется в течение дня, при этом уровни выше ранним утром и ниже примерно к полудню. Уровни выше в неонатальном периоде и снижаются с возрастом. Уровень эозинофилов падает во время беременности; во время стресса родов они практически исчезают из периферического кровообращения. ²⁹ Адреналин вызывает резкое падение циркулирующих эозинофилов после временного увеличения. Введение 100 мг гидрокортизона сопровождается снижением периферических эозинофилов до 35% от контрольного уровня в течение 1 часа, а эозинофилы в крови почти отсутствуют через 4 часа после введения стероида.³⁰ Кортикостероиды подавляют накопление эозинофилов в тканях, вероятно, за счет нескольких механизмов, включая стимулирование апоптоза эозинофилов. ³¹ Острые бактериальные и вирусные инфекции и другие процессы, вызывающие острое воспаление, связаны со снижением и временным подавлением эозинофилии в крови. ^30,32 Уровень эозинофилов снижается во время острой малярии, даже если ранее был повышен. ^6,7 Депрессия эозинофилов при малярии сохраняется после устранения лихорадки и паразитемии и сопровождается увеличением эозинофилов в период выздоровления.⁷ Когда важно знать, есть ли у пациента эозинофилия, необходимо повторить дифференциальный анализ крови после того, как пациент выздоровел от острой интеркуррентной инфекции.

Паттерны

Характеристики ответа эозинофилов, которые могут быть полезны при оценке более вероятных причин эозинофилии, включают уровень, продолжительность, характер (постоянный или прерывистый) и связанные с ним симптомы. Если человек подвергался тропическому воздействию, время начала эозинофилии в связи с этим воздействием может помочь в оценке.Эозинофилию следует характеризовать по уровню, а не просто по наличию или отсутствию. Абсолютное количество эозинофилов более 3000 / мкл классифицируется как выраженная эозинофилия или эозинофилия высокой степени. В отношении паразитарных инфекций можно увидеть несколько различных моделей эозинофилии. Факторы, влияющие на эти паттерны, включают тип паразита, стадию развития паразита, местоположение внутри человеческого хозяина, целостность барьеров между паразитом и хозяином и жизнеспособность паразита, а также многие атрибуты хозяина.При некоторых гельминтозах эозинофилия проявляется только на одной стадии развития паразита. Примером может служить кишечный паразит Ascaris lumbricoides , который вызывает эозинофилию, главным образом, на начальной стадии миграции личинок через легкие (см. Главу 115). Взрослые черви, обитающие в просвете кишечника, обычно не вызывают эозинофильной реакции. Некоторые паразиты, такие как ленточные черви Diphyllobothrium latum и Taenia saginata , вся жизнь которых в организме человека-хозяина протекает в просвете кишечника, вызывают незначительный эозинофильный ответ или не вызывают его вообще, даже если они могут вырасти до внушительных размеров и выжить в течение длительного времени. десятилетия. Таблица 131.1 описывает многие глистные инфекции, связанные с эозинофилией, основные участки тела, пораженные каждым из них, и возможные диагностические тесты для каждого; более подробные сведения можно найти в главах, посвященных патогенам.

Некоторые гельминтозные паразиты могут вызывать эозинофилию высокой степени ( Таблица 131.2 ) на одной стадии развития, за которой следует хроническая эозинофилия от низкого до умеренного уровня. Острый шистосомоз (синдром Катаямы) ^33,34 (см. Главу 122) и стадия миграции личинок аскарид ³⁵ и нематоды ³⁶ могут спровоцировать эозинофилию высокой степени, которая снижается на хронических стадиях инфекции.При экспериментальных инфекциях анкилостомоза эозинофилия в крови прогрессивно нарастает после 2–3 недель заражения и достигает пика между 5 и 9 неделями, а затем постепенно снижается. При нелеченых инфекциях анкилостомоза эозинофилия постепенно уменьшается, но может сохраняться в течение нескольких лет после экспериментального заражения. ³⁷ Кровяная и легочная эозинофилия, часто характеризуемая как «временная», связанная с фазами легочной миграции Ascaris и анкилостомов, обычно сохраняется в течение недель или месяцев.^35,38,39 Эозинофилия при стронгилоидозе (см. Главу 117) часто колеблется с течением времени: высокая во время миграции в легкие и от низкой до умеренной во время хронической инфекции. Во время синдромов гиперинфекции эозинофилия может быть выраженной или отсутствовать в зависимости от характеристик хозяина и подавления кортикостероидами или сопутствующей бактериальной инфекцией. ⁴⁰ Драматическая эозинофилия, наблюдаемая при остром трихинеллезе, обычно исчезает, когда вокруг личинок в мышцах образуется фиброзная капсула (за исключением неинкапсулирующих видов Trichinella pseudospiralis , которые могут вызывать длительный эозинофильный миозит ⁴¹) (см. Главу 110).Паразиты, инцистированные в тканях, такие как эхинококковые кисты и цистицеркоз, и физически изолированные от хозяина стенками кисты, обычно не вызывают эозинофилию, если нарушение барьера не приводит к утечке богатого антигенами материала. Периодическая утечка жидкости из эхинококковых кист может временно стимулировать повышение эозинофилии в крови и вызывать аллергические (крапивница, бронхоспазм) или анафилактические реакции. ^42,43 Нарушение этих барьеров или распад со смертью паразита может привести к интенсивным тканевым реакциям, усилению эозинофилии и острым симптомам у хозяина.

Взрослые паразиты, которые живут и мигрируют в тканях, такие как Loa loa и Gnathostoma spinigerum , обеспечивают постоянный стимул для эозинофилов. ^24,44 Многие филяриозные инфекции вызывают стойкую эозинофилию (см. Главы 104–107, 104, 105, 106, 107).

Величина эозинофильных реакций, а также наличие и интенсивность других симптомов могут сильно различаться в зависимости от возраста на момент первого контакта, иммунологического состояния организма-хозяина, а также количества и времени последующих воздействий.Временные жители и постоянные жители эндемичных регионов по-разному реагируют на ряд гельминтов. ^23,45,46 Лоаз (см. Главу 105) у временно проживающих в эндемичных регионах характеризуется иммунологической гиперреактивностью, эозинофилией высокой степени и более серьезными симптомами, которые не наблюдаются у постоянных жителей того же района. ²⁴ Кратковременные жители с большей вероятностью будут иметь отек Калабара и менее подвержены обнаруживаемой микрофиляремии, чем коренное население.^24,46 Среди лиц, у которых в сети эпиднадзора GeoSentinel был диагностирован филяриатоз, вероятность протекания клинических симптомов у лиц, родившихся и выросших в эндемичных по филяриозу регионах, в 2,5 раза выше, чем у лиц из неэндемичных регионов. ⁴⁷ При шистосомных инфекциях люди, ранее не подвергавшиеся воздействию, и неиммунные люди, а также не постоянно проживающие в эндемичных районах, могут испытывать синдром Катаямы при острой шистосомной инфекции. ^33,34

Повышенные уровни активированных и патогенных эозинофилов характеризуют умеренно-тяжелый аллергический ринит на домашних пылевых клещей

Эозинофилы играют решающую роль в патогенезе аллергического воспаления дыхательных путей.Однако относительная важность активации и патогенности эозинофилов в развитии тяжести аллергического ринита (АР) еще предстоит определить. Мы стремились оценить связь активированных и патогенных эозинофилов с тяжестью заболевания у пациентов с АР. Образцы периферической крови и носа были собраны у пациентов с легкой () и умеренно-тяжелой () АР клещей домашней пыли, а также у здоровых контрольных субъектов (), набранных проспективно. Выражение активации и патогенных маркеров на эозинофилах в крови и носу анализировали с помощью проточной цитометрии.Потенциал высвобождения эозинофильного катионного белка (ECP-) и про-Th3-функцию эозинофилов крови сравнивали между пациентами легкой и средней-тяжелой степени и здоровыми людьми из контрольной группы. Наши результаты показали, что количество активированных (CD44 ⁺ и CD69 ⁺) и патогенных (CD101 ⁺ CD274 ⁺) эозинофилов в крови и носу, а также предшественников эозинофилов в крови увеличивалось при умеренно-тяжелой АР. по сравнению со здоровыми пациентами и контрольной группой.Кроме того, уровни активированных и патогенных эозинофилов в крови положительно коррелировали с общей оценкой назальных симптомов и уровнями ECP и эозинофильной пероксидазы (EPX) в сыворотке у пациентов с AR. Кроме того, эозинофилы крови, полученные от пациентов средней и тяжелой степени тяжести, продемонстрировали более высокий потенциал высвобождения ECP и EPX, индуцированного CCL11, и стимулирования ответов Th3, чем у пациентов с легкой степенью тяжести и здоровых контрольных пациентов. В заключение, пациенты с АР средней и тяжелой степени характеризуются повышенным уровнем активированных и патогенных эозинофилов, что связано с более высокой продукцией ECP, EPX и IL-4 в периферической крови.

1. Введение

Аллергический ринит — распространенное аллергическое заболевание как в Китае, так и в западных странах, поражающее примерно от 10% до 40% мирового населения, при этом более 400 миллионов человек во всем мире страдают от симптомов чихания, ринореи, заложенности носа, и обострение коморбидной астмы [1–5]. Хотя это заболевание не опасно для жизни, оно оказывает значительное социально-экономическое воздействие и влияет на качество жизни [1, 6]. По степени тяжести аллергический ринит обычно классифицируется на легкую и средне-тяжелую форму в зависимости от тяжести симптомов в соответствии с рекомендациями «Аллергический ринит и его влияние на астму» (ARIA) [1].Более половины пациентов имеют среднетяжелую форму заболевания, приводящую к значительным нарушениям нормальной повседневной активности [7, 8]. Следовательно, клиническое ведение пациентов со средней и тяжелой степенью тяжести является чрезвычайно сложной задачей. Патофизиологически аллергический ринит представляет собой IgE-опосредованное воспалительное заболевание слизистой оболочки носа 2 типа, вызванное взаимодействием переносимых по воздуху аллергенов, характеризующихся воспалительными инфильтратами, состоящими преимущественно из эозинофилов, тучных клеток, базофилов и Т-клеток, которые выделяют гранулярные белки, цитокины и хемокины. вызвать появление клинических симптомов [9].Однако механизм развития среднетяжелой формы остается неясным.

Хорошо известно, что эозинофилы играют важную роль при хронических аллергических заболеваниях [10, 11]. Было показано, что количество эозинофилов в мазке из носа сильно коррелирует с сопротивлением воздушному потоку через нос и спирометрическими индексами у пациентов с аллергическим ринитом [12]. Заметно повышенное количество активированных и дегранулированных эозинофилов наблюдалось у пациентов с аллергическим ринитом после воздействия аллергена [13-15].В моделях аллергического воспаления легких на мышах эозинофилы могут усиливать аллергическое воспаление, способствуя привлечению Т-хелперов типа 2 (Th3) и взаимодействуя с дендритными клетками [16, 17]. Кроме того, эозинофилы способны высвобождать предварительно сформированные цитокины Th3, такие как интерлейкин- (IL-) 4 и IL-13, чтобы способствовать ответу 2 типа [18, 19]. Недавно было высказано предположение, что активированные и патогенные состояния эозинофилов, аналогичные другим популяциям иммунных клеток, которые демонстрируют различия в своем фенотипе и функции, непосредственно участвуют в развитии связанных с эозинофилами заболеваний, включая аллергическую астму и эозинофильный эзофагит [ 20, 21].Однако остается неизвестным, связаны ли эти функциональные состояния эозинофилов с тяжестью заболевания при аллергическом рините.

В этом исследовании мы предположили, что патогенный фенотип и функция эозинофилов у пациентов с аллергическим ринитом от клещей домашней пыли (HDM) могут изменяться в зависимости от различных состояний тяжести заболевания. Результаты этого исследования помогут понять механизм прогрессирования аллергического ринита и прояснить важные вопросы, которые могут улучшить лечение пациентов с аллергическим ринитом.

2. Материалы и методы

2.1. Пациенты и контрольные субъекты

Это исследование было одобрено этическим комитетом Первой дочерней больницы Университета Сунь Ятсена. Письменное информированное согласие было получено от каждого участника. Свежие образцы периферической крови, чистки носа и выделений были собраны около 9 часов утра у всех участников.

Диагноз аллергического ринита оценивался на основании рекомендаций ARIA [1]. Степень тяжести аллергического ринита классифицировалась в соответствии с рекомендациями ARIA и сообщалась как легкая и умеренно-тяжелая [1].Вкратце, пациенты с умеренно-тяжелым аллергическим ринитом имели один или несколько из следующих симптомов: нарушение сна; нарушение повседневной активности, досуга и / или спорта, учебы или работы; или беспокоящие симптомы. У пациентов с легким аллергическим ринитом этих симптомов не было. Исключались пациенты, которые принимали пероральные или назальные кортикостероиды или другие лекарства (например, антигистаминные, антилейкотриеновые, антибиотики, холинолитики или альфа-адренергические средства) в течение последних 3 месяцев до сбора образцов.Другие критерии исключения включали (1) сенсибилизацию к ингаляционным аллергенам, отличным от HDM, таким как пыльца и грибы; (2) предыдущее лечение иммунотерапией; (3) пациенты с другими аллергическими заболеваниями, такими как астма, в соответствии с рекомендациями Глобальной инициативы по астме; (4) беременность или кормление грудью; и (5) те, у кого был острый или хронический синусит; тяжелые иммунологические, сердечные, печеночные или метаболические заболевания; опухоли; или другая хроническая инфекция. Общий балл назальных симптомов (TNSS) был рассчитан (диапазон: 0–12) путем сложения индивидуальных баллов в носу, включая заложенность носа, чихание, зуд в носу и ринорею, каждая из которых оценивалась с использованием шкалы,, или [22].Здоровые контрольные субъекты имели отрицательные кожные прик-тесты на Dermatophagoides pteronyssinus (Der p), не имели положительных специфических IgE к распространенным аллергенам в нашем регионе и не имели аллергии в анамнезе.

2.2. Обнаружение специфических IgE

Образцы сыворотки отделяли низкоскоростным центрифугированием для обнаружения специфических IgE против местных распространенных ингаляционных аллергенов с использованием ImmunoCAP (Phadia, Uppsala, Sweden). Концентрация выше 0,7 МЕ / мл считалась положительным результатом.

2.3. Чистка носа

Стерильную предварительно увлажненную щетку с нейлоновым ворсом (HydraFlock 6 in Sterile Standard Flock Swab, Puritan, USA) использовали для отбора образцов клеток из носа, как описано ранее [23]. Вкратце, щетку поместили на поверхность слизистой оболочки медиальной части нижней носовой раковины и осторожно повернули. Анестезия не применялась. После отбора пробы щетку немедленно помещали в пластиковую пробирку на 3 мл, содержащую 2 мл физиологического раствора с фосфатным буфером. Затем щетку энергично встряхивали в растворе и осторожно вытирали щеткой о стенку пробирки.Образцы клеток немедленно осаждали центрифугированием 300 × g при 4 ° C в течение 5 минут, и общее количество клеток определяли вручную с помощью гемоцитометра. После подсчета клеток аликвоту (100 мкл мкл) клеток из каждого образца затем центрифугировали на предметных стеклах с использованием цитоцентрифуги CytoSpin ™ 4 (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США) при 400 × g в течение 10 мин, а затем Быстро высушивают на воздухе перед окрашиванием иммунофлуоресценцией. Остальные клетки немедленно подвергали анализу проточной цитометрии, как описано ниже.

2.4. Носовые выделения

Назальные выделения были собраны у каждого участника. Две полоски назальной губки (стандартная носовая повязка hemoX; Medtronic Merocel, Джексонвилл, Флорида, США) размером каждая вводили в ноздри (по одной полоске для каждой ноздри) латерально по отношению к нижней носовой раковине на 5 минут. После этого полоски губки удаляли и погружали в 500 мкл л буфера для анализа MILLIPLEX (Millipore, Billerica, USA), а затем помещали в чашку с ацетатом целлюлозы 0.Трубчатый фильтр с размером пор 22 мм (центрифужный фильтр Spin-X, Corning, Сент-Луис, США) в трубке Эппендорфа и центрифугирование в течение 5 минут в охлаждаемой центрифуге при 16000 g. Супернатанты хранили при -80 ° C до анализа.

2,5. Иммунофлуоресцентное окрашивание и подсчет эозинофилов

Иммунофлуоресцентное окрашивание проводили, как описано ранее [24]. Вкратце, после инкубирования с 0,1% Triton X-100 и 1% козьей сывороткой (Sigma, США) слайды инкубировали в течение ночи при 4 ° C в присутствии антиэозинофильного катионного белка человека (ECP) (Abcam, ab116017, 1: 100).После этого каждое слайд инкубировали с козьим вторичным антителом против кролика (Alexa Fluor 488) (Life Technologies, 1: 500) и затем закрепляли монтажной средой ProLong Antifade с DAPI (Life Technologies). Окрашенные слайды визуализировали с помощью флуоресцентного микроскопа Olympus IX51 с линзой объектива 40x. DAPI- и ECP-положительные клетки подсчитывали под флуоресцентным микроскопом. Всего оценивали 300 клеток на образец. Общее количество эозинофилов рассчитывали из общего количества назальных клеток, умноженного на процент ECP-положительных клеток.

2.6. Выделение эозинофилов в крови

Эозинофилы выделяли путем отрицательной селекции с использованием набора для выделения эозинофилов человека (MAC Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Германия) в соответствии с инструкциями производителя. Вкратце, образцы крови были взяты как у пациентов с аллергическим ринитом, так и у здоровых участников. Кровь наслаивали на градиент фиколла-гипака (1,077 г / мл; Pharmacia, Упсала, Швеция) с последующим центрифугированием при 450 g при 20 ° C в течение 20 минут без торможения. Слой, содержащий эритроциты (RBC) и гранулоциты, осаждали в течение 30 минут в буфере сбалансированного солевого раствора (HBSS), содержащем 4-6% декстрана, при комнатной температуре.Слой, богатый гранулоцитами, с небольшим количеством оставшихся эритроцитов собирали и один раз промывали буфером HBSS. После гипотонического лизиса остаточных эритроцитов эозинофилы были отделены от неозинофилов с помощью отрицательной иммуномагнитной селекции с использованием комбинации микрогранул анти-CD2, анти-CD14, анти-CD16, анти-CD19, анти-CD56, анти-CD123 и анти-CD235a. с колонкой для магнитной сепарации клеток (MAC Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Германия). Конечные эозинофилы собирали с чистотой от 95% до 99%, оцененной с помощью проточной цитометрии бокового рассеяния и экспрессии CCR3 (рис. S5), и с жизнеспособностью более 98% по окрашиванию трипановым синим.Клетки ресуспендировали в среде RPMI, содержащей 10% фетальной телячьей сыворотки (FCS), и немедленно использовали.

2.7. Анализ дегрануляции эозинофилов

Анализ дегрануляции эозинофилов проводили согласно методам, описанным ранее, с небольшими модификациями [25]. Вкратце, 96-луночные круглодонные планшеты покрывали 3% сывороточного альбумина человека в сбалансированном солевом растворе Хэнка (HBSS) в течение 2 часов при 37 ° C и промывали 3 раза HBSS без Ca ²⁺ и Mg ²⁺. Суспензию выделенных эозинофилов (200 мкл мкл клеток / мл в среде RPMI1640 с 1% сывороточного альбумина человека) инкубировали в предварительно покрытом 96-луночном планшете со 100 нг / мл CCL11 при 37 ° C в течение 4 часов.Затем супернатанты собирали после центрифугирования при 13000 × g при 4 ° C в течение 5 минут. Концентрацию ECP и эозинофильной пероксидазы (EPX) в супернатантах определяли с помощью набора для специфического иммуноферментного анализа (ELISA) (CUSABIO Life Sciences, Ухань, Китай) в соответствии с инструкциями производителя.

2,8. CD4

⁺ Выделение Т-клеток
CD4 ⁺ Т-клетки были положительно очищены с использованием конъюгированных с антителом CD4 магнитных наночастиц (BD Biosciences, Сан-Хосе, Калифорния, США) в соответствии с инструкциями производителя, как мы ранее описали [ 26].Чистота обогащенных CD4 ⁺ Т-клеток превышала 95%, по оценке проточной цитометрии. Клетки культивировали в полной среде RPMI с добавлением 10% FCS.
2.9. Совместное культивирование CD4
⁺ Т-клеток и эозинофилов
Совместное культивирование изолированных CD4 ⁺ Т-клеток с очищенными эозинофилами проводили, как описано ранее, с некоторыми модификациями [18]. CD4 ⁺ Т-клетки выделяли из здоровых контролей и помещали в полную среду RPMI с добавлением 10% FCS в течение ночи при 37 ° C.Эозинофилы крови были очищены от здоровых людей и субъектов с легким и умеренно-тяжелым аллергическим ринитом. После стадии отмывки эозинофилы добавляли к эквивалентному количеству аллогенных CD4 ⁺ Т-клеток в 96-луночных круглодонных планшетах, покрытых анти-CD3 (5 мкг мкг / мл, OKT3, eBioscience) и анти-CD28. (1 мкг г / мл, CD28.2, eBioscience). Среда для культивирования клеток состояла из RPMI 1640, 10 мМ HEPES, 2 мМ l-глутамина, 1% пенициллина / стрептомицина, 10% FCS (все от Гибко, Гранд-Айленд, Нью-Йорк, США) и 10 нг / мл рекомбинантных гранулоцитов человека. колониестимулирующий фактор макрофагов (GM-CSF) (PeproTech Inc., Роки-Хилл, Нью-Джерси, США). Через 5 дней коктейль для стимуляции клеток, состоящий из форбола 12-миристат 13-ацетата (PMA) (81 нМ), иономицина (1,34 мМ), брефельдина A (10,6 мМ) и монензина (2 мМ) (eBioscience, Сан-Диего, США). Калифорния, США) был добавлен для индукции и последующего внутриклеточного обнаружения цитокинов. Через 5 часов клетки собирали и дополнительно анализировали проточной цитометрией, как описано ниже.
2.10. Проточная цитометрия
Для анализа эозинофилов периферической крови сначала выделяли гранулоциты крови, как описано выше.Суспензии отдельных клеток окрашивали красителем Fixable Viability Dye eFluor 450 (eBioscience, Сан-Хосе, Калифорния, США) для исключения мертвых клеток. Для блокирования неспецифического окрашивания клетки инкубировали с TruStain FcX человека (BioLegend, Сан-Диего, Калифорния, США) в течение 10 мин на льду. Для окрашивания поверхности клетки инкубировали со специфическими первичными антителами (таблица 1) в течение 30 мин при 4 ° C. Для внутриклеточного окрашивания клетки дважды промывали после окрашивания поверхности и повышали проницаемость с использованием Transcription Factor Fix / Perm Buffer (BD Bioscience) в течение 30 минут при комнатной температуре.Антитела, специфичные к внутриклеточным цитокинам, разводили в буфере Perm / Wash (BD Bioscience) и инкубировали в течение 30 мин на льду. В качестве отрицательного контроля использовали изотипический контроль. Флуоресценцию минус один контроль для каждого флуорохрома использовали для установки ворот для положительных популяций. Окрашенные клетки анализировали с использованием проточного цитометра Gallios (Beckman Coulter, Бреа, Калифорния, США), и данные анализировали с помощью программного обеспечения FlowJo (TreeStar, Ashland, Орегон, США).
CC5 90G351 903 100 BB8BB κ κ 9034 9033
Антитело Параметр Идентификатор клона Источник Изотип Производитель Разбавление
5EB Мышь IgG2b, κ BioLegend 1: 100
CD44 FITC BJ18 FITC BJ18
CD69 PE FN50 Мышь IgG1, κ BioLegend 1: 100
CD101 CD101 BioLegend 1: 100
CD274 APC 29E.2A3 Мышь IgG2b, κ BioLegend 1: 100
CD45 APC / cyanine7 HI30 Мышь HI30 HI30 HI30
Siglec-8 PE 7C9 Мышь IgG1, κ BioLegend 1: 100
CD341 CD34
CD34 BioLegend 1: 100
CD38 PE / Cy7 HIT2 Мышь IgG1, κ BioLegend3 A14 Мышь IgG1, κ BD 1: 100
CD45RA APC H I100 Мышь IgG2b, κ BioLegend 1: 100
CD4 APC / cyanine7 RPA-T4 RPA-T4 RPA-T4 90G351 903 : 200
IL-4 PE 8D4-8 Мышь IgG1, κ BioLegend 1: 100
IL-4 90/370 циан.5 8D4-8 Мышь IgG1, κ BD 1: 100
IL-5 FITC # 9906 32 НИОКР 1: 100
IL-17A Alexa Fluor® 647 BL168 Мышь IgG1, κ BioLegend IF PE / Cy7 4S.B3 Мышь IgG1, κ BioLegend 1: 100
2.11. Цитокиновые анализы
Концентрации IL-4, IL-5, IL-13, IL-17A и IFN-γ в сыворотке крови и назальном секрете определяли с использованием наборов Multiplex на основе Luminex (Millipore) в соответствии с протокол производителя [24]. Уровни ECP (CUSABIO Life Sciences, Ухань, Китай) и EPX (CUSABIO Life Sciences, Ухань, Китай) измеряли с использованием имеющихся в продаже наборов для ELISA.Для удобства анализа все значения ниже обнаруживаемого предела считались нулевыми [24]. Пределы обнаружения для анализа на основе Luminex и ELISA перечислены в таблице 2.
9034 9034
Целевой Предел обнаружения Производитель
1,83 пг / мл Мультиплексор на основе Millipore Luminex
IL-5 0.49 пг / мл Мультиплексор на основе Millipore Luminex
IL-13 0,24 пг / мл Мультиплексор на основе Millipore Luminex
IL-17A 0,73 пг / мл 9035 мультиплекс
IFN- γ 0,61 пг / мл Мультиплексор на основе Millipore Luminex
ECP 1,56 нг / мл CUSABIO Life Sciences
.12 нг / мл CUSABIO Life Sciences
2.12. Статистический анализ
Все статистические анализы были выполнены с помощью GraphPad Prism Software 7.0 (GraphPad Software, La Jolla, California, USA). Если специально не указано иное, данные экспрессии представлены в виде точечных диаграмм. Символы представляют отдельные выборки, горизонтальные полосы представляют собой медианное значение, а полосы ошибок показывают межквартильный диапазон. Тест Краскела-Уоллиса использовался для оценки значительной межгрупповой изменчивости среди более чем 2 групп, а двухсторонний тест Манна-Уитни использовался для сравнения между группами.Данные клеточных культур выражаются и анализируются с помощью непарного теста Стьюдента и однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA), если не указано иное. Для категориальных данных использовался критерий хи-квадрат или точный критерий Фишера. Для анализа ассоциаций использовался анализ ранговой корреляции Спирмена. значение менее 0,05 считалось статистически значимым.
3. Результаты и обсуждение
3.1. Демографические и клинические характеристики
С января 2018 г. по декабрь 2018 г. в когортном исследовании принимали участие 10 пациентов с аллергическим ринитом легкой и средней степени тяжести и 21 пациент с аллергическим ринитом средней и тяжелой степени и 10 здоровых лиц без аллергии в возрасте от 20 до 31 года (таблица 3).Согласно классификации ARIA [1], все пациенты с АР средней и тяжелой степени имели стойкую АР, и только 2 из 10 субъектов АР имели периодическую АР (таблица 3). У умеренно-тяжелых пациентов медиана TNSS составляла 7, тогда как у пациентов с легкой степенью тяжести медиана TNSS составляла 1 (рисунок S1A). Как и ожидалось, уровни Der p-специфического IgE в сыворотке были значительно выше у пациентов средней и тяжелой степени, чем у пациентов легкой степени (таблица 3). Между тремя исследованными группами не было различий по полу, возрасту и курению (таблица 3).
2/8
Контрольная группа здоровых Легкая АР Умеренно-тяжелая АР значение
—
Пол, мужской / женский 4/6 7/3 11/10 0,399
Возраст (лет) 24 (22, 25) 25 (22 , 26.25) 23 (22, 25,5) 0,552
История курения (%) 1 (10) 0 0 0,204
Прерывистый / постоянный 0/21 —
SPT к Der p Отрицательный Положительный Положительный —
Общий IgE (KU / л) 53,1 (KU / l) 53,1 ( 99,9 (81.7, 118,1) 137,6 (82,2, 193) 0,000
Специфический IgE к Der p (KU / л) 0,07 (0,04, 0,15) 23,0 (7,48, 47,53) 65,0 (13,65 , 99,2) 0,000
Для непрерывных переменных данные выражаются через медианы и межквартильные интервалы. АР: аллергический ринит; SPT: кожный укол; Der p: Dermatophagoides pteronyssinus ; Ig: иммуноглобулин.
3.2. Клиническая тяжесть аллергического ринита коррелирует с уровнями эозинофилов в крови и носу
Мы обнаружили, что уровни эозинофилов в крови были значительно выше при легком и умеренно-тяжелом аллергическом рините по сравнению со здоровыми людьми из контрольной группы. Кроме того, пациенты средней и тяжелой степени имели более высокие уровни эозинофилов в крови, чем пациенты легкой степени (рис. 1 (а)). Интересно, что увеличение общего количества назальных клеток и эозинофилов наблюдалось только у пациентов со средней и тяжелой степенью тяжести (рисунок 1 (c) и рисунок S1B-C).Кроме того, TNSS достоверно коррелировал с количеством эозинофилов в крови и носу у пациентов с аллергическим ринитом (и 0,747, соответственно) (рисунки 1 (b) и 1 (d)).
Мы также измерили уровни цитокинов Th3 в сыворотке и выделениях из носа. Концентрации ИЛ-4 и ИЛ-5 в сыворотке крови, а также ИЛ-5 и ИЛ-13 в носовых секретах были значительно увеличены у субъектов с легким и умеренно-тяжелым аллергическим ринитом по сравнению со здоровым контролем (Рисунки 1 (e) и 1 (f). )). Однако мы обнаружили, что только пациенты средней и тяжелой степени имели значительно более высокие уровни ИЛ-4 в сыворотке, чем пациенты с легкой степенью тяжести (рис. 1 (е)).Мы не обнаружили значительных различий в уровнях IL-13 в сыворотке и уровнях IL-4 в назальных выделениях между тремя группами (Рисунки 1 (e) и 1 (f)). Кроме того, не было значительной разницы в уровнях IL-17A и IFN-γ в крови и носовых секретах между тремя группами (данные не показаны).
3.3. Доля активированных эозинофилов увеличивается при аллергическом рините средней степени тяжести
Далее мы проанализировали статус активации эозинофилов при аллергическом рините.На рисунках 2 (а) и 2 (с) показаны стратегии стробирования, используемые для характеристики профиля активированных эозинофилов в крови и носу. Неожиданно мы обнаружили, что процентное содержание и количество эозинофилов CD44 ⁺ и CD69 ⁺ в крови были увеличены только у умеренно-тяжелых пациентов по сравнению со здоровым контролем. Большинство эозинофилов в носовых щеточках экспрессировали как CD44, так и CD69, хотя процентное содержание эозинофилов CD44 ⁺ и CD69 ⁺ было значительно увеличено как у пациентов с легкой, так и у умеренно-тяжелой степени по сравнению со здоровым контролем (рис. 2 (d)).Однако количество эозинофилов CD44 ⁺ и CD69 ⁺ в носовых щетках было увеличено у пациентов с умеренной и тяжелой степенью тяжести, но не у пациентов с легкой степенью тяжести (рис. 2 (d)). TNSS значительно положительно коррелировал с количеством эозинофилов CD44 ⁺ и CD69 ⁺ в крови и носу (рисунок S3A-B).
3.4. Патогенные эозинофилы повышены у пациентов с умеренно-тяжелым аллергическим ринитом
Недавние исследования показали, что CD101 и CD274 являются маркерами зрелых и активированных патогенных эозинофилов у астматиков и эозинофильных эзофагитов [21, 27, 28]; Поэтому мы исследовали эозинофилы CD101 ⁺ и CD274 ⁺ при аллергическом рините.Как и другие аллергические заболевания [21], большинство эозинофилов в периферической крови и в носовых кистях были CD101 ⁺ (рисунок S2A-B). Однако мы обнаружили, что количество эозинофилов CD101 ⁺ в крови и носу было увеличено только у умеренно-тяжелых пациентов по сравнению со здоровым контролем (рисунки 3 (b) и 3 (d)). Кроме того, хотя пациенты как легкой, так и умеренно-тяжелой степени имели больше эозинофилов CD274 ⁺ в крови, чем здоровые люди в контрольной группе (рисунки 3 (b) и 3 (d)), их процентное содержание в крови и носу, а также их количество в крови. носовые щетки были увеличены только у пациентов средней и тяжелой степени (Рисунки 3 (b) и 3 (d) и Рисунок S2A-B).Неожиданно мы также обнаружили, что процентное содержание и количество CD101 ⁺ CD274 ⁺ двойных положительных эозинофилов в крови и носу были увеличены только у умеренно-тяжелых пациентов по сравнению со здоровым контролем (Рисунки 3 (b) и 3 (d) и рисунок S2A-B). Кроме того, TNSS значительно положительно коррелировал с CD101 ⁺ CD274 ⁺ двойными положительными эозинофилами в крови и носу (рисунок S3A-B).
3.5. Уровни предшественников эозинофилов в периферической крови повышаются у пациентов с умеренно-тяжелым аллергическим ринитом
Предыдущие исследования предполагали роль предшественников в аллергических заболеваниях, включая бронхиальную астму и аллергический ринит [29, 30]; Затем мы оценили количество клеток-предшественников лейкоцитов и клеток-предшественников эозинофилов в периферической крови исследуемых субъектов.Интересно, что абсолютные количества предшественников лейкоцитов и предшественников эозинофилов в крови были увеличены только у субъектов средней и тяжелой степени по сравнению со здоровым контролем (Рисунки 4 (a) и 4 (b)). Уровни циркулирующих предшественников эозинофилов достоверно положительно коррелировали с TNSS (рис. 4 (c),). Однако не было значимой корреляции между количеством предшественников лейкоцитов и TNSS (рис. 4 (c)).
3.6. Эозинофилы крови субъектов с умеренно-тяжелым аллергическим ринитом продуцируют больше белков в виде гранул и обладают емкостью Pro-Th3
Затем мы измерили уровни ECP и EPX, двух важных эозинофильных гранулярных белков, участвующих в патогенезе аллергического ринита, в сыворотке и обнаружили, что, в соответствии с уровнями патогенных эозинофилов, уровни ECP и EPX в сыворотке были значительно увеличены только у умеренно-тяжелых пациентов по сравнению со здоровым контролем, хотя наблюдались тенденции к увеличению у легких пациентов (рис. 5 (а)). .Кроме того, уровни ECP в сыворотке положительно коррелировали с TNSS и количеством CD44 ⁺, CD69 ⁺ и CD101 ⁺ CD274 ⁺ эозинофилов в крови (0,47, 0,414 и 0,386 соответственно) ( Рисунок S4A). Положительные корреляции также наблюдались между уровнями EPX в сыворотке и TNSS и количеством эозинофилов CD101 ⁺ CD274 ⁺ (и 0,403, соответственно) в крови (рисунок S4B). Наблюдалась тенденция к корреляции между уровнями EPX в сыворотке и количеством эозинофилов CD69 ⁺ в крови (,) (Рисунок S4B).
Далее мы провели эксперимент по дегрануляции эозинофилов, чтобы сравнить потенциал эозинофилов в продукции эозинофильных гранулярных белков между тремя группами. Демографические данные субъектов, использованных в эксперименте in vitro, представлены в таблице 4. В результате мы обнаружили, что эозинофилы крови, полученные от пациентов с умеренной и тяжелой степенью тяжести, продуцировали больше ECP и EPX, индуцированных CCL11, по сравнению с эозинофилами крови пациентов с легкой степенью тяжести и здоровых элементы управления (рисунок 5 (б)). Интересно отметить, что не было значительных различий в продукции ECP и EPX между эозинофилами, полученными от пациентов с легкой степенью тяжести и здоровых людей из контрольной группы (рис. 5 (b)).
Контрольная группа здоровых Легкая АР Умеренно-тяжелая АР значение
—
Пол, мужской / женский 2/2 2/2 2/2 —
Возраст (лет) 22,5 (22, 25,25) 25.5 (22,75, 26,75) 25,5 (22, 30,5) 0,665
История курения (%) 0 0 0 —
SPT 9034 Отрицательный 9034 Положительный Положительный —
Общий IgE (КЕ / л) 29,3 (12,1, 46,5) 95,2 (87,5, 102,9) 180,1 (113,8, 246,4) 0,001 0,001 Специфический IgE к Der p (KU / l) 0.05 (0,04, 0,06) 27,8 (10,95, 43,98) 76,35 (32,68, 94,3) 0,001
9000квартальные данные для непрерывных переменных и промежуточных значений. . АР: аллергический ринит; SPT: кожный укол; Der p: Dermatophagoides pteronyssinus ; Ig: иммуноглобулин.
Исследования показали, что эозинофилы могут способствовать ответу 2 типа при определенных обстоятельствах [18, 31].Очень интересно узнать, обладают ли эозинофилы от аллергического ринита про-Th3-способностью. Таким образом, мы выполнили совместное культивирование CD4 ⁺ Т-клеток с эозинофилами крови, полученными от здоровых контролей, пациентов с легкой степенью тяжести и пациентов с умеренной и тяжелой степенью тяжести в присутствии анти-CD3 / 28 в течение пяти дней. Результаты показали, что CD4 ⁺ Т-клетки продуцировали больше IL-4 только при совместном культивировании с эозинофилами от умеренно-тяжелых пациентов по сравнению со здоровыми контрольными и мягкими пациентами (рисунки 6 (a) и 6 (b)).Не было значительного различия в экспрессии IL-5, IL-13, IL-17A и IFN-γ в Т-клетках CD4 ⁺ между сокультурами с эозинофилами из трех групп (данные не показаны).
4. Обсуждение
Связь между эозинофилами и заболеваниями, связанными с типом 2, такими как бронхиальная астма и аллергический ринит, хорошо установлена [10]. Хотя знания о функции эозинофилов постоянно растут, до сих пор точно не известно, когда и как они связаны с развитием тяжести аллергических заболеваний.Предыдущие исследования показали, что количество эозинофилов коррелирует с клиническими симптомами, такими как гиперактивность носа и заложенность носа, у пациентов с аллергическим ринитом [12, 32]. Кроме того, другое исследование обнаружило значительное увеличение общего количества эозинофилов и количества активированных эозинофилов в носу у пациентов с аллергическим ринитом на пыльцу трав после 2 недель ежедневного заражения аллергеном [33]. В настоящем исследовании мы расширили предыдущую работу, чтобы проанализировать активированные и патогенные фенотипы эозинофилов у пациентов с HDM-аллергическим ринитом в соответствии с их различным статусом тяжести заболевания.Новое открытие состоит в том, что уровни активированных (CD44 ⁺ и CD69 ⁺) и патогенных (CD101 ⁺ CD274 ⁺) эозинофилов были особенно выше у субъектов с умеренно-тяжелым аллергическим ринитом HDM по сравнению с умеренным ринитом. пациентов и здоровых людей из контрольной группы и положительно коррелировали с уровнями TNSS и сывороточного ECP у субъектов с аллергическим ринитом. Более того, эозинофилы крови, полученные от умеренно-тяжелых пациентов, проявляли большую способность продуцировать ECP и EPX, индуцированные CCL11 и способствующие дифференцировке Th3, чем у пациентов с легкой степенью тяжести и здоровых людей из контрольной группы.Насколько нам известно, эти данные являются первым доказательством различия функционального состояния эозинофилов у пациентов с аллергическим ринитом в зависимости от тяжести заболевания. Важно отметить, что наше исследование сначала показало более сильную способность эозинофилов стимулировать Th3-ответ у пациентов с аллергическим ринитом средней и тяжелой степени тяжести, предлагая новый возможный механизм воздействия эозинофилов на прогрессирование тяжести аллергического ринита.
CD44 и CD69 — два основных маркера активации эозинофилов человека, хотя были исследования, предполагающие, что они представляют разные типы активации [34, 35].В настоящем исследовании мы обнаружили, что большинство эозинофилов в носовых щетках были CD44 и CD69 положительными. Эти результаты в значительной степени согласуются с предыдущими исследованиями, показывающими, что эозинофилы, полученные из жидкости бронхоальвеолярного лаважа пациентов с эозинофильными заболеваниями дыхательных путей, экспрессируют более высокие уровни CD44 и CD69, чем в периферической крови [36, 37]. В совокупности эти результаты показывают, что эозинофилы в дыхательных путях были активнее, чем в крови. Сообщалось, что экспрессия CD44 и CD69 на эозинофилах повышалась в ЖБАЛ и мокроте после заражения легочным аллергеном [38, 39].В соответствии с этими исследованиями, мы обнаружили, что процентное содержание и количество эозинофилов CD44 ⁺ и CD69 ⁺ в крови, а также количество назальных эозинофилов CD44 ⁺ и CD69 ⁺ были значительно увеличены только в умеренно- тяжелые пациенты, предполагая, что эозинофилы крови активируются и экстравазируются в нос, когда субъекты сталкиваются со стимуляцией аллергеном.
Недавно связь между специфическими поверхностными фенотипами и функциями эозинофилов была продемонстрирована на мышиных моделях аллергического воспаления.Было показано, что подмножество эозинофилов, экспрессирующих высокий уровень CD101, способствует воспалительной реакции в легких мышей после заражения HDM [27]. Совсем недавно исследования показали, что CD101 ⁺ CD274 ⁺ эозинофилов индуцировались в крови пациентов с эозинофильным эзофагитом и аллергической астмой, и их уровни были положительно связаны с тяжестью заболевания [21, 40]. Кроме того, CD101 ⁺ CD274 ⁺ эозинофилов были ответственны за индуцированное IL-18 аллергическое воспаление кишечника у мышей, демонстрируя, что CD101 и CD274 являются маркерами патогенных эозинофилов [28].В соответствии с этими исследованиями, наше исследование также показало, что большинство эозинофилов экспрессируют CD101. Однако количество эозинофилов CD101 ⁺ и CD101 ⁺ CD274 ⁺ как в периферической крови, так и в носу было увеличено только у умеренно-тяжелых пациентов по сравнению с умеренными пациентами и здоровыми людьми из контрольной группы. Кроме того, у субъектов с аллергическим ринитом наблюдалась положительная корреляция между TNSS и количеством CD101 ⁺ CD274 ⁺ эозинофилов в крови и носу.Взятые вместе, эти результаты предполагают, что эозинофилы субъектов с умеренно-тяжелым аллергическим ринитом обладают повышенной патогенностью, и эти патогенные эозинофилы могут участвовать в прогрессировании тяжести заболевания аллергического ринита. Более того, будет очень интересно расшифровать отдельный механизм, с помощью которого эозинофилы управляют симптомами, связанными с легким аллергическим ринитом. Будущие исследования с использованием высокопроизводительного подхода RNA-seq для характеристики транскрипционного профилирования эозинофилов могут быть полезны в решении этой проблемы.
Патогенная роль эозинофилов у субъектов средней и тяжелой степени также подтверждается функциональными экспериментами in vitro нашего исследования, показывающими, что эозинофилы крови, полученные от пациентов средней и тяжелой степени, продуцируют больше ECP и EPX, индуцированных CCL11, с возможностью стимулирования Th3. ответ in vitro по сравнению с таковыми у пациентов с легкой степенью тяжести и здоровых людей из контрольной группы (рисунки 5 и 6). ECP и EPX, а также основной основной белок и нейротоксин, происходящий из эозинофилов, представляют собой катионные белки, обогащенные эозинофильными гранулами человека [41].Производство и биологическая активность этих катионных белков были в центре внимания изучения эффекторных функций эозинофилов. Сообщалось, что высвобождение белков гранул эозинофилов в легких, страдающих астмой, было связано с патогенезом ремоделирования легких и гиперреактивности дыхательных путей [42–44]. Более того, недавние исследования показали, что продукция эозинофилов цитокином Th3 IL-13 необходима для про-Th3 функций эозинофилов при эозинофильных патологиях легких [45, 46]. В совокупности эти данные позволяют предположить, что активность эозинофилов, вероятно, способствует развитию аллергического воспаления на многих уровнях у пациентов с аллергическим ринитом средней и тяжелой степени тяжести.
Клетки-предшественники эозинофилов мигрируют из костного мозга и могут дифференцироваться периферически, обеспечивая постоянный источник зрелых эозинофилов в воспаленных дыхательных путях астматиков [47]. Появляется все больше доказательств, указывающих на важную роль предшественников эозинофилов в аллергическом воспалении как на моделях человека, так и на животных [48]. Исследования показали, что количество предшественников эозинофилов увеличивалось в периферической крови у пациентов с астматиками и аллергическим ринитом. Более того, уровни предшественников эозинофилов были повышены в легких и мокроте у пациентов с астмой после провокации аллергеном [30, 49].Однако на сегодняшний день нет клинических исследований, изучающих взаимосвязь предшественников эозинофилов в периферической крови с тяжестью аллергического ринита. Наши результаты показали, что абсолютное количество предшественников лейкоцитов и предшественников эозинофилов в крови увеличивалось только у пациентов средней и тяжелой степени (Рисунки 4 (a) и 4 (b)). Кроме того, была обнаружена значимая положительная корреляция между уровнями циркулирующих предшественников эозинофилов и TNSS. Эти данные свидетельствуют о прямом вкладе предшественников эозинофилов в эозинофилию крови во время прогрессирования тяжести аллергического ринита, тем самым продвигая концепцию предшественников эозинофилов как клинически полезного биомаркера тяжести заболевания при аллергическом рините.
Несколько возможных объяснений могут быть ответственны за несоответствие уровней IL-4 и IL-13 между носовыми выделениями сыворотки (Рисунки 1 (e) –1 (f)). Во-первых, несоответствие может отражать различную эффекторную функцию IL-4 и IL-13 в крови и верхних дыхательных путях. Например, IL-4 в основном действует, чтобы вызвать переключение класса B-клеток на IgE в зародышевых центрах, тогда как IL-13 вызывает гиперплазию бокаловидных клеток и гиперсекрецию слизи в дыхательных путях. Во-вторых, у пациентов с АР наблюдается общее повышение уровня IL-4 в назальной сыворотке и IL-13 в сыворотке; поэтому нельзя исключать методологические причины, такие как низкая чувствительность обнаружения мультиплекса на основе Luminex и относительно небольшой размер выборки настоящего исследования.В будущем необходимы более масштабные исследования.
Явным ограничением настоящего исследования является то, что мы проводили только исследование in vitro. До сих пор неизвестно, действительно ли эозинофилы у пациентов со средней и тяжелой степенью патогенности имеют более высокую патогенность. Это ограничение может быть рассмотрено в будущей работе на животных моделях аллергического воспаления дыхательных путей. Кроме того, размер выборки относительно невелик, поскольку мы не наблюдали нескольких ожидаемых корреляций, таких как уровни EPX в сыворотке и количество эозинофилов CD44 ⁺ и CD69 ⁺ в крови (рис. 4).Также следует отметить, что корреляция между уровнями ECP и EPX в сыворотке крови и количеством эозинофилов CD69 ⁺ и CD101 ⁺ CD274 ⁺ была относительно слабой, хотя значения были менее 0,05 (рисунок S4). Более того, из-за в значительной степени описательного характера нашего исследования следует проявлять осторожность при интерпретации и обобщении наших результатов. Эти ограничения могут быть устранены с помощью крупных проспективных лонгитюдных исследований.
В заключение, наше исследование показывает, что повышенные уровни активированных и патогенных эозинофилов являются признаком умеренно-тяжелого аллергического ринита и связаны с более высокой продукцией ECP, EPX и IL-4 в периферической крови.
Доступность данных
Данные, использованные для подтверждения результатов этого исследования, можно получить у соответствующего автора по запросу.
Конфликт интересов
Авторы не заявляют о конфликте интересов.
Вклад авторов
Ян Чен и Мэн Ян внесли равный вклад в эту работу.
Благодарности
Мы благодарны медсестрам Оториноларингологической больницы, Первой дочерней больницы Университета Сунь Ятсена, за сбор образцов крови.Это исследование было поддержано грантами Национального фонда естественных наук Китая (81873691, 81970854, 81770975 и 81800884), Фондов фундаментальных исследований для центральных университетов Министерства образования Китая (19ykpy69), Базового и прикладного базового курса провинции Гуандун. Исследовательский фонд (2020A1515010134) и Программа науки и технологий Гуанчжоу, Китай (201803010110).
Дополнительные материалы
Рисунок S1: увеличение TNSS, общего количества клеток и эозинофилов у субъектов с умеренно-тяжелым аллергическим ринитом.(а) TNSS. (b) Общее количество клеток в носу при чистке носа. (c) Репрезентативные изображения иммунофлуоресцентного окрашивания, показывающие, что эозинофилов (ECP + клетки, зеленый цвет) в носу увеличивается у пациентов со средней и тяжелой степенью тяжести. TNSS: общая оценка назальных симптомов; HC: здоровый контроль; M-AR: легкий аллергический ринит; MS-AR: аллергический ринит средней степени тяжести; ECP: катионный белок эозинофилов; DAPI: 4,6-диамидино-2-фенилиндол (синий). Фигура S2: процентное содержание эозинофилов, экспрессирующих CD101, CD274 и CD101, и CD274, в периферической крови (а) и в носу (b).HC: здоровый контроль; M-AR: легкий аллергический ринит; MS-AR: аллергический ринит средней степени тяжести. Рисунок S3: взаимосвязь между TNSS и подгруппами эозинофилов у пациентов с аллергическим ринитом.